预防和治疗脑膜炎球菌性疾病的新型免疫原性组合物制造技术

本发明专利技术涉及奈瑟球菌属ORF2086蛋白、交叉反应免疫原性蛋白，可从奈瑟氏球菌属菌株分离或用重组方法制备，包括其免疫原性部分、其生物学等价物、免疫特异性结合上述蛋白质的抗体以及编码上述蛋白质的核酸序列，以及在有效对抗脑膜炎奈瑟氏球菌血清组B感染的免疫原性组合物中的应用。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及奈瑟氏球菌属0RF2086蛋白(亚科A和亚科B)，它可从奈瑟氏球菌属的菌株以及免疫原性部分和/或所述蛋白的生物学等价物分离，所述菌株包括脑膜炎奈瑟氏球菌(Neisseria meningitidis)(血清组 A、B、C、D、W-135、X、Y、Z 和 29Ε)、淋病奈瑟氏球菌(Neisseria gonorrhoeae)和乳糖奈瑟氏球菌(Neisseria lactamica)菌株。本专利技术还涉及免疫特异性结合所述蛋白质、免疫原性蛋白和/或生物学等价物的抗体。此外，本专利技术涉及分离含有编码任何上述蛋白质、免疫原性部分、生物学等价物和/或抗体的核酸序 列的多核苷酸。此外，本专利技术涉及免疫原性组合物及其在预防、治疗和/或诊断由脑膜炎奈瑟氏球菌引起的脑膜炎球菌感染，尤其是由脑膜炎奈瑟氏球菌血清组b引起的脑膜炎球菌性疾病中的应用，以及制备所述组合物的方法。本专利技术涉及重组形式和分离自天然来源的形式，以及脂质化和非脂质化的形式。
技术介绍
尽管可利用抗生素，但脑膜炎球菌性脑膜炎仍是一种可以使儿童和青少年在数小时内死亡的疾病。Pizza等，2000，Science 287:1816-1820。脑膜炎以脑膜发炎为特征，这会导致剧烈头痛、发烧、丧失食欲、对光和声不耐受、肌肉僵硬，尤其是颈部肌肉僵硬，严重时会导致抽搐、呕吐和谵妄，从而导致死亡。脑膜炎球菌性脑膜炎症状突然出现，最终将导致脑膜炎球菌性败血症，其特征为出血性皮疹。如果有任何存活机会都要紧急进行快速诊断和用大剂量抗生素立即治疗。《Bantam医学词典》(BantamMedical Dictionary),第三版，302，200。脑膜炎球菌性脑膜炎是由脑膜炎奈瑟氏球菌(脑膜炎球菌)引起的，这是一种革兰氏阴性、有荚膜的细菌，被分成几个病原血清组，包括A、B、C、D、W-135、X、Y、Z和29Ε。脑膜炎奈瑟氏球菌的血清组B菌株是全世界脑膜炎球菌性疾病的主要原因。例如医学文献中报道，在美国和欧洲，婴儿和儿童的细菌性脑膜炎约50%是由血清组b引起的。目前还没有预防由脑膜炎奈瑟氏球菌血清组b引起的脑膜炎球菌性疾病的疫苗。自从Goldschneider等的工作以来,30多年前,开发预防血清组B脑膜炎球菌性疾病的免疫原性组合物对于研究人员是一种挑战。Goldschneider等，1969，J. Exp. Med129 (6) : 1307-26 ；Goldschneider 等，1969，J. Exp. Med 129 (6) : 1327-48 ；Gotschlich 等，1969，J. Exp. Med. 129(6) :1385-95 ;和 Gotschlich 等，1969，J. Exp. Med. 129 (6) : 1367-84。与血清组A疾病不同，二战后，这种疾病在北美洲实际上已经消失，Achtman, M.，1995，trends in Microbiology3 (5) :186-92,由血清组B和C生物引起的疾病在很多经济发达国家仍旧是一种地方病。疾病的发病率〈1/100，000，而在流行时，高危人群中地方病的发病率200/100, 000是罕见的。已经开发了抗脑膜炎奈瑟氏球菌血清组A和C的基于多糖结合物的疫苗，这种疫苗似乎有效预防疾病。目前已经有用血清组A、C、Y和W-135荚膜多糖制造的免疫原性组合物。Ambrosch等，1983，“一种新型四价的免疫原性和副作用”，Bulletin of the WorldHealth 0rgannization61 (2) : 317-23。然而,这种免疫原性组合物引发一种不依赖T-细胞的免疫应答，这在儿童中无效，且不能对付造成50%以上脑膜炎球菌性疾病的血清组B菌株。其它人也试图用荚膜多糖开发免疫原性组合物。最近，将血清组C荚膜物质与蛋白质结合制成的血清组C疾病的免疫原性组合物在欧洲已被许可使用。然而，血清组B荚膜不适合作为疫苗候选物，因为这种荚膜多糖是由聚唾液酸构成的，它与发育中的人神经组织上的碳水化合物部分类似。这种糖部分被识别为自身抗原，因此对人的免疫原性弱。外膜蛋白(OMP)被开发作为血清组B疾病疫苗抗原的替代品。与PorA两个可变区结合的单克隆抗体确定了脑膜炎球菌的血清亚分类方案。PorA蛋白因此作为脑膜炎球 菌菌株的血清亚分类抗原(Abdillahi 等，1988, Microbial Pathogenesis4(I) :27—32),并被作为血清组B免疫原性组合物的组分而被广泛研究(Poolman, 1996, Adv. Exp. Med.Biol. 397:73-7),因为它们可引发杀菌抗体(Saukkonen, 1987, Microbial Pathogenesis3(4) :261-7)。杀菌抗体被认为是保护作用的指示剂，任何新的免疫原性组合物候选物都应该能够引发这些功能性抗体。人和动物研究表明，血清亚分类抗原PorA引发杀菌抗体。然而，对Por A的免疫应答通常是血清亚型特异的。特别地，血清亚分类数据表明，由PorA制得的免疫原性组合物需要各个血清亚型的PorA都被这样一种免疫原性组合物覆盖，可能多达6-9个。因此，将需要6-9个PorA来覆盖70-80%血清组B菌株。因此，这种蛋白质的可变特性需要一种多价疫苗组合物来抵抗足量的脑膜炎球菌血清亚型临床隔离群。开发血清组B脑膜炎球菌的免疫原性组合物非常困难，最近，一些研究小组测序了代表血清组A和B菌株的基因组以帮助鉴定新型免疫原性组合物的候选物。Tettelin，2000, Science, 287 (5459) :1809-15 ;Pizza 等，2000，Science 287:1816-1820。即便了解了奈瑟氏球菌的基因组，鉴定新型免疫原性组合物候选物也是一种挑战过程，因为现在还没有合适的数学算法。实际上，一项最近的报道声称，尽管已经鉴定了数百个包含理论跨膜区的开放阅读框(“ORFs”)，与表达、纯化、诱导表面反应和功能活性抗体有关的问题使研究者只发现了七种血清组B脑膜炎球菌性免疫原性组合物的候选物。参见同前。其中一种已知。因此，需要一种免疫原性组合物，这种组合物可以(I)引发多种奈瑟氏球菌菌株的杀菌抗体；(2)与多个菌株的表面反应；(3)赋予抗生物攻击(live challenge)的被动保护；和/或⑷防止集落形成。
技术实现思路
为满足这些要求和其它要求，本专利技术提供了奈瑟氏球菌0RF2086蛋白(“2086蛋白，，)，包括2086亚科A蛋白和2086亚科B蛋白。各个2086蛋白都是可以分离自天然奈瑟氏球菌菌株的蛋白，包括脑膜炎奈瑟氏球菌(血清组么、8、(、0、1-135、乂、￥、2和29E)，淋病奈瑟氏球菌和乳糖奈瑟氏球菌菌株。2086蛋白也可用重组技术制备。特别地，本专利技术提供了 2086蛋白、其免疫原性部分和/或其生物学等价物，与上述任一免疫特异性结合的抗体，以及包含编码上述任一的核酸序列的多核苷酸。本专利技术包括组合物、免疫原性组合物及其在预防、治疗和/或诊断脑膜炎球菌感染，尤其是脑膜炎奈瑟氏球菌引起的脑膜炎球菌性疾病中的应用，以及制备所述组合物的方法。这里所述2086蛋白包括重组形式和分离自天然来源的形式以及本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种组合物，含有：（a）至少一种由奈瑟氏球菌属开放读框（ORF2086）编码的蛋白质，所述开放读框编码交叉反应免疫原性抗原，所述交叉反应免疫原性抗原为患者提供针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清组B引起的感染的免疫原性；（b）（a）所述至少一种蛋白质的至少一个免疫原性部分；或（c）（a）所述的至少一种蛋白质或（b）所述的免疫原性部分的至少一种生物学等价物。

【技术特征摘要】
2001.10.11 US 60/328,101;2002.08.30 US 60/406,9341.一种组合物，含有 (a)至少一种由奈瑟氏球菌属开放读框(0RF2086)编码的蛋白质，所述开放读框编码交叉反应免疫原性抗原，所述交叉反应免疫原性抗原为患者提供针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清组B引起的感染的免疫原性； (b)(a)所述至少一种蛋白质的至少一个免疫原性部分；或 (c)(a)所述的至少一种蛋白质或(b)所述的免疫原性部分的至少一种生物学等价物。2.如权利要求I所述的组合物，其特征在于，用质谱测得至少一种蛋白质的分子量为26，000-30，000 道尔顿。3.如权利要求2所述的组合物，其特征在于，用10%-20%SDS聚丙烯酰胺凝胶测得至少一种蛋白质的分子量为约28-35kDa。4.如权利要求I一 3中任一项所述的组合物，其特征在于，所述至少一种蛋白质、免疫原性部分和/或其生物学等价物 引发多种奈瑟氏球菌菌株的杀菌抗体，所述菌株如脑膜炎奈瑟氏球菌、淋病奈瑟氏球菌和/或乳糖奈瑟氏球菌菌株；和/或 与多种菌株的表面反应；和/或 赋予抗生物攻击的被动保护；和/或 防止集落形成。5.一种组合物，该组合物含有至少一种蛋白质，所述蛋白质含有一氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO :2-252中偶数编号的任一氨基酸序列或SEQ ID NO:254-299中的任一氨基酸序列具有大于60%的序列同一性。6.如权利要求5所述的组合物，其特征在于，所述至少一种蛋白质 (a)含有一氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQID NO :2-252中偶数编号的任一氨基酸序列或SEQ ID NO:254-299中的任一氨基酸序列具有大于90%的序列同一性；或 (b)由一多核苷酸编码,所述多核苷酸具有SEQID NO: I — 253中奇数编号的任一核酸序列。7.如权利要求5所述的组合物，其特征在于，所述至少一种蛋白质含有SEQID NO2-252中偶数编号的任一氨基酸序列或SEQ ID NO:254-299中的任一氨基酸序列。8.—种组合物,该组合物含有 Ca)至少一种属于2086蛋白亚科A的脑膜炎奈瑟氏球菌血清组B的0RF2086蛋白、其免疫原性部分或其生物学等价物； 所述组合物还含有 (b)至少一种属于2086蛋白亚科B的脑膜炎奈瑟氏球菌血清组B的0RF2086蛋白、其免疫原性部分或其生物学等价物。9.一种组合物，所述组合物含有 (a)至少一种蛋白质，所述蛋白质含有一氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQIDNO: 2-174中偶数编号的任一氨基酸序列具有大于60%的序列同一性；且所述组合物还含有 (b)至少一种属于2086蛋白亚科B的脑膜炎奈瑟氏球菌血清组B的0RF2086蛋白、其免疫原性部分或其生物学等价物。10.如权利要求9所述的组合物，其特征在于，Ca)中所述的至少一种蛋白质 含有一氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:2-174中偶数编号的任一氨基酸序列具有大于90%的序列同一'丨生；或 由一多核苷酸编码，所述多核苷酸具有SEQ ID NO: I — 173中奇数编号的任一核酸序列。11.如权利要求9所述的组合物，其特征在于，(a)中所述至少一种蛋白质含有SEQIDNO:2-174中偶数编号的任一氨基酸序列。12.如权利要求9一 11中任一项所述的组合物，其特征在于，所述属于2086蛋白质亚科B的至少一种蛋白质、其免疫原性部分和/或其生物学等价物 含有一氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO: 176-252中偶数编号的任一氨基酸序列具有大于60%的序列同一'丨生；或 含有SEQ ID NO:279-299中任一所示的氨基酸序列。13.如权利要求9一 11中任一项所述的组合物，其特征在于，所述属于2086蛋白质亚科B的至少一种蛋白质、其免疫原性部分和/或其生物学等价物 含有一氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO: 176-252中偶数编号的任一氨基酸序列具有大于90%的序列同一'丨生；或 由一多核苷酸编码，所述多核苷酸具有SEQ ID NO: 175-251中奇数编号的任一核酸序列。14.一种组合物，所述组合物含有 (a)至少一种蛋白质，所述蛋白质含有一氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQIDNO: 176-252中偶数编号的任一氨基酸序列具有大于60 %的序列同一性；且所述组合物还含有 (b)至少一种属于2086蛋白亚科A的脑膜炎奈瑟氏球菌血清组B的0RF2086蛋白、其免疫原性部分或其生物学等价物。15.如权利要求14所述的组合物，其特征在于，Ca)中所述的至少一种蛋白质 含有一氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO: 176-252中偶数编号的任一氨基酸序列具有大于90%的序列同一'丨生；或 由一多核苷酸编码，所述多核苷酸具有SEQ ID NO: 175-251中奇数编号的任一核酸序列。16.如权利要求14所述的组合物，其特征在于，Ca)中所述的至少一种蛋白质含有SEQID NO: 176-252中偶数编号的任一氨基酸序列。17.如权利要求14一 16中任一项所述的组合物,其特征在于,所述属于2086蛋白质亚科A的至少一种蛋白质、其免疫原性部分和/或其生物学等价物...

【专利技术属性】
技术研发人员：G·W·泽洛特尼克，L·D·弗莱切，J·法利，L·A·伯恩非尔德，R·J·扎古斯基，B·J·麦特卡尔夫，
申请(专利权)人：惠氏控股有限公司，
类型：发明
国别省市：