一种检测稻瘟灵的试纸条及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供一种检测稻瘟灵的试纸条及其制备方法和应用，该试纸条包括样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫和底板，所述反应膜上具有包被有稻瘟灵半抗原

【技术实现步骤摘要】
一种检测稻瘟灵的试纸条及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及稻瘟灵的检测，具体涉及一种用于检测稻瘟灵的胶体金试纸条，其特别适用于烟叶中稻瘟灵残留的检测。

技术介绍

[0002]稻瘟灵(Isoprothiolane)又名异丙硫环、富士一号，化学名称1,3
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二硫戊环
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亚基丙二酸二异丙酯，是一种高效内吸性杀菌剂，其杀菌谱较窄，是防治稻瘟病的特效药，特别是对穗颈瘟具有优良效果，能通过植物的根、茎、叶各个部位内吸传导，并能达到心叶。其对稻苗瘟和小球菌核病也均有效，大面积使用还可兼治稻飞虱、叶蝉，并对植物生长有调节作用。
[0003]但随着稻瘟灵的大量施用，有可能会污染周围的环境，还可能使其残留于农产品中，对人类造成潜在的健康威胁，所以其在水果、蔬菜、烟草生产中的残留问题受到越来越多的关注。我国针对不同作物，制定了稻瘟灵最大残留限量标准，其中西瓜的最大残留限量为0.1mg/kg，大米的最大残留限量为1mg/kg，烟草的最大残留限量为2mg/kg。
[0004]目前，文献只见对谷物、水果、蔬菜中这类杀菌剂残留量的检测报道，而没有见到有关烟叶中残留量的测定方法的报道。国内外对稻瘟灵残留的检测方法主要有气相色谱
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质谱联用(GC
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MS)、高效液相色谱
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质谱联用(HPLC
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MS)、气相色谱法(GC)等。仪器方法具备检测灵敏度高、特异性强等优势，但是检测样本前处理繁琐、耗时，样品还需提取和净化处理，同时仪器检测方法需要昂贵的大型仪器和设备，配备专业的检测技术人员进行操作和管理，无法进行现场大规模检测，时效性差，难以推广。因此，开发一种不受检测设备限制并且能够实现对大批量样品进行快速检测的产品和方法成为迫切需要解决的问题。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于克服现有的检测稻瘟灵的方法存在的对设备依赖性高，并且不能够实现对大批量样品的快速检测的特点，提供一种操作简单、灵敏度高、检测速度快、成本低、不受检测设备限制的试纸条及其制备方法和应用，以实现对大批量的稻瘟灵样品进行快速检测和现场监控。
[0006]为了实现本专利技术的目的，本专利技术提供了一种检测稻瘟灵的试纸条，该试纸条包括样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫和底板；所述反应膜上具有包被有稻瘟灵半抗原
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载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线；所述结合物释放垫上喷涂有稻瘟灵单克隆抗体
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胶体金标记物。
[0007]所述稻瘟灵单克隆抗体是以稻瘟灵半抗原
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载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得。
[0008]所述稻瘟灵半抗原
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载体蛋白偶联物由稻瘟灵半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白或人血清白蛋白，所述稻瘟灵半抗原是以丙二酸二异丙酯为原料，与二硫化碳和3,4
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二氯丁酸在强碱中进行缩合反应得
到的，其分子结构式为：
[0009][0010]所述样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫依次粘贴在底板上，所述结合物释放垫1/3～1/2被覆盖于样品吸收垫下。
[0011]所述底板可为PVC底板或其他硬质不吸水的材料；所述样品吸收垫可为吸滤纸或滤油纸；所述结合物释放垫可为玻璃棉或聚酯材料；所述吸水垫为吸水纸；所述反应膜可为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜。
[0012]本专利技术还提供了一种制备上述试纸条的方法，其包括以下步骤：
[0013]1)制备喷涂有稻瘟灵单克隆抗体
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胶体金标记物的结合物释放垫；
[0014]2)制备具有包被有稻瘟灵半抗原
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载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线的反应膜；
[0015]3)将1)和2)制备好的结合物释放垫、反应膜与样品吸收垫、吸水垫和底板组装成试纸条。
[0016]具体地说，步骤包括：
[0017]1)以丙二酸二异丙酯为原料，与二硫化碳和3,4
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二氯丁酸在强碱中进行缩合反应，制备稻瘟灵半抗原；
[0018]2)将稻瘟灵半抗原与载体蛋白偶联，制备稻瘟灵半抗原
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载体蛋白偶联物；
[0019]3)用稻瘟灵半抗原
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载体蛋白偶联物免疫小鼠，将小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞通过融合、筛选，得到分泌稻瘟灵单克隆抗体的杂交瘤细胞株；
[0020]4)提取小鼠IgG免疫健康山羊，得到羊抗鼠抗抗体；
[0021]5)分别将稻瘟灵半抗原
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载体蛋白偶联物和羊抗鼠抗抗体包被于反应膜的检测线(T)和质控线(C)上；
[0022]6)用柠檬酸三钠与氯金酸反应制备胶体金；
[0023]7)将制备的稻瘟灵单克隆抗体加入到制备的胶体金中，得到稻瘟灵单克隆抗体
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胶体金标记物；
[0024]8)将稻瘟灵单克隆抗体
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胶体金标记物喷涂在结合物释放垫上，37℃烘干2h后取出，置于干燥环境中保存备用；
[0025]9)将样品吸收垫用含1％牛血清白蛋白、pH为7.2的0.02mol/L磷酸盐缓冲液浸泡2h，37℃烘干2h备用；
[0026]10)在底板上按顺序粘贴上样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫，结合物释放垫从起始端有1/3区域被样品吸收垫覆盖。最后切成3.95mm宽的小条，装在特制的塑料制卡壳中，以铝箔袋密封，4～30℃条件下保存12个月。结合物释放垫的1/3被样品吸收垫覆盖
可以延长检测结果观察时间，使样品吸收垫将检测液体充分吸收并与金标抗体充分反应，从而减少误差。
[0027]本专利技术还提供了一种应用上述试纸条检测样品中稻瘟灵残留的方法，它包括以下步骤：
[0028](1)样品前处理；
[0029](2)用试纸条进行检测；
[0030](3)分析检测结果。
[0031]本专利技术的稻瘟灵快速检测试纸条采用高度特异性的抗体抗原反应及免疫层析分析技术，将稻瘟灵单克隆抗体
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胶体金标记物固定于结合物释放垫上，样品中的稻瘟灵在流动过程中与结合物释放垫上的稻瘟灵单克隆抗体
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胶体金标记物结合，形成稻瘟灵
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抗体
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胶体金标记物。样本中的稻瘟灵与反应膜检测线上的稻瘟灵半抗原
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载体蛋白偶联物竞争结合稻瘟灵单克隆抗体
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胶体金标记物，根据检测线红色条带深浅来判断待测样品液中是否含有稻瘟灵残留。
[0032]检测时，样品经处理后滴入样品吸收垫，当稻瘟灵在样品中的浓度低于检测限或为零时，单克隆抗体
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胶体金标记物在层析过程中会与固定在反应膜上的稻瘟灵半抗原
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载体蛋白偶联物结合，在检测线(T)和质控线(C)上各出现一条红色条带，且本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测稻瘟灵的试纸条，包括样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫和底板，所述反应膜上具有包被有稻瘟灵半抗原
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载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线，所述结合物释放垫上喷涂有稻瘟灵单克隆抗体
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胶体金标记物；所述稻瘟灵单克隆抗体是以稻瘟灵半抗原
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载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得；所述稻瘟灵半抗原
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载体蛋白偶联物由稻瘟灵半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白或人血清白蛋白，其特征在于，所述稻瘟灵半抗原是以丙二酸二异丙酯为原料，与二硫化碳和3,4
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二氯丁酸在强碱中进行缩合反应得到的，其分子结构式为：2.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫依次粘...

【专利技术属性】
技术研发人员：王兆芹，吴小胜，崔廷婷，万宇平，崔海峰，张瑜，李晓芳，
申请(专利权)人：北京勤邦生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：