检测牛奶中氟喹诺酮类药物的胶体金试剂盒制造技术

本实用新型专利技术提供了一种检测牛奶中氟喹诺酮类药物的胶体金试剂盒，包括冻干有氟喹诺酮类药物单克隆抗体-胶体金标记物的微孔试剂条和试纸条，试纸条由底板、附着在底板上依次紧密相连的样品吸收垫、反应膜、吸水垫和保护膜组成，所述反应膜上具有包被有氟喹诺酮类药物-载体蛋白偶联物构成的检测线印迹“︱”和包被羊抗鼠抗抗体构成的质控线印迹“︱”。本实用新型专利技术试剂盒具有便携性好，灵敏度高，检测时间短等特点，可以在牛奶中氟喹诺酮类药物残留检测中发挥重要作用。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本技术涉及ー种检测氟喹诺酮类药物的试剂盒，特别是检测牛奶中氟喹诺酮类药物的试剂盒，属于免疫学范畴。
技术介绍
喹诺酮类抗菌药(4-quinolones),又称卩比酮酸类或卩比唳酮酸类,是ー类较新的合成抗菌药，该类药物的开发可以追溯到1962年,Lesher从合成抗拒药氯喹中分离出ー种副产品-萘啶酸，喹诺酮类历经40多年的发展，共开发出了四代喹诺酮类药物，共计50多种药物。喹诺酮类抗菌药以细菌的脱氧核糖核酸(DNA)为靶位，通过选择性的抑制细菌DNA促旋酶与拓扑异构酶IV而造成染色体的不可逆损害，而使细菌细胞不再分裂，主要作 用于革兰阴性菌的抗菌药物，对革兰阳性菌的作用较弱(某些品种对金黄色葡萄球菌有较好的抗菌作用)。已成为兽医临诊和水产养殖中最重要的抗感染药物之一，被大量用于治疗、预防和促生长，由于其耐药性和潜在的致癌性引起广泛的关注。在组织中，恩诺沙星的标示残留物为恩诺沙星和环丙沙星，其中以肝脏组织和肾脏组织中的残留物浓度最高，其次是肌肉和脂肪附着的皮肤组织，恩诺沙星其代谢产物环丙沙星(CIF)仍具有生物活性。氧氟沙星(OFL)其主要以原形药物的形式存在于组织中；培氟沙星(PEF)在体内代谢率接近100%，而其代谢产物是诺氟沙星(NOR)。目前，牛奶及生鲜奶中氟喹诺酮类药物残留的检测方法依据不同的检测原理，大体可分为三大类微生物受阻检测、理化检测法、免疫学分析法。微生物受阻检测方法，主要有抑菌圈试验、浑浊度试验、变色型检测金标试剂盒方法，微生物检测方法检测成本价低，但是灵敏度低、耗时长、耐药菌的存在容易导致误检；理化检测方法，是目前检测氟喹诺酮类药物主要方法，有液相色谱法、色谱/质谱联用技术、气相色谱法等，理化检测方法精确度高，但其存在检测成本高、检测设备复杂、对检测人员的要求较高、检测耗时长等缺点，目前常用的免疫学分析法，主要为酶联免疫检测法和放射免疫分析法，需要的检测费用还是较高，不适合企业低成本的检测需要。因此，在实践中有必要建立ー种敏感度高、操作简单、成本低、检测药物种类多、适合大規模推广的检测方法。
技术实现思路
本技术的目的是提供一种灵敏度高、检测氟喹诺酮类药物种类多、成本低、操作简单、检测时间短的检测氟喹诺酮类药物的试剂盒。本技术的试剂盒，其包括冻干有氟喹诺酮类药物单克隆抗体-胶体金标记物的微孔试剂条和试纸条，试纸条由底板、附着在底板上依次紧密相连的样品吸收垫、反应膜、吸水垫和保护膜组成，所述反应膜上具有包被有氟喹诺酮类药物-载体蛋白偶联物构成的检测线印迹“ I ”和包被羊抗鼠抗抗体构成的质控线印迹“ I ”。检测线和质控线平行，检测线位于距离样品吸收垫ー侧5 8mm，所述质控线位于距离检测线4 7mm，试纸条两端贴有保护膜，覆盖在吸水端上的为手柄端，覆盖在样品吸收垫上的为检测端，检测端保护膜上有MAX标记线，微孔试剂条的反应孔上具有胶塞。为了便于运输和使用，试剂盒还有固定用具及固定于其中用于盛装微孔试剂条和试纸条的试剂桶，所述试剂桶上具有密封盖。本技术试剂盒中试纸条底板可为PVC底板或其他硬质不吸水的材料；样品吸收垫可为吸滤纸或滤油纸；吸水垫为吸水纸；反应膜可为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜；保护膜为PE材质保护膜；试剂盒盒体为硬纸盒；试剂桶为塑料试剂桶；固定用具为硬质支撑材料。本技术试剂盒具有如下有益效果I.灵敏度高。氟喹诺酮类药物检测试剂盒以胶体金标记高亲和カ的单克隆抗体 为基础制备而成，金标抗体中金颗粒与抗体分子之间无价健形成，二者通过异性电荷间的范德华カ相结合，胶体金对单克隆抗体特异性和亲和カ影响很小，且具有较高的标记率。其中的氟喹诺酮类药物单克隆抗体-肢体金标记物冻干在微孔试剂条中，在检测过程中，能够使金标抗体与待检样品液充分接触，充分反应，从而减少误差，増加整个体系的反应灵敏度。因此，本技术试剂盒具有较高的特异性和灵敏度。本试剂盒对恩诺沙星、沙拉沙星、双氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、依诺沙星、培氟沙星、氟甲喹、噁喹酸、达氟沙星检测灵敏度分别为 20 μ g/L,20 μ g/L,20 μ g/L,20 μ g/L,20 μ g/L,20 μ g/L,40 μ g/L,20 μ g/L、20 μ g/L、40 μ g/L、20 μ g/L。2.操作简便快速。使用试剂盒检测时无需任何其它试剂，只要将待检样品溶液滴加于微孔试剂中，混匀后，孵育5min，将试纸标有MAX线标记端向下，插入孵育后的微孔试剂后计时，5min内观察结果。3.显示检测结果形象、直观准确。检测试纸条以显示红线色“ I ”及“ I I ”印迹作为阳性和阴性标记，即在硝酸纤维素膜上显示一条红线“ I ”印迹表示在被检测样本液中氟喹诺酮类药物的含量高于或等于试剂盒对氟喹诺酮类药物的最低检测限，两条红线“ 11 ”印迹表示在被检测样本中氟喹诺酮类药物含量低于试剂盒对氟喹诺酮类药物的最低检测限，结果判定形象、直观、准确、简单明了，不容易出现结果误判。4.成本低，投资少。使用本技术试剂盒，不需另配仪器设备及其他试剂，使现场检测一歩到位，成本低廉，投资少，见效快。5.易于大范围推广应用。试剂盒操作简单，能较好满足不同层次人员的需要，如专业化验、海关检疫、卫生防疫、质量监测、乳业企业等，具有广阔的市场前景和较大的经济、社会效益。附图说明图I为本技术试纸条结构示意图；图2为本技术试纸条俯视图；图3为本技术微孔试剂图；图4. a、图4. b、图4. C、图4. d为本技术试纸条检测结果判定图；图5为本技术试剂桶结构示意图；图6为本技术固定用具的俯视图；图7为本技术盒体与固定用具的侧视图。具体实施方式一、氟喹诺酮类药物检测试剂盒的组装制备I)试纸条样品吸收垫I、反应膜2、吸水垫3和保护膜依次按顺序黏贴在所述底板6上，样品吸收垫的末端与反应膜始端相连，反应膜的末端与吸水垫相连，样品吸收垫的始端与底板的始端对齐，吸水垫的末端与底板的末端对齐，试纸两端黏贴有保护膜，保护膜7-1覆盖在吸水垫上手柄端，保护膜7-2覆盖在样品吸收垫的检测端，在检测端保护膜上印有MAX标记线，检测线4包被有氟喹诺酮类药物-载体蛋白偶联物，质控线5包被有羊抗鼠抗抗体。 底板为PVC底板，样品吸收垫为吸滤纸，反应膜为硝酸纤维素膜，吸水垫为吸水纸，保护膜为PE材质保护膜。2)微孔试剂条微孔试剂条8具有胶塞9，板孔中冻干有氟喹诺酮类药物单克隆抗体-胶体金标记物。3)将I)试纸条和2)微孔试剂条装入具有密封盖的塑料试剂桶10，将塑料试剂桶放置于试剂盒盒体12内的固定用具11中。ニ、试剂盒的使用待检牛奶样品溶液滴加200 μ I到微孔试剂中，混匀后，孵育5min，将试纸标有MAX线标记端向下，插入孵育后的微孔试剂后计吋，5min内观察結果。三、检测结果分析氟喹诺酮类药物在样本中的含量高于或等于试剂盒对其的最低检测限吋，氟喹诺酮类药物单克隆抗体-胶体金标记物与氟喹诺酮类药物结合，金标抗体上的抗原结合位点被封闭，从而在检测区内因为竞争反应，不会与氟喹诺酮类药物-载体蛋白偶联物结合而不出现红色条帯。阴性样本在检测过程中由于缺少抗原抗体竞争反应，将会在检测线和质控线上出现红色条带。如图4. a、图4. 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测牛奶中氟喹诺酮类药物的胶体金试剂盒，其特征在于包括冻干有氟喹诺酮类药物单克隆抗体？胶体金标记物的微孔试剂条和试纸条，试纸条由底板、附着在底板上依次紧密相连的样品吸收垫、反应膜、吸水垫和保护膜组成，所述反应膜上具有包被有氟喹诺酮类药物？载体蛋白偶联物构成的检测线印迹“︱”和包被羊抗鼠抗抗体构成的质控线印迹“︱”。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：冯才伟，吴鹏，冯静，朱亮亮，田甜，王子健，王建霞，赵赫，
申请(专利权)人：北京勤邦生物技术有限公司，
类型：实用新型
国别省市：