一种食品中氟喹诺酮类药物的检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种食品中氟喹诺酮类药物的检测试剂盒，包括：包被有氟喹诺酮类药物抗原的酶标板、氟喹诺酮类药物单克隆抗体、甲状腺过氧化物酶标记羊抗鼠抗抗体、标准品溶液、底物显色液、终止液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液；氟喹诺酮类药物抗原为氟喹诺酮类药物半抗原与钥孔血蓝蛋白的偶联物；甲状腺过氧化物酶标记羊抗鼠抗抗体是采用戊二醛交联法将标记酶甲状腺过氧化物酶与羊抗鼠抗抗体偶联得到。本发明专利技术的试剂盒灵敏度高，稳定性强，适用于鱼、虾等水产品，鸡肉、猪肉等畜禽产品。

Reagent kit for detecting fluoroquinolones in food

The invention discloses a test kit for fluoroquinolones in food includes: coated with fluoroquinolones antigen ELISA plate, fluoroquinolones monoclonal antibody and thyroid peroxidase labeled Goat anti mouse antibody, standard solution, substrate solution and stop solution, a concentrated cleaning solution, concentrated complex solution; fluoroquinolones antigen conjugates of fluoroquinolones and the hapten KLH; thyroid peroxidase labeled Goat anti mouse antibody by glutaraldehyde cross-linking method the marker enzyme of thyroid peroxidase and Goat anti mouse antibody conjugate obtained. The reagent box of the invention has high sensitivity and strong stability, and is suitable for aquatic products such as fish, shrimp, chicken, pork and other livestock and poultry products.

【技术实现步骤摘要】
一种食品中氟喹诺酮类药物的检测试剂盒
本专利技术涉及食品检测
，具体是一种食品中氟喹诺酮类药物的检测试剂盒。
技术介绍
氟喹诺酮是一类抗菌药，作用机制是：抑制细菌DNA螺旋酶，阻碍DNA复制。氟喹诺酮类对G-杆菌，包括绿脓杆菌均有良好抗菌作用，对G+球菌也具一定抗菌活性，尤其对耐药G-杆菌，仍可呈现敏感。临床用于治疗尿路、肠道、呼吸道以及皮肤软组织、腹腔、骨关节等感染。任何药物都有副作用，氟喹诺酮也不例外，而且由于氟喹诺酮类药物的广泛应用，常常有不合理用药和滥用药情况发生，氟喹诺酮药物的不良反应主要发生在人类，动物则反应不大，但动物用药后的药物残留可以通过食物链传播，同样会引起人类不良反应现象的发生，影响人类健康，为此，对动物体内氟喹诺酮的残留检测已越来越引起人们的重视。目前氟喹诺酮类药物的检测方法主要是高效液相色谱法，液质联用法等紫外仪器方法，但是这些方法存在操作繁琐，耗时，费用比较贵等缺点，不能实现大量样品的快速检测。因此建立一种快速简便的氟喹诺酮类药物检测方法具有重要意义。酶联免疫法是一种极为高效、敏感、快速的检测方法，检测时对样本的纯度要求不高而且操作简便，适用于大量样本的现场快速检测。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种灵敏度高、操作简便的食品中氟喹诺酮类药物的检测试剂盒。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种食品中氟喹诺酮类药物的检测试剂盒，包括：包被有氟喹诺酮类药物抗原的酶标板、氟喹诺酮类药物单克隆抗体、甲状腺过氧化物酶标记羊抗鼠抗抗体、标准品溶液、底物显色液、终止液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液；所述的氟喹诺酮类药物抗原为氟喹诺酮类药物半抗原与钥孔血蓝蛋白的偶联物；所述的氟喹诺酮类药物半抗原的制备步骤如下：5g氟喹诺酮类药物和40～45ml二甲基苯二胺的混合液，室温下缓慢滴加入含2.8～3.2g对二甲氨基苯甲醛的60～70ml二甲基苯二胺溶液中，滴加完毕后，从室温升温至56～58℃反应1.0～1.4h，除去溶剂，柱层析纯化，得到；所述的甲状腺过氧化物酶标记羊抗鼠抗抗体是采用戊二醛交联法将标记酶甲状腺过氧化物酶与羊抗鼠抗抗体偶联得到。作为本专利技术进一步的方案：所述的标准品溶液的浓度分别为0μg/L、0.1μg/L、0.4μg/L、0.8μg/L、1.6μg/L、3.2μg/L、6.4μg/L、12.8μg/L、25.6μg/L。作为本专利技术进一步的方案：所述的底物显色液由底物显色A液和底物显色B液组合而成；所述的底物显色A液为含0.4～0.6mmol/L的过氧化氢脲的柠檬酸-磷酸二氢钠缓冲溶液，所述的底物显色B液为四甲基联苯胺溶液。作为本专利技术进一步的方案：所述的终止液为1.4～1.6mol/L的氢氧化钠溶液。作为本专利技术进一步的方案：所述的浓缩洗涤液为20×浓缩洗涤液，具体是含0.55～0.62%的吐温-20、0.008～0.01%的大庆霉素防腐剂、浓度为0.16～0.18mol/L的pH值为7.2～7.4的磷酸盐缓冲液。作为本专利技术进一步的方案：所述的浓缩复溶液为20×浓缩复溶液，具体是浓度为0.22～0.26mol/L的pH值为7.6～7.8的磷酸盐缓冲液。利用所述的食品中氟喹诺酮类药物的检测试剂盒进行检测的方法，包括以下步骤：（1）将待测样品进行前处理，得到待测样品溶液；（2）用所述的检测试剂盒检测待测样品溶液；（3）分析检测结果。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术的试剂盒灵敏度高，稳定性强，该试剂盒可用于氟喹诺酮类药物的快速检测，适用于鱼、虾等水产品，鸡肉、猪肉等畜禽产品；利用该试剂盒进行检测时，灵敏度均可达0.2μg/L；本专利技术的试剂盒操作简单，读取结果时间短，按试剂盒说明在5～8min内即可判定检测结果；可批量检测，一步到位，成本低廉，投资少，见效快。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1本专利技术实施例中，一种食品中氟喹诺酮类药物的检测试剂盒，包括：包被有氟喹诺酮类药物抗原的酶标板、氟喹诺酮类药物单克隆抗体、甲状腺过氧化物酶标记羊抗鼠抗抗体、标准品溶液、底物显色液、终止液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液。氟喹诺酮类药物抗原为氟喹诺酮类药物半抗原与钥孔血蓝蛋白的偶联物；氟喹诺酮类药物半抗原的制备步骤如下：5g氟喹诺酮类药物和40～45ml二甲基苯二胺的混合液，室温下缓慢滴加入含2.8～3.2g对二甲氨基苯甲醛的60～70ml二甲基苯二胺溶液中，滴加完毕后，从室温升温至56～58℃反应1.0～1.4h，除去溶剂，柱层析纯化，得到。甲状腺过氧化物酶标记羊抗鼠抗抗体是采用戊二醛交联法将标记酶甲状腺过氧化物酶与羊抗鼠抗抗体偶联得到。标准品溶液的浓度分别为0μg/L、0.1μg/L、0.4μg/L、0.8μg/L、1.6μg/L、3.2μg/L、6.4μg/L、12.8μg/L、25.6μg/L。底物显色液由底物显色A液和底物显色B液组合而成；底物显色A液为含0.4～0.6mmol/L的过氧化氢脲的柠檬酸-磷酸二氢钠缓冲溶液，底物显色B液为四甲基联苯胺溶液。终止液为1.4～1.6mol/L的氢氧化钠溶液。浓缩洗涤液为20×浓缩洗涤液，具体是含0.55～0.62%的吐温-20、0.008～0.01%的大庆霉素防腐剂、浓度为0.16～0.18mol/L的pH值为7.2～7.4的磷酸盐缓冲液。浓缩复溶液为20×浓缩复溶液，具体是浓度为0.22～0.26mol/L的pH值为7.6～7.8的磷酸盐缓冲液。1、氟喹诺酮类药物半抗原的制备5g氟喹诺酮类药物和40～45ml二甲基苯二胺的混合液，室温下缓慢滴加入含2.8～3.2g对二甲氨基苯甲醛的60～70ml二甲基苯二胺溶液中，滴加完毕后，从室温升温至56～58℃反应1.0～1.4h，除去溶剂，柱层析纯化，得到氟喹诺酮类药物半抗原。2、氟喹诺酮类药物抗原的合成取氟喹诺酮类药物半抗原15mg用1ml二甲基苯二胺溶解，得到溶液A；取钥孔血蓝蛋白39mg用6ml水溶解，得到溶液B；将溶液A滴加入溶液B中，得到溶液C，室温反应20h；取NaBH412mg，用0.15ml的0.12mol/L的NaOH溶解后，倒入溶液C中，在4℃温度下反应1h；用0.008mol/l磷酸盐缓冲液在4℃条件下透析3天，每天换3次透析液，以除去未反应的小分子物质；分装，于-20℃保存备用。3、包被有氟喹诺酮类药物抗原的酶标板的制备用包被缓冲液将氟喹诺酮类药物抗原稀释成0.25～0.28μg/ml，每孔加入150μL，37℃避光孵育2h或4℃过夜，倾去孔中液体，洗涤液洗涤3次，拍干，每孔中加入150μL封闭缓冲液，37℃避光孵育2h或4℃过夜，倾去孔中液体拍干，用铝膜真空密闭保存。其中包被缓冲液为pH值9.0～9.2的0.05mol/L的碳酸盐缓冲液，封闭缓冲液为pH值7.4的0.1～0.2%的鸡卵清白蛋白的磷酸盐缓冲液。4、羊抗鼠抗抗体的制备以羊为免疫动物，以鼠源抗体为免疫原免疫无病原体羊，得到羊抗鼠抗抗体。5、甲状腺过氧化物酶标记羊抗鼠抗抗体的制本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种食品中氟喹诺酮类药物的检测试剂盒，其特征在于，包括：包被有氟喹诺酮类药物抗原的酶标板、氟喹诺酮类药物单克隆抗体、甲状腺过氧化物酶标记羊抗鼠抗抗体、标准品溶液、底物显色液、终止液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液；所述的氟喹诺酮类药物抗原为氟喹诺酮类药物半抗原与钥孔血蓝蛋白的偶联物；所述的氟喹诺酮类药物半抗原的制备步骤如下：5g氟喹诺酮类药物和40～45ml二甲基苯二胺的混合液，室温下缓慢滴加入含2.8～3.2g对二甲氨基苯甲醛的60～70ml二甲基苯二胺溶液中，滴加完毕后，从室温升温至56～58℃反应1.0～1.4h，除去溶剂，柱层析纯化，得到；所述的甲状腺过氧化物酶标记羊抗鼠抗抗体是采用戊二醛交联法将标记酶甲状腺过氧化物酶与羊抗鼠抗抗体偶联得到。

【技术特征摘要】
1.一种食品中氟喹诺酮类药物的检测试剂盒，其特征在于，包括：包被有氟喹诺酮类药物抗原的酶标板、氟喹诺酮类药物单克隆抗体、甲状腺过氧化物酶标记羊抗鼠抗抗体、标准品溶液、底物显色液、终止液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液；所述的氟喹诺酮类药物抗原为氟喹诺酮类药物半抗原与钥孔血蓝蛋白的偶联物；所述的氟喹诺酮类药物半抗原的制备步骤如下：5g氟喹诺酮类药物和40～45ml二甲基苯二胺的混合液，室温下缓慢滴加入含2.8～3.2g对二甲氨基苯甲醛的60～70ml二甲基苯二胺溶液中，滴加完毕后，从室温升温至56～58℃反应1.0～1.4h，除去溶剂，柱层析纯化，得到；所述的甲状腺过氧化物酶标记羊抗鼠抗抗体是采用戊二醛交联法将标记酶甲状腺过氧化物酶与羊抗鼠抗抗体偶联得到。2.根据权利要求1所述的食品中氟喹诺酮类药物的检测试剂盒，其特征在于，所述的标准品溶液的浓度分别为0μg/L、0.1μg/L、0.4μg/L、0.8μg/L、1.6μg/L、3.2μ...

【专利技术属性】
技术研发人员：张进，吴念绮，周朱晨，张根义，胡彬，朱倩倩，
申请(专利权)人：百奥森江苏食品安全科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32