TMEM219抗体及其治疗性用途制造技术

本申请涉及TMEM219抗体及其治疗性用途。本发明专利技术涉及特异性结合至IGFBP3受体(即TMEM219)的抗体或其抗原结合片段，涉及其生产方法、包含所述抗体的药物组合物及其用途。包含所述抗体的药物组合物及其用途。

【技术实现步骤摘要】
TMEM219抗体及其治疗性用途
[0001]本申请是中国专利申请号202080077088.0的分案申请。


[0002]本专利技术涉及特异性结合至IGFBP3受体(即TMEM219)的抗体或其抗原结合片段，涉及其生产方法、包含所述抗体的药物组合物及其用途。

技术介绍

[0003]IGFBP3/TMEM219轴
[0004]胰岛素样生长因子结合蛋白是一个由七种结合蛋白组成的家族，调节胰岛素样生长因子(IGF)的生物利用度。其中IGFBP3最为丰富，几乎存在于所有组织中，并且对IGF具有较高的亲和力；事实上，大约80
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90％的IGF结合IGFBP3且与酸不稳定亚基(ALS)形成三元复合物的形式(1)。
[0005]除了能够调节IGF利用度外，IGFBP3也被证明具有IGF
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非依赖性功能(2)。事实上，它能够与细胞表面蛋白、具有整体信号转导能力的细胞表面受体、细胞内和核蛋白(转录因子)相关联，从而影响细胞生长和直接诱导细胞凋亡(2)。在死亡受体中，TMEM219，一种单跨膜蛋白，被证明与IGFBP
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3高结合(3)。IGFBP3与TMEM219的结合在各种细胞中诱导胱天蛋白酶
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8介导的凋亡，包括癌细胞(即前列腺和乳腺)(3)，但也包括干细胞(即结肠干细胞)(4)。用不同的策略阻断或增强IGFBP3/TMEM219轴已被证明分别防止或增加细胞死亡。据我们所知，目前还没有市售可得的针对TMEM219或IGFBP3的单克隆抗体能够在IGFBP3结合至TMEM219的靶组织/细胞上阻止IGFBP3/TMEM219结合，停止IGF
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I非依赖性和胱天蛋白酶
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8介导的有害影响。
[0006]糖尿病中的IGFBP3/TMEM219轴
[0007]1型糖尿病(T1D)和2型糖尿病(T2D)的特征都是β细胞损失，导致胰岛素分泌减少、血糖水平无法控制和高血糖(5，6)。且不论不同的病因机制，无论是T1D中的自身免疫应答或T2D中的胰岛素抗性/炎症都导致β细胞群的逐步减少。事实上，显而易见的是，发生的自身免疫激活似乎并不足以完全解释T1D中的β细胞损失(5)。此外，免疫疗法未能治愈T1D(7)突出了：(i)自身免疫可能不是T1D病理的唯一因素，并且(ii)需要针对不同疾病机理(如β细胞损失)的替代策略，以建立T1D的有效治疗。在长期存在T1D的个体中检测到分散的β细胞(8)证实了新的β细胞必须持续出现以保持β细胞的更新(5，9)，或者被破坏的β细胞可能是“不同的”并且容易死亡(10)。这可能表明，表面β细胞受体的上调/下调表达可能在使其为免疫系统可见到方面具有关键作用，更重要的是，其他非免疫学决定因素可能调节β细胞的命运和功能。因此，防止T1D中非免疫性β细胞破坏和T2D中β细胞的进行性损失可能会使β细胞产生和破坏之间的平衡偏向于恢复适当的β细胞群，从而为能够中止或延迟疾病的第一阶段的新治疗方法铺平道路。
[0008]研究表明，IGFBP3受体TMEM219在β细胞系和人/鼠胰岛中表达，其连接对β细胞具有毒性。有趣的是，还观察到人IGFBP3转基因小鼠发展出高血糖，显示胰岛量减少，且显示
对胰岛素
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葡萄糖刺激的反应降低(11)，而那些被敲除IGFBP3的小鼠在糖代谢控制方面没有任何改变(12)。
[0009]在人中，Drogan和他的同事最近发表了一篇文章，认为IGFBP3循环水平的升高与T2D的发生有关(13)。此外，Diabimmune研究小组最近的一项研究表明，IGFBP3水平与处于T1D风险中儿童的自身抗体阳性和血清转换的时机相关，从而表明循环IGFBP3在β细胞自身免疫的早期发展中的作用(14)。
[0010]TMEM219，IGFBP3受体，已经被描述为一种死亡受体，其激活会触发靶细胞内胱天蛋白酶8介导的凋亡，从而导致其损失(4)。
[0011]炎性肠病中的IGFBP3/TMEM219轴
[0012]肠干细胞(ISC)位于小肠和大肠隐窝的底部，控制隐窝的再生和转换。特别地，ISC可以沿着隐窝分化，生成杯状细胞、肠上皮细胞、肠内分泌细胞(4)。
[0013]炎性肠病(IBD)是一种免疫介导的慢性疾病，包括克罗恩病(CD)和溃疡性结肠炎(UC)两种临床实体，影响了欧洲近250万人和美国近100万人(15)。IBD的发病机制仍在研究中，但最近的证据表明ISC向潘氏细胞、在回肠CD中和朝向UC杯状细胞的分化受损可能在IBD的发病中起关键作用。特别是，粘膜中的局部信号传导和炎症途径都对外部刺激有响应，并保持ISC的数量和功能，从而维持肠道内稳态(16)。事实上，最近Yancu等人发表了支持IGFBP
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3在CD中的作用的结果。事实上，他们证明了，IGFBP3的敲除在右旋糖酐硫酸钠(Dextran
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Sodium
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Sulphate)(DSS)结肠炎鼠模型中具有调节炎症的作用(17)。
[0014]专利技术人最近发现，胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP3)受体，称为TMEM219受体，在ISC上表达，并且它与循环激素IGFBP3的相互作用控制着ISC在糖尿病肠道疾病和糖尿病性肠病模型中的命运和功能(4)。由于糖尿病性肠病和IBD具有共同的特点，如肠干细胞(ISC)稳态改变和粘膜形态改变，这些结果可能为当前未知的IBD发病机制提供重要的认识，并可能导向IBD治疗的新疗法引入。
[0015]目前对IBD的有效治疗基于抗炎和免疫治疗策略的使用，这些策略会因一些不良反应而加重，其长期疗效仍值得怀疑。外科手术也成功地应用于疾病的晚期状态，尤其是UC中(15)。大部分在CD中复发的疾病也很常见，因此凸显了对不同的治疗方法的需求。因此，鉴定治疗IBD的新的治疗靶标和策略对公共卫生来说具有高度的临床相关性和需求。
[0016]WO2016193497和WO2016193496(通过引用全文纳入本文)描述了TMEM219胞外结构域，外
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TMEM(ecto
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TMEM)，作为一种有效的治疗剂。然而，受体构建体作为治疗剂不如抗体理想。因此，仍然需要其他治疗剂，模拟外
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TMEM的作用的抗体或其衍生物。
[0017]专利技术概述
[0018]本文公开了以高亲和力和特异性结合至人外
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TMEM(TMEM的胞外结构域)并且能够减少或消除IGFBP3与其同源受体TMEM219的结合，而自身在结合时不激活TMEM219通路的抗体。这种中和抗体可用于治疗其中IGFBP3与TMEM219结合导致疾病病理的疾病，包括糖尿病性肠病、炎性肠病(IBD)(例如溃疡性结肠炎和克罗恩病)和1型或2型糖尿病。这种中和抗体提供有利的治疗剂，其具有与基于受体的配体阱(外
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TMEM219)相似的治疗活性。
[00本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分离的抗体或其抗原结合片段，其结合至人TMEM219受体并抑制或减少IGFBP3对所述TMEM219受体的结合。2.如权利要求1所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其抑制、减少或中和由IGFBP3的结合诱导的TMEM219受体的激活。3.如权利要求1或2所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其结合至人TMEM219后不激活TMEM219通路。4.如前述权利要求中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其有效地保护糖尿病对象的β细胞和/或防止胰岛被破坏，和/或在体内模型中控制血糖水平。5.如前述权利要求中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其在体内模型中有效地减少急性结肠炎。6.如前述权利要求中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其具有选自以下的至少一种活性：a
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IGFBP3处理的健康对象迷你肠生长增加；b
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IBD患者迷你肠生长增加；c
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糖尿病性肠病血清治疗的健康对象迷你肠生长增加；d
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IGFBP3处理的健康对象迷你肠中EphB2和/或LGR5表达增加；e
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在IGFBP3处理的健康对象迷你肠中胱天蛋白酶8表达的降低；f
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IGFBP3处理的β细胞中β细胞损失的减少；g
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IGFBP3处理的β细胞中胰岛素表达增加；h
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DSS
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诱导的肠细胞凋亡抑制或减少；i
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DSS
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处理的结肠中PCNA的表达恢复；j
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IGFBP3处理的β细胞中β细胞凋亡减少；k
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糖尿病动物模型中胰腺炎评分降低；l
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糖尿病动物模型中糖尿病发病率降低；m
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保护糖尿病动物模型中β细胞损伤；n
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防止糖尿病动物模型中的β细胞损失。7.如权利要求6所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中a)、b)和c)的增加为至少20％；d)和e)的增加为至少30％，优选至少50％；f)的减少和g)的增加为至少10％。8.如前述权利要求中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其包括：a.重链可变结构域(VH)，其包括：i.选自下组的氨基酸序列的CDR1序列：SEQ ID NO:4、1、8、10、56、59、62、65和68；ii.选自下组的氨基酸序列的CDR2序列：SEQ ID NO:5、2、11、57、60、63、66和69；和iii.选自下组的氨基酸序列的CDR3序列：SEQ ID NO:6、3、7、9、12、13、58、61、64、67和70；和/或b.轻链可变结构域(VL)，其包括：i.选自下组的氨基酸序列的CDR1序列：SEQ ID NO:17、14、20、23、26、29、71、77、80、82和85；ii.选自下组的氨基酸序列的CDR2序列：SEQ ID NO:18、15、21、24、27、30、72、78、83和86；和
iii.选自下组的氨基酸序列的CDR3序列：SEQ ID NO:19、16、22、25、28、31、73、74、75、76、79、81、84、87、166和167。9.如权利要求1
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8中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其包括：
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SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:19或TC01或TC05的Kabat、IMGT、Chothia、AbM、或Contact的CDR或
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SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:166或TC03的Kabat、IMGT、Chothia、AbM或Contact的CDR或
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SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:167或TC04的Kabat、IMGT、Chothia、AbM或Contact的CDR或
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SEQ ID NO:68和SEQ ID NO:69和SEQ ID NO:70和SEQ ID NO:85和SEQ ID NO:86和SEQ ID NO:87或TM1的Kabat、IMGT、Chothia、AbM或Contact的CDR。10.如权利要求1
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9中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其包括：a.重链可变结构域(VH)，其包括：i.选自下组的氨基酸序列的CDR1序列：使用abysis工具分析(www.abysis.org)定义的序列；ii.选自下组的氨基酸序列的CDR2序列：使用abysis工具分析(www.abysis.org)定义的序列；和iii.选自下组的氨基酸序列的CDR3序列：使用abysis工具分析(www.abysis.org)定义的序列；和/或b.轻链可变结构域(VL)，其包括：i.选自下组的氨基酸序列的CDR1序列：使用abysis工具分析(www.abysis.org)定义的序列；ii.选自下组的氨基酸序列的CDR2序列：使用abysis工具分析(www.abysis.org)定义的序列；和iii.选自下组的氨基酸序列的CDR3序列：使用abysis工具分析...

【专利技术属性】
技术研发人员：P，
申请(专利权)人：恩瑟拉有限责任公司，
类型：发明
国别省市：