本实用新型专利技术公开了一种髓过氧化物酶、脂蛋白磷脂酶A2定量联检试纸条，包括底板、样品垫、荧光标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；所述试纸条由样品垫、荧光标记物结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫依次搭接粘贴在底板上构成。所述荧光标记物结合垫含有链霉亲和素标记荧光蛋白和生物素标记的髓过氧化物酶单克隆抗体、生物素标记的脂蛋白磷脂酶A2单克隆抗体；所述硝酸纤维膜上有第一检测线、第二检测线和质控线。本实用新型专利技术不仅大大缩短了检测时间，提高了检测灵敏度，同时联合检测还大大提高了便利性。
【技术实现步骤摘要】
本技术属于免疫检测领域，具体涉及一种高灵敏度髓过氧化物酶、脂蛋白磷脂酶A2定量联检试纸条。
技术介绍
髓过氧化物酶(Myeloperoxidase，ΜΡ0)又称为过氧化酶，是一种重要的含铁溶酶体，存在于髓系细胞(主要是中性粒细胞和单核细胞)的嗜天青颗粒中，是髓细胞的特异性标志。人们于1967年第一次认识到ΜΡ0是对外来入侵发生固有免疫反应的组成成分。ΜΡ0是一种血色素蛋白，分子量为118kD，含有一对重链和轻链，它是在粒细胞进入循环之前在骨髓内合成并存在于嗜天青颗粒内，外界刺激可导致中性粒细胞聚集，释放ΜΡΟ。ΜΡ0参与多种疾病的发生，如:炎症、多发性硬化、血管炎和动脉粥样硬化等。在特定条件下，ΜΡ0催化反应生成过量的氧化剂，超过局部抗氧化剂的防御反应时，就会导致氧化应激和氧化性组织损伤，ΜΡ0通过多种途径调节炎症反应，最重要的是通过调节一氧化氮对血管信号传递和舒张的作用，直接改变血管的炎症反应性。冠心病(coronary heart disease，CHD)是冠状动脉发生粥样硬化，发生痉挛、斑块破裂及血栓形成导致管腔阻塞，引起冠状动脉供血不足、心肌缺血或梗死的疾病。研究发现，从稳定性心绞痛(SAP)发展到不稳定性心绞痛(UAP)、再从UAP发展到急性心肌梗死(AMI)是由轻到重的连续变化病理过程，CHD不同病理阶段，其动脉粥样斑块具有不同的病理特征。研究证实，炎症反应在动脉粥样硬化的所有阶段均具有重要作用，从脂质条纹形成到易损斑块破裂。炎性细胞在动脉粥样硬化早期病变中起支配地位，其效应分子加速病变进展，引起炎症激活导致易损斑块破裂，引发ACS。越来越多的临床研究证据显示，冠心病病理事件与血清炎症标志物变化紧密相关，炎症标志物在冠心病诊断、危险分层、治疗及预测中均有重要价值。ΜΡ0是白细胞的功能和激活标志，为中性粒细胞、巨噬细胞分泌的含血红互辅基的血红素蛋白酶。临床和流行病学研究发现，ΜΡ0广泛参与动脉粥样硬化的病理过程。Zhang等最早发现冠心病患者ΜΡ0水平高于对照组。Wainstein等进一步研究表明ΜΡ0与CHD严重程度相关，在不稳定斑块在大量中性粒细胞和世噬细胞浸润及炎性因子表达。脂蛋白磷脂酶A2(Lipoprotein-associated phospholipase A2，Lp_PLA2)是磷酯酶A2 (phospholipase A2，PLA2)超家族中的一员，由441个氨基酸残基组成的一种丝氨酸脂酶，相对分子质量为45.4kD。PLA2是一类能水解磷脂甘油支架Sn_2位上的短链酰基的酶族。根据存在的部位、底物特异性、辅助因子的需求和生理学作用等，PLA2主要分为四类:①分泌型胞浆型；③非钙离子依赖型；④其他:以Lp-PLA2为代表。Lp-PLA2主要由成熟的巨噬细胞和淋巴细胞合成和分泌，并受炎性介质的调节，人循环中的Lp-PLA2以与脂蛋白颗粒结合的形式存在，其中2/3与低密度脂蛋白结合(LDL)，1/3与高密度脂蛋白(HDL)、极低密度脂蛋白VLDL(VLDL)结合。Lp-PLA2作为一种新的炎性反应标志物，在动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)的几个主要阶段中均起着作用。Lp-PLA2主要由巨噬细胞和淋巴细胞产生，在早期的关于Lp-PLA2与As的研究中因Lp-PLA2能水解致炎因子如血小板活化因子(plateletactivating factor, PAF)及结构相关的氧化磷脂，因此曾被认为能抑制炎性反应，甚至能抑制动脉粥样硬化的形成，故也被称为血小板活化因子乙酰水解酶(platelet activatingfactor acetylhydrolase，PAF_AH)。但是近年来的研究已证实Lp_PLA2更大的作用在于促进AS的发生与发展。综上所述，MPO、Lp-PLA2均为炎症反应标志，都参与了冠状动脉粥样硬化作用，两者的临床诊断价值不完全相同，联合检测可较好地鉴别和诊断CHD不同病理阶段，有助于CHD的危险分层，还可以更及时准确诊断心脏状况，用于心血管疾病的辅助诊断。目前国内市场上暂无同类产品。生物素-亲和素系统(b1tinavidin system，BAS)，是一种新型生物反应放大系统。随着各种生物素衍生物的问世，BAS很快被广泛应用于医学各领域。将该系统应用于免疫组化，酶联免疫，荧光免疫，放射免疫等检测技术中，可显著地提高以上技术方法的敏感性、特异性和稳定性，使方法更简便，有助于临床快速诊断，并利于进行大规模流行病学调查，成为研究免疫反应的有力工具。由于BAS检测系统经济快速，又无放射物质污染，不需复杂仪器，充分显示了此系统的巨大潜力和应用的可能性。生物素-亲和素系统检测原理:BAS是在常规ELISA原理的基础上，结合生物素与亲和素间的高度放大作用，而建立的一种检测系统。亲和素是卵白蛋白中提取的一种碱性糖蛋白，分子量为68kDa，由4个亚单位组成，对生物素有非常高的亲和力(结合常数高达K^M1)。生物素很易与蛋白质(如抗体等)以共价键结合。这样，结合了酶的亲和素分子与结合有特异性抗体的生物素分子产生反应，既起到了多级放大作用，又由于酶在遇到相应底物时的催化作用而呈色，达到检测未知抗原(或抗体)分子的目的。链霉亲和素是与亲和素有相似生物学特性的一种蛋白质，链霉亲和素与亲和素一样分子中每条肽链都能结合一个生物素，因几乎所有用于标记的物质均可以同亲和素或链霉亲合素结合。利用生物素-亲和素系统研制髓过氧化物酶、脂蛋白磷脂酶A2定量联检快速诊断试剂尚无报道。
技术实现思路
本技术的目的，在于提供一种髓过氧化物酶、脂蛋白磷脂酶A2定量联检试纸条，其基于双抗体夹心法、荧光免疫侧向层析和生物素-链霉亲和素放大系统，提供高灵敏度髓过氧化物酶、脂蛋白磷脂酶A2定量联检试纸条。使用本技术时，提高了检测灵敏度和检测稳定性，降低了非特异性结合，联合检测大幅度提高检测的准确性和便利性，检测时间不大于10分钟，大大提高了诊断效率。本技术解决其技术问题的解决方案是:髓过氧化物酶、脂蛋白磷脂酶A2定量联检试纸条，其包括底板，所述底板上依次设有样品垫、荧光标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述吸水垫和荧光标记物结合垫分别交叠压在硝酸纤维素膜的两端后在硝酸纤维素膜的表面形成检测区，所述样品垫交叠压在荧光标记物结合垫上，所述荧光标记物结合垫上固定有生物素标记的髓过氧化物酶单克隆抗体、生物素标记的脂蛋白磷脂酶A2单克隆抗体和链霉亲和素标记的荧光蛋白；所述检测区内的硝酸纤维素膜上固定有识别髓过氧化物酶另外一个表位的单克隆抗体构成的第一检测线、识别脂蛋白磷脂酶A2另外一个表位的单克隆抗体构成的第二检测线和羊抗鼠IgG多克隆抗体构成的质控线。作为上述技术方案的进一步改进，所述荧光标记物结合垫包括层叠的第一荧光标记物结合垫和第二荧光标记物结合垫，所述第一荧光标记物结合垫的一端垫在样品垫的下方，所述第二荧光标记物结合垫交叠压在硝酸纤维素膜的一端。作为上述技术方案的进一步改进，所述第一荧光标记物结合垫中插入样品垫下方的一端设有定位条，所述样品垫的下端面设有能容纳定位条的定位槽。作为上述技术方案的进一步改进，还包括卡壳，所述底板、样品垫、荧光标记物结合垫、硝酸纤本文档来自技高网...
【技术保护点】
髓过氧化物酶、脂蛋白磷脂酶A2定量联检试纸条，其特征在于：其包括底板，所述底板上依次设有样品垫、荧光标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述吸水垫和荧光标记物结合垫分别交叠压在硝酸纤维素膜的两端后在硝酸纤维素膜的表面形成检测区，所述样品垫交叠压在荧光标记物结合垫上，所述荧光标记物结合垫上固定有生物素标记的髓过氧化物酶单克隆抗体、生物素标记的脂蛋白磷脂酶A2单克隆抗体和链霉亲和素标记的荧光蛋白；所述检测区内的硝酸纤维素膜上固定有识别髓过氧化物酶另外一个表位的单克隆抗体构成的第一检测线、识别脂蛋白磷脂酶A2另外一个表位的单克隆抗体构成的第二检测线和羊抗鼠IgG多克隆抗体构成的质控线。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：夏坤，王小明，佟顺刚，
申请(专利权)人：广州天宝颂原生物科技开发有限公司，
类型：新型
国别省市：广东;44
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