一种河豚毒素胶体金快速检测试剂盒，由检测试纸和微孔试剂组成；检测试纸由底板、吸水板、硝酸纤维素膜、样品吸液板、MAX线组成；硝酸纤维素膜叠放在底板的中部上面；吸水板叠放在底板的其中一端的端头部分上面，样品吸液板叠放在底板的另一端的端头部分上面；硝酸纤维素膜两端分别与吸水板和样品吸液板相交叠；硝酸纤维素膜依次设置试验线和控制线；试验线由河豚毒素-大分子蛋白偶联物包被；控制线由羊抗鼠多克隆抗体包被；微孔试剂为冻干后的胶体金标记河豚毒素单克隆抗体复合物。本实用新型专利技术在传统的胶体金免疫层析试纸基础上进行改进，将胶体金标记抗体复合物直接冻干于微孔中，使检测过程中待测样本与金标抗体充分反应，提高检测灵敏度。
【技术实现步骤摘要】
本技术涉及食品、农产品快速检测领域，尤其是涉及一种河豚毒素的胶体金 快速检测试剂盒。
技术介绍
河豚毒素（Tetrodotoxin，TTX)是豚鱼类（俗称河豚鱼）、其它多种海洋生物以 及蝾螈、火蜥蜴、青蛙、蟾蜍、扁形虫等动物体内含有的一种生物碱（氨基全氢喹唑啉型化 合物），是自然界中所发现的毒性最大的神经毒素之一，其分子式为C11H1708N3,分子量为 319,是小分子量、非蛋白质的神经性毒素，其毒性比剧毒的氰化钠还要高1250多倍，0. 5mg 即可致人于死命。河豚毒素对肠道有局部刺激作用，吸收后迅速作用于神经末梢和神经中 枢，阻碍神经传导，从而引起神经麻痹而致死亡。其具体作用机制是通过与钠离子通道受 体结合，阻断电压依赖性钠通道，从而阻滞动作电位，导致与之相关的生理活动的阻碍，主 要是神经肌肉的麻痹，河豚毒素对呼吸和心血管的抑制是对中枢和外周神经共同作用的结 果。河豚毒素的化学性质稳定，一般烹调手段难以破坏，中毒后也缺乏有效的解救措施。因 此TTX的检测具有非常重要的现实意义。 传统的TTX检测技术主要包括以小鼠检测法为代表的生物检测技术；以荧光分光 光度法、液相色谱检测法为代表的仪器检测技术。小鼠检测法是利用河豚毒素的毒性特点 进行的小鼠毒性检测的方法，方法简便，但定量不准确且重复性差、目标性差，已少用。荧光 分光光度法是最早建立的测定TTX的仪器方法，操作简便，但灵敏度低、专一性差。液相色 谱检测法灵敏度高、结果准确，但需要专业人士操作、且仪器昂贵、检测成本高，因此应用范 围受很大限制，检测样本量大大减少且不能进行现场检测。免疫分析技术为河豚毒素的检 测提供了新的检测手段，其中最常用的是酶联免疫吸附法和免疫层析法。酶联免疫吸附法 特异性好、灵敏度高、可定量检测，但仍需专业人士操作，且操作复杂。胶体金免疫层析法以 其灵敏、快速、准确、操作简便得到越来越广泛的应用，但目前的胶体金检测产品仍存在灵 敏度低的状况。
技术实现思路
针对现有技术存在的上述问题，本申请人提供了一种河豚毒素胶体金快速检测试 剂盒。本技术在传统的胶体金免疫层析试纸基础上进行了改进，将胶体金标记抗体复 合物直接冻干于微孔中，使得检测过程中待测样本与金标抗体充分反应，提高检测灵敏度。 本技术的技术方案如下： -种河豚毒素胶体金快速检测试剂盒，由检测试纸和微孔试剂（8)组成；所述检 测试纸由底板（7)、吸水板（1)、硝酸纤维素膜（5)、样品吸液板（2)、MX线（6)组成； 所述硝酸纤维素膜（5)叠放在底板（7)的中部上面；所述吸水板（1)叠放在底板 (7)的其中一端的端头部分上面，所述样品吸液板（2)叠放在底板（7)的另一端的端头部分 上面； 所述硝酸纤维素膜（5)两端分别与吸水板（1)和样品吸液板（2)相交叠，且所述 硝酸纤维素膜（5)位于吸水板（1)和样品吸液板（2)的下方； 从所述硝酸纤维素膜（5)靠近样品吸液板（2)的那一端开始，依次设置试验线（3) 和控制线（4);所述试验线（3)由河豚毒素-大分子蛋白偶联物包被；所述控制线（4)由羊 抗鼠多克隆抗体包被； 所述微孔试剂（8)为冻干后的胶体金标记河豚毒素单克隆抗体复合物。 底板（7)是PVC背板，样品吸液板⑵是玻璃纤维材料，微孔试剂⑶的微孔是聚 苯乙稀材料。 所述硝酸纤维素膜（5)两端与吸水板（1)和样品吸液板（2)相交叠的部分长度分 别为1~2毫米。 本试剂盒的使用方法如下：将水相待测样品加入金标微孔试剂（8)至微孔中固体 充分溶解，样品中若含有河豚毒素，样品中的河豚毒素将与微孔试剂（8)中河豚毒素单克 隆抗体-胶体金标记物发生特异性结合。插入试纸条，由于毛细管作用样品将沿着试纸条 吸水板端移动，当移动至固定有河豚毒素-大分子蛋白偶联物试验线时，由于河豚毒素单 克隆抗体-胶体金标记物与样品中河豚毒素优先结合成复合物而不能与河豚毒素-大分子 蛋白偶联物结合，因此显色的胶体金不能滞留于试验线上，试验线处没有色带显示，即只有 一条控制线为阳性。相反如果样品中没有河豚毒素，河豚毒素金标单克隆抗体移动到试验 线上，河豚毒素单克隆抗体就会与河豚毒素-大分子蛋白偶联物发生特异结合，使胶体金 滞留于试验线上，即二条色带为阴性。 当移动至羊抗鼠多克隆抗体控制线时，无论样品中有无河豚毒素，控制线都会显 色。因此控制线无色带产生则代表操作有误，即检测时样品液面超过MAX线或试纸已经过 期。 本技术有益的技术效果在于： 本试剂盒改变了以往在样品洗液板和硝酸纤维素膜之间设置胶体金结合垫的方 法，而是将待测样品先放入一个微孔试剂中。这个微孔试剂是胶体金标记了待测毒素的抗 体和胶体金后冻干后得到的，冷冻干燥在低温下进行，不会发生变性或失去生物活力。在冻 干过程中，微生物的生长和酶的作用无法进行，因此能保持原来的性状。由于在冻结的状态 下进行干燥，因此制品的体积、形状几乎不变，保持了原来的结构，不会发生浓缩现象。干燥 后的物质疏松多孔，呈海绵状，加水后溶解迅速而完全，几乎立即恢复原来的性状。 本技术所提供的检测试剂盒具有灵敏度高、操作简便、方便携带、成本低、检 测结果可靠等特点。【附图说明】 图1为本技术中检测试纸的结构图； 图2为本技术中微孔试剂的结构图； 图3为本技术的使用方法图； 图4为本技术的阴性结果图； 图5为本技术的阳性结果图； 图6为本技术的无效结果图； 图中：1、吸水板，2、样品吸液板，3、试验线，4、控制线，5、硝酸纤维素膜，6、MAX线， 7、底板，8、微孔试剂。【具体实施方式】 下面结合附图，对本技术进行具体描述。 一、本试剂盒的组成： 本技术所涉及的试剂盒是由检测试纸和微孔试剂8组成，如图1所示。其中 检测试纸由底板7、吸水板1、硝酸纤维素膜5、样品吸液板2、MAX线6组成。底板7中部上 方叠加硝酸纤维素膜5,硝酸纤维素膜上5有平行的一条试验线（T线）3和一条控制线（C 线）4 ;底板7 -端端头上方叠加吸水板1，另一端端头上方叠加样品吸液板2,硝酸纤维素 膜5两端分别与吸水板1和样品吸液板2相互交叠连接（交叠连接部分1~2毫米），且位 于吸水板1和样品吸液板2的下方。其中试验线3由河豚毒素-大分子蛋白偶联物包被，控 制线4靠近吸水板，由羊抗鼠多克隆抗体包被。微孔试剂8为将河豚毒素单克隆抗体-胶 体金标记物直接冻干于微孔中制成，如图2所示。 二、河豚毒素胶体金检测试剂盒的制备： 1、河豚毒素免疫原合成： 在小烧杯中依次加入30mg的BSA，6.OmL乙酸钠缓冲液，4.Omg的TTX，加入180μL 的37%的甲醛，混勾，其余同KLH-HCH0-TTX制备，但不用A1 (S04) 2 · 12Η20和1.OmL的lmol/ L的NaOH沉淀，PBS透析结束后将产物直接冻干备用，即为免疫原。 2、河豚毒素单克隆抗体的制备。 (1)免疫动物 选择6周龄雌性BALB/C小鼠，将抗原与福氏完全佐剂等量混合、乳化，经腹部皮下 多点注射进行基础免疫。 分别隔4周，进行第二、三次免疫。第三次免疫后第7~10天，断尾取血，分离血 清，用ELISA方法检测血清效价。用生理盐水稀释免疫原对高效价小鼠进行连续加强免本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种河豚毒素胶体金快速检测试剂盒，其特征在于由检测试纸和微孔试剂(8)组成；所述检测试纸由底板(7)、吸水板(1)、硝酸纤维素膜(5)、样品吸液板(2)、MAX线(6)组成；所述硝酸纤维素膜(5)叠放在底板(7)的中部上面；所述吸水板(1)叠放在底板(7)的其中一端的端头部分上面，所述样品吸液板(2)叠放在底板(7)的另一端的端头部分上面；所述硝酸纤维素膜(5)两端分别与吸水板(1)和样品吸液板(2)相交叠，且所述硝酸纤维素膜(5)位于吸水板(1)和样品吸液板(2)的下方；从所述硝酸纤维素膜(5)靠近样品吸液板(2)的那一端开始，依次设置试验线(3)和控制线(4)；所述试验线(3)由河豚毒素‑大分子蛋白偶联物包被；所述控制线(4)由羊抗鼠多克隆抗体包被；所述微孔试剂(8)为冻干后的胶体金标记河豚毒素单克隆抗体复合物。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：伦丽丽，张勋，李奇富，吴雨萌，
申请(专利权)人：江苏美正生物科技有限公司，
类型：新型
国别省市：江苏;32
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