一种用于猪流行性腹泻病毒的抗原抗体复合物疫苗及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种用于猪流行性腹泻的病毒抗原抗体复合物疫苗及其制备方法，属于兽用疫苗技术领域。所述抗原抗体复合物疫苗由体积比为1:5的猪流行性腹泻病毒抗原与猪流行性腹泻病毒抗体充分混合，加入终浓度为1000UI/mL的青霉素和1000ug/mL的链霉素，温度37℃条件下孵育2h获得。本发明专利技术抗原抗体复合物疫苗无需对抗原进行灭活，可使其中的活病毒得到有效保护，从而诱导免疫器官产生更多的免疫生发中心。复合物疫苗中抗体起着延缓病毒释放的作用，其中抗体的Fc片段使复合物更易被抗原提呈细胞捕获，从而引起免疫应答。本发明专利技术的病毒抗原抗体复合物疫苗既能突破母源抗体又能诱导高效价抗体，对哺乳仔猪、后备猪、母猪及其后代仔猪均具有良好的免疫效果和攻毒保护率。

【技术实现步骤摘要】
一种用于猪流行性腹泻病毒的抗原抗体复合物疫苗及其制备方法
本专利技术属于兽用疫苗
，具体涉及一种猪流行性腹泻病毒抗原抗体复合物疫苗及其制备方法。技术背景猪流行性腹泻病毒(porcineepidemicdiarrheavirus，PEDV)是一种能够引起猪的急性肠道传染病。感染猪主要症状为剧烈腹泻、呕吐和脱水；该病毒只感染猪，各种年龄和品种的猪均易感。PEDV的感染方式主要是通过被感染猪的粪便等经由消化道感染，其中受到的危害最严重的是哺乳仔猪，其发病死亡率高达80～100%，该病毒感染是导致仔猪早期死亡的主要疫病之一。我国最早在1976年首次报道该病的出现，在2010以后在我国多个省份爆发PEDV的感染，给我国的生猪养殖产业造成了巨大的经济损失。目前生产上对于PEDV的防控，主要是采用传统疫苗，包括组织灭活苗、细胞灭活苗及弱毒疫苗，这些疫苗在PEDV的防治中起着重要的作用，传统疫苗均是免疫母猪从而使哺乳期仔猪获得先天免疫或通过采食初乳获得被动性免疫，但由于疫苗接种不当或母猪的健康状况不良等因素致使疫苗接种后的母猪不能产生本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于猪流行性腹泻病毒的抗原抗体复合物疫苗，其特征在于：由体积比为1:5的猪流行性腹泻病毒抗原与猪流行性腹泻病毒抗体充分混合，加入终浓度为1000UI/mL的青霉素和终浓度为1000ug/mL的链霉素，温度37℃条件下孵育2h制得；/n所述猪流行性腹泻病毒抗原是将猪流行性腹泻临床病料的毒株接种vero细胞培养，传代至40～45代，所得到细胞半数感染量（TCID

【技术特征摘要】
1.一种用于猪流行性腹泻病毒的抗原抗体复合物疫苗，其特征在于：由体积比为1:5的猪流行性腹泻病毒抗原与猪流行性腹泻病毒抗体充分混合，加入终浓度为1000UI/mL的青霉素和终浓度为1000ug/mL的链霉素，温度37℃条件下孵育2h制得；
所述猪流行性腹泻病毒抗原是将猪流行性腹泻临床病料的毒株接种vero细胞培养，传代至40～45代，所得到细胞半数感染量（TCID50）为10-5/mL～10-6/mL的猪流行性腹泻病毒即为病毒抗原液；
所述猪流行性腹泻病毒抗体是将配制的猪流行性腹泻病毒灭活疫苗通过对实验猪的加强免疫，获得实验猪的血清抗体，抗体效价不低于1:128的血清抗体即为病毒抗体；
所述猪流行性腹泻临床病料的毒株已于2019年3月29日保藏于中国典型培养物保藏中心保存，保藏编号为CCTCCV201915。


2.根据权利要求1所述的一种用于猪流行性腹泻病毒的抗原抗体复合物疫苗的制备方法，其特征在于操作步骤如下：
（1）制备猪流行性腹泻病毒的病毒抗原液
（1.1）将浓度104/mL的vero细胞接种于25cm2的细胞培养瓶中，加入6mL含10%胎牛血清的DMEM培养基，温度37℃、浓度5%的二氧化碳气体条件下，通气培养2～3天；显微镜观察，当细胞铺满至90%时,用D-Hanks缓冲液清洗细胞面2次；
（1.2）将1mL种毒液接种于25cm2的细胞培养瓶，加入终浓度为5ug/mL的胰蛋白酶，混合均匀，温度37℃、浓度5%的二氧化碳气体条件下，通气孵育2h，每30分钟轻摇培养瓶1次；
（1.3）孵育完成，用D-Hanks缓冲液清洗细胞面1次，加入5mL无血清细胞培养液和终浓度为5ug/mL的胰蛋白酶，温度37℃、浓度5%的二氧化碳气体条件下，继续培养3-4天；
所述猪流行性腹泻临床病料的毒株以种毒液形式保藏于中国典型培养物保藏中心；
当细胞培养物出现明显的细胞核增大、细胞皱缩、脱落和溶解时，收集细胞和培养液，反复冻融3次，转速5000r/min条件下离...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈学怀，潘孝成，刘华，赵瑞宏，张丹俊，翟银建，戴银，胡晓苗，周学利，侯红艳，
申请(专利权)人：安徽省农业科学院畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：安徽;34