双层式免疫层析试纸制造技术

本实用新型专利技术公开了一种双层式免疫层析试纸，由背靠背相连的试纸组件I和试纸组件II组成；试纸组件I包含上样垫I(1)等，在硝酸纤维素膜I(5)的上表面分别设置胶体金垫I(2)和吸样垫I(4)，上样垫I(1)位于胶体金垫I(2)的上表面；试纸组件II包含上样垫II(11)等；在硝酸纤维素膜II(15)的下表面分别设置胶体金垫II(12)和吸样垫II(14)，上样垫II(11)位于胶体金垫II(12)的下表面；支撑板I(7)的背面与支撑板II(17)的背面固定相连。本实用新型专利技术还同时公开了另一种双层式免疫层析试纸。该双层式免疫层析试纸能用于同时检测结核分枝杆菌分泌蛋白CFP-10和ESAT-6。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本技术涉及一种双层式免疫层析试纸。
技术介绍
据世界卫生组织统计，全球已有近1/3的人口感染了结核分枝杆菌，在某些发展中国家的成人中结核分枝杆菌携带率高达80%，其中约5% -10%携带者可发展为活动性结核病。我国结核病人数居全球第二位，每年死于结核病的人是各类传染病死亡人数总和的两倍多。近二十年由于艾滋病的流行，感染了人类免疫缺陷病毒(HIV)的结核分枝杆菌携带者发展为活动性结核病的可能性比未感染HIV者高30-50倍。结核病又成为了威胁人类健康的全球性卫生问题，更是影响我国发展的重大社会和经济问题。结核病的实验室诊断主要依赖细菌学涂片和培养检查。由于方法所限，严重影响了结核病的及时诊断。因此，多年来国内外学者一直在寻找快速、敏感、特异、简便的实验室诊断方法。
技术实现思路
本技术要解决的技术问题是提供一种使用简便快捷、灵敏度和特异性高的双层式免疫层析试纸。为了解决上述问题，本技术提供一种双层式免疫层析试纸，由背靠背相连的试纸组件I和试纸组件II组成；试纸组件I由上样垫I、胶体金垫I、包被质控线I和检测线I的硝酸纤维素膜I、吸样垫I以及支撑板I组成；在硝酸纤维素膜I的上表面分别设置胶体金垫I和吸样垫I，上样垫I位于胶体金垫I的上表面，硝酸纤维素膜I的下表面与支撑板I的正面固定相连；试纸组件II由上样垫II、胶体金垫II、包被质控线II和检测线II的硝酸纤维素膜II、吸样垫II以及支撑板II组成；在硝酸纤维素膜II的下表面分别设置胶体金垫II和吸样垫II，上样垫II位于胶体金垫II的下表面，硝酸纤维素膜II的上表面与支撑板II的正面固定相连；支撑板I的背面与支撑板II的背面固定相连。作为本技术的双层式免疫层析试纸的改进胶体金垫I为含有金标记的抗CFP-10单克隆抗体TBCA6的胶体金垫；检测线I为包被在硝酸纤维素膜I上的抗CFP-10单克隆抗体TBCD6 ;质控线I为包被在硝酸纤维素膜I上的羊抗鼠IgG抗体；胶体金垫II为含有金标记的抗ESAT-6单克隆抗体TBEA8的胶体金垫，检测线II为包被在硝酸纤维素膜II上的抗ESAT-6单克隆抗体TBEF3，质控线II为包被在硝酸纤维素膜II上的羊抗鼠IgG抗体。本技术还同时提供了另一种双层式免疫层析试纸，由分别设置在支撑板正反两面的试纸组件I和试纸组件II组成；试纸组件I由上样垫I、胶体金垫I、包被质控线I和检测线I的硝酸纤维素膜I以及吸样垫I组成；在硝酸纤维素膜I的上表面分别设置胶体金垫I和吸样垫I，上样垫I位于胶体金垫I的上表面，硝酸纤维素膜I的下表面与支撑板的正面固定相连；试纸组件II由上样垫II、胶体金垫II、包被质控线II和检测线II的硝酸纤维素膜II以及吸样垫II组成；在硝酸纤维素膜II的下表面分别设置胶体金垫II和吸样垫II，上样垫II位于胶体金垫II的下表面，硝酸纤维素膜II的上表面与支撑板的反面固定相连。作为本技术的双层式免疫层析试纸的改进胶体金垫I为含有金标记的抗CFP-10单克隆抗体TBCA6的胶体金垫；检测线I为包被在硝酸纤维素膜I上的抗CFP-10单克隆抗体TBCD6 ;质控线I为包被在硝酸纤维素膜I上的羊抗鼠IgG抗体；胶体金垫II为含有金标记的抗ESAT-6单克隆抗体TBEA8的胶体金垫，检测线II为包被在硝酸纤维素膜II上的抗ESAT-6单克隆抗体TBEF3，质控线II为包被在硝酸纤维 素膜II上的羊抗鼠IgG抗体。本技术的双层式免疫层析试纸的有益效果是可快速检测液体培养基中的结核分枝杆菌分泌性抗原靶蛋白CFP-10和ESAT-6，从而鉴定是否为人的致病结核分枝杆菌，即使非专业人员也能轻易进行操作，5-30分钟内观察结果，最少可检出CFP-10蛋白1.2ng/ml、ESAT-6蛋白2. 4ng/ml。本技术的双层式免疫层析试纸具有简便性、敏感性、特异性和快速性的优点，而且价格便宜适于基层现场使用。以下结合附图对本技术的具体实施方式作进一步详细说明。图I是本技术的一种双层式免疫层析试纸的主视结构的爆破示意图；图2是图I的俯视示意图；图3是图I的仰视示意图；图4是本技术的另一种双层式免疫层析试纸的主视结构的爆破示意图。具体实施方式下面结合具体实施例，进一步阐述本技术。应理解，这些实施例仅用于说明本技术而不用于限制本技术的范围。实施例I、图I 图3结合给出了一种双层式免疫层析试纸，由背靠背相连的试纸组件I和试纸组件II组成。试纸组件I由上样垫I I、胶体金垫I 2、包被质控线I 3和检测线I 6的硝酸纤维素膜I 5、吸样垫I 4以及支撑板I 7组成；在硝酸纤维素膜I 5的上表面分别设置胶体金垫I 2和吸样垫I 4，上样垫I I位于胶体金垫I 2的上表面，硝酸纤维素膜I 5的下表面与支撑板I 7的正面固定相连。胶体金垫I 2为含有金标记的抗CFP-10单克隆抗体TBCA6的胶体金垫；检测线I6为包被在硝酸纤维素膜I 5上的抗CFP-10单克隆抗体TB⑶6 ;质控线I 3为包被在硝酸纤维素膜I 5上的羊抗鼠IgG抗体。试纸组件II由上样垫II 11、胶体金垫II 12、包被质控线II 13和检测线II 16的硝酸纤维素膜II 15、吸样垫II 14以及支撑板II 17组成；在硝酸纤维素膜II 15的下表面分别设置胶体金垫II 12和吸样垫II 14，上样垫II 11位于胶体金垫II 12的下表面，硝酸纤维素膜II 15的上表面与支撑板II 17的正面固定相连；胶体金垫II 12为含有金标记的抗ESAT-6单克隆抗体TBEA8的胶体金垫，检测线II 16为包被在硝酸纤维素膜II 15上的抗ESAT-6单克隆抗体TBEF3，质控线II 13为包被在硝酸纤维素膜II 15上的羊抗鼠IgG抗体。支撑板I 7的背面与支撑板II 17的背面固定相连。试纸组件I例如可按照如下方法进行制备I、制备并纯化抗CFP-10小鼠单克隆抗体TB⑶6和TBCA6I)、单抗腹水的诱导在接种杂交瘤细胞前一周，给BALB/C小鼠腹腔注射降植烷 每只O. 5ml，然后每只接种5X IO6能产生TB⑶6或TBCA6的阳性杂交瘤细胞，10天后收集腹水离心，测定抗体效价。上述能产生小鼠单克隆抗体TB⑶6或TBCA6的阳性杂交瘤细胞来源于中国典型培养物保藏中心；保藏编号分别为CCTCC NO C201082 ；CCTCC NO :C201083。其在已公开发表的专利中均有明确告知。2)单克隆抗体的纯化利用Protein G亲和纯化法纯化腹水中的TB⑶6或TBCA6单克隆抗体。2、制作包被检测线I 6和质控线I 3的硝酸纤维素膜I 5 ;g卩，将TB⑶6单克隆抗体溶液以及羊抗鼠IgG溶液分别喷到硝酸纤维素膜I 5上，晾干后将其(包被检测线I 6和质控线I 3的硝酸纤维素膜I 5)粘贴在支撑板I 7上；包被检测线I 6和质控线I 3的硝酸纤维素膜I 5的制作方法如下I)、用O. 01mol/L PH7. 4磷酸盐PBS缓冲液将抗CFP-10单克隆抗体TBCD6配制成浓度为O. 3mg/ml的溶液，用喷膜仪在硝酸纤维素膜I 5的下表面以O. 8 I. 2ul/cm(最佳为lul/cm)的参数划线，包被成检测线I 6 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种双层式免疫层析试纸，其特征是：由背靠背相连的试纸组件I和试纸组件II组成；所述试纸组件I由上样垫I(1)、胶体金垫I(2)、包被质控线I(3)和检测线I(6)的硝酸纤维素膜I(5)、吸样垫I(4)以及支撑板I(7)组成；在硝酸纤维素膜I(5)的上表面分别设置胶体金垫I(2)和吸样垫I(4)，上样垫I(1)位于胶体金垫I(2)的上表面，硝酸纤维素膜I(5)的下表面与支撑板I(7)的正面固定相连；试纸组件II由上样垫II(11)、胶体金垫II(12)、包被质控线II(13)和检测线II(16)的硝酸纤维素膜II(15)、吸样垫II(14)以及支撑板II(17)组成；在硝酸纤维素膜II(15)的下表面分别设置胶体金垫II(12)和吸样垫II(14)，上样垫II(11)位于胶体金垫II(12)的下表面，硝酸纤维素膜II(15)的上表面与支撑板II(17)的正面固定相连；支撑板I(7)的背面与支撑板II(17)的背面固定相连。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：徐宁，姚航平，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：实用新型
国别省市：