幽门螺杆菌IgA抗体检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种幽门螺杆菌IgA抗体检测试剂盒及其制备方法，所述幽门螺杆菌IgA抗体检测试剂盒包括检测条，所述检测条包括金结合物垫和反应膜，所述金结合物垫包被有胶体金标记的鼠抗人IgA单克隆抗体，所述反应膜包括检测线和质控线，所述检测线包被有重组幽门螺杆菌抗原，所述质控线包被有羊抗鼠IgA多克隆抗体。制备该幽门螺杆菌IgA抗体检测试剂盒包括反应膜的制备、金结合物垫的制备、切割装配几个步骤。该幽门螺杆菌IgA抗体检测试剂盒，操作简便，适用广泛，可以作为动态评估幽门螺杆菌治疗效果的重要依据。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及免疫检测领域，特别是指一种幽门螺杆菌IgA抗体检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
幽门螺杆菌是一种单极、多鞭毛、末端钝圆、螺旋形弯曲的革兰氏阴性、微需氧细菌。在人群中的感染相当普遍，世界各地、各年龄层均有感染，普遍感染率在40％左右，感染率与性别无关，但随年龄的增长而上升。并且感染率在发展中国家明显高于发达国家，与经济收入、住房条件、卫生设施情况、受教育程度和卫生习惯等方面相关。幽门螺杆菌感染后，主要生存于胃部及十二指肠的各区域内，会引起胃黏膜轻微的慢性发炎，甚至导致胃及十二指肠溃疡与胃癌等严重后果。因此，对幽门螺杆菌感染的诊断，对疾病的预防、控制、早期治疗十分关键。目前检测幽门螺杆菌感染的主要方法有：(1)胃镜采样检测患者做胃镜检查时采样，活检样本进行显微镜检测，判断是否存在幽门螺杆菌。由于受主观性及观察时间的影响，该方法并不可靠。并且，胃镜采样难度较大、操作复杂、费用高、病人顺从性差。(2)细菌的直接检测将胃粘膜活检标本进行幽门螺杆菌培养，以诊断是否感染。该方法特异性高，是幽门螺杆菌感染诊断的“金标准”。但该方法操作要求高、成本高、耗时长、不适于快速临床诊断使用。并且，易受胃粘膜组织中细菌量过少、细菌繁殖能力差等因素的影响，造成幽门螺杆菌的培养失败，进而导致假阴性结果。(3)尿素酶检测幽门螺杆菌可产生的尿素酶，分解尿素产生氨，进而pH值升高，胃粘膜组织呈碱性，据此原理可通过加入pH指示剂通过颜色的改变判断有无幽
门螺杆菌感染存在。(4)分子生物学检测主要有聚合酶链式反应技术和单链构象多态性分析法，通过鼻胃管收集5mL胃液进行检测，但PCR方法应用于胃活检组织诊断幽门螺杆菌感染，与细菌培养和组织学染色镜检比较无明显优越性。并且存在引物特异性问题，如针对尿素酶基因的引物，可能与口腔和胃内其它尿素酶阳性菌丛起交叉反应。(5)免疫学检测免疫学检测方法在幽门螺杆菌的诊断中使用较为广泛，主要是通过测定血清中的幽门螺杆菌抗体诊断幽门螺杆菌感染，包括补体结合试验、凝集试验、被动血凝测定、免疫印迹技术和酶联免疫吸附测定法(ELISA)、胶体金技术定性检测等。其中，胶体金技术定性检测操作简便，成本低廉，特异性好，灵敏度高，适于普及并可单份检测，更适合于流行病学调查及现场应用，已广泛使用。而目前基于胶体金技术的幽门螺杆菌检测方法多为检测IgG抗体，IgG抗体的检测不能判断治疗效果，而IgA抗体在抗幽门螺杆菌治疗后一个月开始下降，3个月时平均下降30％。对IgA抗体的检测是动态评估幽门螺杆菌治疗效果的重要依据，同时也是IgG抗体检测的一个重要补充。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提出一种幽门螺杆菌IgA抗体检测试剂盒，操作简便，适用广泛，特异性好，灵敏度高。基于上述目的本专利技术提供的幽门螺杆菌IgA抗体检测试剂盒包括检测条，所述检测条包括金结合物垫和反应膜，所述金结合物垫包被有胶体金标记的鼠抗人IgA单克隆抗体，所述反应膜包括检测线和质控线，所述检测线包被有重组幽门螺杆菌抗原，所述质控线包被有羊抗鼠IgA多克隆抗体。较佳的，所述幽门螺杆菌抗原是应用基因工程方法重组表达获得，浓度为2.0-10.0mg/mL。较佳的，制备所述幽门螺杆菌抗原所用的PCR引物为：5'-AGCCATATGGAAATAC AACAAACACAC-3'；5'-GCACTCGAGTTAAAGAGAAGCTTTATACCCTCC-3'。较佳的，所述羊抗鼠IgA多克隆抗体浓度为4.0-10.0mg/mL，所述鼠抗人IgA单克隆抗体浓度为2.0-10.0mg/mL。较佳的，所述幽门螺杆菌IgA抗体检测试剂盒还包括样本稀释液，该样本稀释液为磷酸盐缓冲液。可选的，所述检测条放置于长方形塑料盒中，构成检测卡，该检测卡上设有样品孔和检测孔，所述样品孔与所述检测条的所述样品垫位置对应，所述检测孔对应所述检测条的所述检测线和所述质控线。基于相同的专利技术构思，本专利技术还提供了上述幽门螺杆菌IgA抗体检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：(1)反应膜的制备：稀释所述重组幽门螺杆菌抗原和所述羊抗鼠IgA多克隆抗体，并喷涂至所述反应膜上，分别形成所述检测线与质控线，干燥备用；(2)金结合物垫的制备：将所述鼠抗人IgA单克隆抗体与胶体金进行偶联制得胶体金标的记鼠抗人IgA单克隆抗体溶液，调整浓度，并浸泡所述金结合物垫，铺金，干燥备用；(3)切割装配：将所述反应膜、金结合物垫、粗纤维滤纸、样品垫装配至所述反应板，切割后形成所述检测条。较佳的，所述胶体金标记的鼠抗人IgA单克隆抗体的制备方法包括以下步骤：(1)使用碳酸钾溶液调节胶体金pH值至8.5-9.0；(2)加入鼠抗人IgA单克隆抗体，搅拌；(3)加入10％牛血清白蛋白溶液，搅拌；(4)离心，弃去上清液；(5)加入胶体金结合物稀释液，即得。较佳的，所述胶体金标记的鼠抗人IgA单克隆抗体的制备方法步骤1)中，碳酸钾溶液调节胶体金pH值至8.5。本试剂盒的原理为：采用胶体金免疫层析技术原理，在硝酸纤维素膜上的检测线包被重组幽门螺杆菌抗原，在质控线包被羊抗鼠IgA多克隆抗体，在金标垫上包被胶体金标记的鼠抗人IgA单克隆抗体。用于定性检测全血或血清(浆)样本中的
幽门螺杆菌IgA抗体。检测阳性样本时，样本中的幽门螺杆菌IgA抗体可与胶体金标记的鼠抗人IgA单克隆抗体结合，形成免疫复合物，由于层析作用复合物及样本在硝酸纤维素膜内部向前流动。当复合物经过检测线时与包被的重组幽门螺杆菌抗原结合，形成“胶体金-鼠抗人IgA单克隆抗体-幽门螺杆菌IgA抗体-重组幽门螺杆菌抗原”而凝集显色。剩余的胶体金标记鼠抗人IgA单克隆抗体与质控线包被的羊抗鼠IgA多克隆抗体结合而凝集显色。检测阴性样本时，样本中不含幽门螺杆菌IgA抗体，致使不能形成免疫复合物，则只能在质控线处显色。从上面所述可以看出，本专利技术提供的幽门螺杆菌IgA抗体检测试剂盒具有快速、简便、不需特殊设备，适用广泛，特异性好，灵敏度高。整个操作时间仅需15-20分钟，适用于临床检测、现场调查、以及流行病学调查等，可以作为动态评估幽门螺杆菌治疗效果的重要依据。附图说明图1为本专利技术实施例幽门螺杆菌IgA抗体检测试剂盒中检测条的结构示意图；图2为本专利技术实施例幽门螺杆菌IgA抗体检测试剂盒中检测卡的结构示意图。具体实施方式为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，并参照附图，对本专利技术进一步详细说明。实施例1：在本实施例中，所述幽门螺杆菌IgA抗体检测试剂盒，包括检测条或检测卡、样本稀释液。图1为本专利技术实施例幽门螺杆菌IgA抗体检测试剂盒中检测条的结构示意图，如图1所示，所述检测条包括反应板1，以及粘附于所述反应板上1的样品垫2、金结合物垫3、反应膜4、粗纤维滤纸5。在本实施例中，所述金结合物垫3包被有胶体金标记的鼠抗人IgA单克隆抗体。作为一个较佳的实施例，所述鼠抗人IgA单克隆抗体标记胶体金前为无色透明液体，浓度为2.0-10.0mg/mL。较佳地，所述鼠抗人IgA单克隆抗体浓度为2mg/mL。用聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)测定，上样量为
10μL时，该鼠抗人IgA单克隆抗体显示为重链和轻链各一条带。在本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种幽门螺杆菌IgA抗体检测试剂盒，其特征在于，包括检测条，所述检测条包括金结合物垫和反应膜，所述金结合物垫包被有胶体金标记的鼠抗人IgA单克隆抗体，所述反应膜包括检测线和质控线，所述检测线包被有重组幽门螺杆菌抗原，所述质控线包被有羊抗鼠IgA多克隆抗体。

【技术特征摘要】
1.一种幽门螺杆菌IgA抗体检测试剂盒，其特征在于，包括检测条，所述检测条包括金结合物垫和反应膜，所述金结合物垫包被有胶体金标记的鼠抗人IgA单克隆抗体，所述反应膜包括检测线和质控线，所述检测线包被有重组幽门螺杆菌抗原，所述质控线包被有羊抗鼠IgA多克隆抗体。2.根据权利要求1所述的幽门螺杆菌IgA抗体检测试剂盒，其特征在于，所述幽门螺杆菌抗原是应用基因工程方法重组表达获得，浓度为2.0-10.0mg/mL。3.根据权利要求2所述的幽门螺杆菌IgA抗体检测试剂盒，其特征在于，制备所述幽门螺杆菌抗原所用的PCR引物为：5'-AGCCATATGGAAATAC AACAAACACAC-3'；5'-GCACTCGAGTTAAAGAGAAGCTTTATACCCTCC-3'。4.根据权利要求1所述的幽门螺杆菌IgA抗体检测试剂盒，其特征在于，所述羊抗鼠IgA多克隆抗体浓度为4.0-10.0mg/mL，所述鼠抗人IgA单克隆抗体浓度为2.0-10.0mg/mL。5.根据权利要求1所述的幽门螺杆菌IgA抗体检测试剂盒，其特征在于，还包括样本稀释液，该样本稀释液为磷酸盐缓冲液。6.根据权利要求1至5任意一项所述的幽门螺杆菌IgA抗体检测试剂盒，其特征在于，所述检测条放置于长方形塑料盒中，构成检测卡，该检测...

【专利技术属性】
技术研发人员：李海波，
申请(专利权)人：北京中检安泰诊断科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11