伤寒杆菌胶体金法检测试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及生物检测领域，特别是涉及一种伤寒杆菌胶体金检测试剂盒及其制备方法和用途。本发明专利技术提供一种伤寒杆菌胶体金检测试剂盒，包括试纸卡，试纸卡包括底板、及位于底板表面的从加样端开始依次排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述金标垫上包含重组伤寒杆菌抗原和鼠IgG，所述硝酸纤维素膜上包被有检测线和质控线，所述金标垫上的重组伤寒杆菌抗原和鼠IgG采用胶体金标记。本发明专利技术所提供的伤寒杆菌胶体金检测试剂盒首次通过胶体金免疫层析技术检测伤寒杆菌，兼具灵敏性和特异性，具有操作快速简便、结果准确、经济适用等优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物检测领域，特别是涉及一种伤寒杆菌胶体金检测试剂盒及其制备方法和用途。
技术介绍
伤寒是由伤寒杆菌引起的经消化道传播的急性肠道传染病。临床特征为长程发热、全身中毒症状、相对缓脉(脉搏与体温不成比例)、肝脾肿大、皮肤玫瑰疹及白细胞减少等。主要并发症为肠出血、肠穿孔。传染源为患者及菌者。全年可发病，但多见于夏秋季节，每年的7-10月是伤寒的高发季节，与夏秋季节人们喜食生冷食物和苍蝇活动频繁有关。全程均有传染性，以病程第2-4周传染性最低。人对伤寒普遍易感，病后可获得持久性免疫力，再次患病者极少。小儿伤寒一般较成人清，且以学龄儿童多见。伤寒是由伤寒杆菌感染机体所致的一种乙类急性肠道传染病。目前仍是我国及许多发展中国家较为常见的传染病之一。其病死率不高，临床症状常不典型，容易误诊。因此，早期快速诊断是防治该病的关键和重点。
技术实现思路
鉴于以上所述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种伤寒杆菌胶体金检测试剂盒及其制备方法和用途，用于解决现有技术中的问题。为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术采用以下技术方案：本专利技术的第一方面，提供一种伤寒杆菌胶体金检测试剂盒，包括试纸卡，所述试纸卡包括底板、及位于底板表面的从加样端开始依次排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述金标垫上包含重组伤寒杆菌抗原和鼠IgG，所述硝酸纤维素膜上包被有检测线和质控线，所述金标垫上的重组伤寒杆菌抗原和鼠IgG采用胶体金标记。优选的，所述金标垫上的重组伤寒杆菌抗原和鼠IgG采用150nm胶体金标记，具有信号受背景干扰小，检测灵敏度高，结果重复性好的优点。优选的，所述底板为PVC底板。优选的，所述硝酸纤维素膜上，检测线位于离加样端较近一侧，质控线位于离加样端较远一侧。优选的，所述检测线上包被有重组伤寒杆菌抗原。所述金标垫上的重组伤寒杆菌抗原与检测线上的重组伤寒杆菌抗原可以是相同的抗原，也可以是不同的抗原。优选的，质控线上包被羊抗鼠抗体。优选的，所述样品垫采用缓冲液处理，所述缓冲液选自PBS缓冲液、Tris-HCl缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓冲液和柠檬酸-磷酸盐缓冲液中的一种或多种的组合，缓冲液的浓度为50-100mM。优选的，本专利技术所述的金标垫还经过预处理，预处理时所使用的预处理缓冲液选自甘氨酸缓冲液、Tris-HCl缓冲液、硼酸盐缓冲液的一种或多种的组合，缓冲液的浓度为10-40mM。优选的，所述缓冲液还包括反应增强剂，所述反应增强剂选自PEG4000、PEG6000、PEG8000和PEG20000中的任意一种，所述反应增强剂的浓度为10～50g/L。优选的，所述缓冲溶液还包括表面活性剂，所述表面活性剂选自S-19TWEEN20、S-20TWEEN80、S-13TRITONX-45、S-14TRITONX-100、S-15TRITONX305中的任意一种或多种的组合，所述表面活性剂的浓度为20～40g/L。优选的，为了使得试剂盒具有更佳的灵敏度和特异性，本专利技术所述的金标垫在预处理时所使用的预处理缓冲液包括下列组分：果糖、氢氧化铝、葡萄糖、氯化钠和甘氨酸，且果糖、氢氧化铝、葡萄糖、氯化钾和甘氨酸的总浓度为4.5－6.5g/L，缓冲液的pH值为7.3－7.5。优选的，各组分在缓冲液中的浓度为：果糖1.0-2.0g/L；氢氧化铝0.25-0.75g/L；葡萄糖1.0-1.5g/L；氯化钠0.25-0.5g/L；甘氨酸2.0-2.25g/L。所述预处理缓冲液的溶剂为水。所述预处理的具体步骤为：将金标垫在预处理液中浸泡1.5～2h，取出放于36～38℃烘干。所述预处理缓冲液可使用本领域各种常用的pH调节剂进行pH值的调节。优选的，所述试剂盒还包括卡壳，所述卡壳包括背卡和上盖，所述背卡设有试纸卡卡槽，所述试纸卡嵌于所述试纸卡卡槽内，所述上盖设有测试窗和加样孔，所述测试窗的位置与所述检测线和质控线的位置相配合，所述加样孔的位置与所述样品垫的位置相配合。更优选的，所述卡壳为塑料卡壳。优选的，所述检测试剂盒用于检测伤寒杆菌。本专利技术所提供的伤寒杆菌胶体金检测试剂盒，可配套免疫定量分析仪器使用。免疫分析仪器通过采集检测线(T)和质控线(C)条带荧光信号，计算T/C信号值。使用前先将不同标准品滴加到试纸卡上，分析处理建立定标曲线(T/C信号值与标准品真实值的关系)，再将检测样品时获得的T/C值与标准曲线比较，即可获得检测样品中的重组伤寒杆菌抗体含量。本专利技术第二方面提供所述伤寒杆菌胶体金检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：1)用胶体金标记的重组伤寒杆菌抗原和鼠IgG溶液喷涂金标垫，制得包含重组伤寒杆菌抗原和鼠IgG的金标垫；2)在硝酸纤维素膜的检测线和质控线上分别喷涂重组伤寒杆菌抗原及羊抗鼠抗体，制得包被后的硝酸纤维素膜；3)将样品垫、步骤1)制备金标垫、步骤2)制备的硝酸纤维素膜、吸水垫依次粘贴在底板上，切裁制得检测试纸卡；最后将检测试纸卡装入卡壳制得检测试剂盒。优选的，本专利技术所述的金标垫还经过预处理，预处理时所使用的预处理缓冲液选自甘氨酸缓冲液、Tris-HCl缓冲液、硼酸盐缓冲液的一种或多种的组合，缓冲液的浓度为10-40mM。优选的，所述缓冲液还包括反应增强剂，所述反应增强剂选自PEG4000、PEG6000、PEG8000和PEG20000中的任意一种，所述反应增强剂的浓度为10～50g/L。优选的，所述缓冲溶液还包括表面活性剂，所述表面活性剂选自S-19TWEEN20、S-20TWEEN80、S-13TRITONX-45、S-14TRITONX-100、S-15TRITONX305中的任意一种或多种的组合，所述表面活性剂的浓度为20～40g/L。优选的，为了使得试剂盒具有更佳的灵敏度和特异性，本专利技术所述的金标垫在预处理时所使用的预处理缓冲液包括下列组分：果糖、氢氧化铝、葡萄糖、氯化钠和甘氨酸，且果糖、氢氧化铝、葡萄糖、氯化钾和甘氨酸的总浓度为4.5－6.5g/L，缓冲液的pH值为7.3－7.5。优选的，各组分在缓冲液中的浓度为：果糖1.0-2.0g/L；氢氧化铝0.25-0.75g/L；葡萄糖1.0-1.5g/L；氯化钠0.25-0.5g/L；甘氨酸2.0-2.25g/L。所述预处理缓冲液的溶剂为水。所述预处理的具体步骤为：将金标垫在预处理液中浸泡1.5～2h，取出放于36～38℃烘干。所述预处理缓冲液可使用本领域各种常用的pH调节剂进行pH值的调节。本专利技术第三方面提供所述伤寒杆菌胶体金检测试剂盒在伤寒杆菌检测领域的用途。本专利技术的有益效果为：本专利技术所提供的伤寒杆菌胶体金检测试剂盒首次将伤寒杆菌通过胶体金免疫层析技术进行检测，兼具高灵敏性和高特异性，能够快速检测伤寒杆菌。此外，所述检测试剂盒具有操作快速简便、结果准确、经济适用等优点。具体实施方式以下通过特定的具体实例说明本专利技术的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本专利技术的其他优点与功效。本专利技术还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本专利技术的精神下进行各种修饰或改变。在进一步描述本专利技术具体实施方式之前，应理解，本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种伤寒杆菌胶体金检测试剂盒，包括试纸卡，试纸卡包括底板、及位于底板表面的从加样端开始依次排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述金标垫上包含重组伤寒杆菌抗原和鼠IgG，所述硝酸纤维素膜上包被有检测线和质控线，所述金标垫上的重组伤寒杆菌抗原和鼠IgG采用胶体金标记。

【技术特征摘要】
1.一种伤寒杆菌胶体金检测试剂盒，包括试纸卡，试纸卡包括底板、及位于底板表面的从加样端开始依次排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述金标垫上包含重组伤寒杆菌抗原和鼠IgG，所述硝酸纤维素膜上包被有检测线和质控线，所述金标垫上的重组伤寒杆菌抗原和鼠IgG采用胶体金标记。2.如权利要求1所述的胶体金检测试剂盒，其特征在于，所述硝酸纤维素膜上，检测线位于离加样端较近一侧，质控线位于离加样端较远一侧。3.如权利要求1所述的胶体金检测试剂盒，其特征在于，所述检测线上包被有重组伤寒杆菌抗原。4.如权利要求1所述的胶体金检测试剂盒，其特征在于，质控线上包被羊抗鼠抗体。5.如权利要求1所述的胶体金检测试剂盒，其特征在于，所述样品垫采用缓冲液处理，所述缓冲液选自PBS缓冲液、Tris-HCl缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓冲液和柠檬酸-磷酸盐缓冲液中的一种或多种的组合，缓冲液的浓度为50～100mM。6.如权利要求1所述的胶体金检测试剂盒，其特征在于，所述金标垫采用缓冲液处理，所述缓冲液选自甘氨酸缓冲液、Tris-HCl缓冲液、硼酸盐缓冲液的一种或多种的组合，缓冲液的浓度为10～40mM。7.根据权利要求6...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁晓辉，毛远丽，
申请(专利权)人：上海凯创生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31