基于MANF作为标记物的肝细胞肝癌和肝内胆管细胞癌鉴别产品及方法技术

本发明专利技术公开了基于MANF作为标记物的肝细胞肝癌和肝内胆管细胞癌鉴别产品及方法。本发明专利技术提供了检测MANF表达量的系统在制备鉴别或辅助鉴别肝细胞肝癌患者和肝内胆管细胞癌患者产品中的应用。本发明专利技术通过将MANF作为标记物，通过检测MANF在原发性肝癌肿瘤组织中的表达水平，鉴别肝细胞肝癌和肝内胆管细胞癌，建立有效地鉴别肝细胞肝癌和肝内胆管细胞癌的手段和指标，其灵敏度为92.5％，特异度为74.7％，为进行针对性合理治疗，改善患者的预后，从而提高患者生活质量和减轻患者经济负担奠定了基础。

Identification product and method for hepatocellular carcinoma and intrahepatic cholangiocarcinoma based on MANF as marker

The present invention discloses a hepatocellular carcinoma and intrahepatic cholangiocarcinoma identification product and a method based on MANF as a marker. The present invention provides a system for detecting the amount of MANF expression that is used in the preparation, identification, or identification of hepatocellular carcinoma patients and intrahepatic cholangiocarcinoma patients. The MANF as a marker, through the detection of MANF in primary hepatocellular carcinoma tissue expression level of liver cancer and liver cells in the differential diagnosis of hepatic cholangiocarcinoma, establish effective identification of liver cancer and liver in liver cells of cholangiocarcinoma methods and indicators, the sensitivity was 92.5%, specificity was 74.7%, for for reasonable treatment, improve the prognosis of patients, so as to improve the quality of life of patients and reduce the economic burden of the patients laid the foundation.

【技术实现步骤摘要】
基于MANF作为标记物的肝细胞肝癌和肝内胆管细胞癌鉴别产品及方法
本专利技术涉及生物
中基于MANF作为标记物的肝细胞肝癌和肝内胆管细胞癌鉴别产品及方法。
技术介绍
肝脏占位性病变可以是良性或恶性的肿瘤，恶性肿瘤可以是转移的或原发的。原发性肝癌(primarycarcinomaoftheliver)是我国常见恶性肿瘤之一。原发性肝癌主要类型为肝细胞肝癌(hepatocellulercarcinoma,HCC)和肝内胆管细胞癌(intrahepaticcholangiocarcinoma,ICC)。目前对于原发性肝癌手术后患者进行病理学诊断的原则主要根据手术切除肿瘤组织的组织学检查和患者临床检查等做出。由于肝细胞肝癌和肝内胆管细胞癌组织形态相近、免疫表型交叉，在临床病理诊断中常常出现困难；另一方面，两者的治疗方式和预后均不同，肝内胆管细胞癌发展更快，预后更差，需要更好地区别两类肿瘤，对患者进行针对性治疗，从而提高病人生活质量和减轻患者经济负担。现有鉴别肝细胞肝癌和肝内胆管细胞癌的标记物有AFP/CA199/HepPar1/CK19等，但是由于其敏感性和特异性不高，目前在临床诊疗中应用价值有限，往往难以解决病理诊断问题。内质网(endoplasmicreticulum,ER)是分泌性蛋白在细胞内进行折叠、修饰和组装的场所，这些加工过程是分泌性蛋白在分泌前进行功能成熟所必需的。在进化过程中，真核细胞形成了一个严格的质控系统，以确保内质网输出的蛋白具有正常的功能。而那些非折叠或错误折叠的多肽及没有组装好的蛋白将滞留在内质网，然后通过泛素-蛋白酶体通路被清除，这就是所谓的内质网相关的蛋白降解。一旦聚集在内质网的非折叠蛋白超过内质网的负荷能力，将会引起内质网平衡失调，从而导致内质网应激(ERstress)。最近研究发现，内质网应激与很多疾病密切相关，如神经退行性疾病、动脉粥样硬化、糖尿病、肿瘤及阮病毒病等。中脑星形胶质细胞来源神经营养因子(Mesencephalicastrocyte-derivedneurotrophicFactor,MANF)基因是沈玉先等通过微阵列技术从30000个基因中筛选出来的对内质网应激最显著的基因。该基因最初发现时被认为与肿瘤的发生有关，但后来的研究发现，MANF基因的这种突变属于正常基因的多态性，而非肿瘤所特有。但Petrova等在体外传代的大鼠中脑星形胶质细胞的培养液中分离得到了MANF，且MANF对多巴胺能神经元有选择性的促生长作用。重组人MANF可选择性地作用于体外培养的多巴胺能神经元，促进其存活，在低剂量时作用优于神经营养因子GDNF。研究发现MANF蛋白广泛存在于哺乳动物组织内，正常情况下组织细胞内MANF含量很低，当细胞遭受应激刺激时，细胞内MANF表达显著升高。MANF作为一种被内质网应激诱导表达的分泌性蛋白，它的水平增加可能是机体在遭受各种应激包括炎症刺激时所做出的一种防御机制，它的功能不仅仅局限于神经细胞，在内质网应激相关的生理和病理过程中可能具有更广泛的作用。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是如何有效地鉴别诊断肝细胞肝癌和肝内胆管细胞癌。为了解决以上技术问题，本专利技术提供了检测MANF表达量的系统在制备鉴别或辅助鉴别肝细胞肝癌患者和肝内胆管细胞癌患者产品中的应用。在上述应用中，所述检测MANF表达量的系统可包括通过免疫组织化学染色方法检测MANF表达量所需的试剂和/或仪器。在上述应用中，所述通过免疫组织化学染色方法检测MANF表达量所需的试剂可包括针对MANF的抗体，还可包括免疫组织化学染色方法检测MANF表达量所需要的其它试剂。在上述应用中，所述检测MANF表达量为检测原发性肝癌患者的肿瘤组织中的MANF表达量，所述鉴别或辅助鉴别肝细胞肝癌患者和肝内胆管细胞癌患者为鉴别原发性肝癌患者中的肝细胞肝癌患者和肝内胆管细胞癌患者。以MANF作为标记物的系统在制备鉴别或辅助鉴别肝细胞肝癌患者和肝内胆管细胞癌患者产品中的应用也属于本专利技术的保护范围。在上述应用中，所述鉴别或辅助鉴别肝细胞肝癌患者和肝内胆管细胞癌患者为鉴别原发性肝癌患者中的肝细胞肝癌患者和肝内胆管细胞癌患者。本专利技术还提供了鉴别原发性肝癌患者中的肝细胞肝癌患者和肝内胆管细胞癌患者的方法。本专利技术所提供的鉴别原发性肝癌患者中的肝细胞肝癌患者和肝内胆管细胞癌患者的方法，包括检测来自待诊断原发性肝癌患者的离体原发性肝癌肿瘤组织中的MANF表达量，根据所述MANF表达量诊断待诊断原发性肝癌患者是肝细胞肝癌患者还是肝内胆管细胞癌患者。本专利技术中，所述产品可为系统，所述系统可包括试剂和/或仪器。所述MANF可为人MANF。本专利技术通过将MANF作为标记物，通过检测MANF在原发性肝癌肿瘤组织中的表达水平，鉴别肝细胞肝癌和肝内胆管细胞癌，建立有效的鉴别肝细胞肝癌和肝内胆管细胞癌的手段和指标，其灵敏度为92.5％，特异度为74.7％，为进行针对性合理治疗，改善患者的预后，从而提高患者生活质量和减轻患者经济负担奠定了基础。附图说明图1是鉴别原发性肝癌患者中的肝细胞肝癌患者和肝内胆管细胞癌患者的流程图。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本专利技术保护的范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例1、鉴别原发性肝癌患者中的肝细胞肝癌患者和肝内胆管细胞癌患者如图1所示，鉴别原发性肝癌患者中的肝细胞肝癌患者和肝内胆管细胞癌患者的具体方法如下：步骤S1，分别收集中国某医院近年来临床和病理资料齐全的230例原发性肝癌患者的原发性肝癌肿瘤组织石蜡标本，其中，150例为肝细胞肝癌肿瘤组织石蜡标本，80例为肝内胆管细胞癌肿瘤组织石蜡标本。其中，原发性肝癌、肝细胞肝癌、肝内胆管细胞癌的诊断均结合临床、组织病理学和免疫组织化学染色等进行的综合诊断。步骤S2，对石蜡标本进行4μm厚连续切片，对切片采用HE染色，便于全面观察其组织构造；步骤S3，采用免疫组织化学法检测肝细胞肝癌和肝内胆管细胞癌肿瘤组织中MANF的蛋白表达，其具体步骤如下：步骤S301，将石蜡切片放入60℃恒温烤箱，烘烤时间为2小时以上；步骤S302，将切片脱蜡与水化：将切片置于二甲苯中浸泡10分钟，更换二甲苯后再浸泡10分钟；置于无水乙醇中浸泡5分钟；置入95％乙醇中浸泡5分钟；置入70％乙醇中浸泡5分钟；置入蒸馏水中浸泡5分钟；步骤S303，采用柠檬酸盐缓冲液高压抗原修复法进行抗原修复：将脱蜡水化的组织切片置于耐高温切片架上，同时将pH6.0的柠檬酸盐缓冲液在高压锅中加热至沸腾，再将切片架放入已沸腾的缓冲液中，关闭高压锅直至开始喷气时，盖上压力阀，2分钟后，将高压锅置入凉水中冷却直至室温，将切片取出；步骤S304，用PBS缓冲液(pH7.2-7.4)冲洗3次，每次冲洗5分钟；步骤S305，切片分别滴加50μl的MANF一抗试剂(将MANF抗血清用PBS缓冲液pH7.2-7.4稀本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测MANF表达量的系统在制备鉴别或辅助鉴别肝细胞肝癌患者和肝内胆管细胞癌患者产品中的应用。

【技术特征摘要】
1.检测MANF表达量的系统在制备鉴别或辅助鉴别肝细胞肝癌患者和肝内胆管细胞癌患者产品中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述检测MANF表达量的系统包括通过免疫组织化学染色方法检测MANF表达量所需的试剂和/或仪器。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述通过免疫组织化学染色方法检测MANF表达量所需的试剂包括针对MANF的抗体。4.根据权利要求1、2或3所述的应用，其特征在于：所述检测MANF表达量为检测原发性肝癌患者的肝癌肿瘤组织中的MANF表达量，所述鉴别或辅助鉴别肝细胞肝癌患者和肝内胆管细胞癌患者为鉴别原发性肝癌患者中的肝细胞肝癌患者和肝内胆管...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈玉先，吴正升，李红，李庆，沈玉君，
申请(专利权)人：安徽医科大学，
类型：发明
国别省市：安徽,34