一种肿瘤细胞-细菌融合材料及其制备方法与应用技术

本发明专利技术提供了一种肿瘤细胞

【技术实现步骤摘要】
一种肿瘤细胞
‑
细菌融合材料及其制备方法与应用


[0001]本专利技术属于生物医学
，涉及一种肿瘤细胞
‑
细菌融合材料及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]癌症免疫疗法可通过增强人体免疫系统的免疫功能，从而靶向并杀死肿瘤细胞，成为一种有前景的癌症治疗和预防方式。用于癌症免疫治疗的传统肿瘤疫苗包括蛋白质、DNA或RNA疫苗，这些疫苗均基于已知的肿瘤相关抗原(TAAs)进行设计。然而，迄今为止已知的肿瘤相关抗原种类有限。同时，癌细胞可以通过在细胞膜上主动产生新的抗原来逃避免疫识别，从而产生免疫逃逸以延迟、减少特异性免疫攻击。因此，开发个体全抗原疫苗是有意义的。癌细胞表达多种抗原，包括用于癌症疫苗的TAAs等。然而，直接肿瘤细胞表现出较弱的免疫反应，因为肿瘤表面存在的特异性抗原含量有限且细胞表面存在的免疫抑制分子(即PDL1)会导致免疫，从而降低了免疫系统的识别能力。
[0003]对此，研究人员开发了细菌衍生的癌症疫苗，通过促进适应性免疫来增强特异性抗肿瘤反应可一定程度上解决这个问题。国家纳米科学中心聂广军等通过将大肠杆菌的细胞膜和自体肿瘤细胞膜整合到纳米颗粒表面开发了一种个体癌症疫苗，该疫苗表现出较好的肿瘤特异性免疫反应。然而，肿瘤抗原包括膜蛋白和内体细胞内容物。用膜蛋白来代表肿瘤抗原是不够的。因此开发包含全肿瘤抗原的肿瘤疫苗非常有意义。除此之外，当细菌衍生的癌症疫苗促进肿瘤特异性免疫反应时，由细菌成分引起的急性毒性反应也不容忽视。因此，同时提高免疫反应效果和改善免疫治疗的安全性有着开阔的应用前景。
[0004]除了传统的疫苗方法，得益于基因测序和基因编辑的最新进展，有效的患者特异性细胞疗法(CAR
‑
T和树突状细胞疫苗)逐渐出现。CAR
‑
T和树突状细胞疫苗在临床上被证明是一种安全有效的免疫治疗方法。T细胞是体内重要的免疫细胞，可以直接杀死感染细胞或癌细胞，激活免疫反应。简而言之，CAR
‑
T疗法的本质是将嵌合抗原受体(CAR)引入T细胞，以产生特异性识别肿瘤的抗原特异性T细胞。一旦T细胞表达了这种受体，它们就可以特异性地杀死肿瘤细胞。然而，CAR
‑
T的制备周期长，操作复杂，而且很难在表面修饰大量的抗原识别。
[0005]树突状细胞作为机体内特化的抗原提呈细胞，能够消化大量的抗原提呈到表面，激活效应T细胞，从而杀伤肿瘤。载有TAAs的树突状细胞疫苗可以在体内引发抗原特异性免疫反应，这在临床研究中已被证明是一种更安全有效的免疫治疗策略。然而，生产呈递TAAs的树突状细胞工序复杂，并且产量和质量不一，此外，树突状细胞疫苗用于患者时也受限于其严格的储存条件。
[0006]因此，如何提供一种成本低、制备方法简单、安全性高、抗肿瘤效果好的新型疫苗产品，成为了本领域亟待解决的问题。

技术实现思路

[0007]针对现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种肿瘤细胞
‑
细菌融合材料及其制备方法与应用。
[0008]为达到此专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0009]第一方面，本专利技术提供一种肿瘤细胞
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细菌融合材料，所述肿瘤细胞
‑
细菌融合材料包括去除细菌壁的革兰氏阴性菌、肿瘤细胞的膜和肿瘤细胞的膜内物质。
[0010]优选地，所述去除细菌壁的革兰氏阴性菌的总蛋白量与肿瘤细胞中的总蛋白量的质量比为1:(5
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20)，优选为1:(10
‑
15)。
[0011]上述(5
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20)中的具体数值例如5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20等。
[0012]上述(10
‑
15)中的具体数值例如10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5、15等。
[0013]优选地，所述革兰氏阴性菌包括大肠杆菌、肺炎杆菌、布氏杆菌、变形杆菌或不动杆菌中的任意一种或至少两种的组合，所述至少两种的组合例如大肠杆菌和肺炎杆菌的组合、肺炎杆菌和布氏杆菌的组合、变形杆菌和不动杆菌的组合等，其他任意的组合方式均可。
[0014]优选地，所述肿瘤包括黑色素癌、乳腺癌、结肠癌、肝癌、胃癌、肾细胞癌、胰腺癌、卵巢癌或食道癌的任意一种或至少两种组合，所述至少两种的组合例如黑色素癌和乳腺癌的组合、结肠癌和肝癌的组合、胰腺癌和卵巢癌的组合等，其他任意的组合方式均可。
[0015]第二方面，本专利技术提供如第一方面所述的肿瘤细胞
‑
细菌融合材料的制备方法，所述方法包括：将去除细菌壁的革兰氏阴性菌与肿瘤细胞混合，超声，即得。
[0016]优选地，所述混合还包括与缓冲溶液混合，所述缓冲溶液包括Tris
‑
HCl溶液或PBS溶液。
[0017]优选地，所述Tris
‑
HCl溶液的浓度为20
‑
200mM，例如20mM、50mM、75mM、100mM、120mM、150mM、180mM、200mM等。
[0018]优选地，所述缓冲液中可以加入一种或两种以上蛋白酶抑制剂。
[0019]优选地，所述超声在0
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45℃下进行，超声时间为5
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15min，超声功率为100
‑
500W。
[0020]上述0
‑
45℃中的具体数值例如0℃、5℃、10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃、40℃、45℃等。
[0021]上述5
‑
15min中的具体数值例如5min、6min、7min、8min、9min、10min、11min、12min、13min、14min、15min等。
[0022]优选地，所述超声后还包括离心。
[0023]优选地，所述离心包括将超声后的溶液于800
‑
1500rpm离心5
‑
15min后，收集上清，于10000
‑
16000rpm离心20
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40min，收集沉淀。
[0024]优选地，所述离心的温度为0
‑
8℃。
[0025]优选地，所述肿瘤细胞
‑
细菌融合材料的制备方法包括：将去除细菌壁的革兰氏阴性菌、肿瘤细胞与缓冲溶液混合，于0
‑
45℃，100
‑
500W下超声5
‑
15min，将超声后的溶液于800
‑
1500rpm离心5
‑
15min后，收集上清，于10000
‑
16000rpm离心20
‑
40min，收集沉淀，即得。
[0026]优选地，所述去除细菌壁的革兰氏阴性菌的制备方法包括：将革兰氏阴性菌与本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种肿瘤细胞
‑
细菌融合材料，其特征在于，所述肿瘤细胞
‑
细菌融合材料包括去除细菌壁的革兰氏阴性菌、肿瘤细胞的膜和肿瘤细胞的膜内物质。2.如权利要求1所述的肿瘤细胞
‑
细菌融合材料，其特征在于，所述去除细菌壁的革兰氏阴性菌的总蛋白量与肿瘤细胞中的总蛋白量的质量比为1:(5
‑
20)，优选为1:(10
‑
15)；优选地，所述革兰氏阴性菌包括大肠杆菌、肺炎杆菌、布氏杆菌、变形杆菌或不动杆菌中的任意一种或至少两种的组合；优选地，所述肿瘤包括黑色素癌、乳腺癌、结肠癌、肝癌、胃癌、肾细胞癌、胰腺癌、卵巢癌或食道癌的任意一种或至少两种组合。3.如权利要求1或2所述的肿瘤细胞
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细菌融合材料的制备方法，其特征在于，所述方法包括：将去除细菌壁的革兰氏阴性菌与肿瘤细胞混合，超声，即得。4.如权利要求1或2所述的肿瘤细胞
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细菌融合材料在制备增强机体免疫功能的药物、抗肿瘤药物、促进抗原呈递细胞对肿瘤抗原进行摄取和呈递的药物或促进树突状细胞成熟的药物中的应用。5.一种负载肿瘤抗原的抗原呈递细胞，其特征在于，所述抗原呈递细胞包括树突状细胞或单核吞噬细胞；优选地，所述负载肿瘤抗原的抗原呈递细胞由包括如下步骤的方法制备得到：(1)从外周血或骨髓中获取抗原呈递细胞；(2)将抗原呈递细胞、细胞培养基与权利要求1或2所述的肿瘤细胞
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细菌融合材料混合，孵育，即得。6.如权利要求5所述的负载肿瘤抗原的抗原呈递细胞，其特征在于，所述细胞培养基包括葡萄糖和...

【专利技术属性】
技术研发人员：王海，张杰，黄文平，范彪，
申请(专利权)人：国家纳米科学中心，
类型：发明
国别省市：