一种病毒感染的免疫学快速检测试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术公开了一种病毒感染的免疫学快速检测试剂盒及检测方法，该试剂盒的组成如下：载玻片2个；水化溶液300μL；阳性病毒血清20μL；阴性病毒血清20μL；其中，水化溶液含10g/L牛血清白蛋白，100mL/L甘油，250mg/L THYRESFUS‑Anti‑V MoAb结合物的PBS液。本发明专利技术利用免疫学检测技术快速诊断病毒感染，且检测结果特异性高、敏感性强、肉眼易判断，适合于现场快速检测。

Immunological rapid detection kit and detection method for virus infection

Rapid detection kit and detection method of immunology, the invention discloses a virus infection, comprising the kit: slide 2; hydration solution 300 L; virus positive serum virus negative serum 20 L; 20 L; the water solution containing bovine serum albumin 10g/L, glycerol 100mL/L 250mg/L, THYRESFUS Anti V MoAb with PBS liquid. The invention uses the immunological detection technology to quickly diagnose the virus infection, and has the advantages of high specificity, high sensitivity and easy judgment.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物工程
，具体地说，涉及一种病毒感染的免疫学快速检测试剂盒及检测方法。
技术介绍
病毒是一类个体微小、无完整细胞结构、含单一核酸(DNA或RNA)型、必须在活细胞内寄生并复制的非细胞型微生物，它主要由核酸和蛋白质外壳组成。病毒性感染疾病是一类严重威胁人类健康的疾病。病毒的检测方法多种多样，病毒感染的检测方法有：病毒的分离培养技术、免疫学方法、分子生物学方法、流式细胞术。目前常用的分子生物学检测技术主要有核酸分子杂交技术、聚合酶链反应、基因芯片技术等。常用的免疫学检测技术主要有酶联免疫吸附试验、免疫荧光技术、放射免疫技术、化学发光免疫分析技术、电化学免疫分析技术、表面等离子体共振免疫分析技术、蛋白质芯片等。这些病毒的检测方法各有所长，但均存在一定的局限性，如敏感性不高、操作繁琐、周期长、费用高等问题，迫切需要开发研制一种快速、简便、灵敏、准确、经济的病毒感染检测技术。在临床上建立一种确实有效且快速的诊断方法越来越受到医学界的关注。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术针对上述的问题，提供了一种病毒感染的免疫学快速检测试剂盒及检测方法，本专利技术利用免疫学检测技术快速诊断病毒感染，且检测结果特异性高、敏感性强、肉眼易判断，适合于现场快速检测。为了解决上述技术问题，本专利技术公开了一种病毒感染的免疫学快速检测试剂盒，该试剂盒的组成如下：其中，水化溶液含10g/L牛血清白蛋白，100mL/L甘油，250mg/LTHYRESFUS-Anti-VMoAb结合物的PBS液。进一步地，THYRESFUS-Anti-VMoAb结合物通过以下方法制备得到：(1)用0.05mol/LPH9.5碳酸盐缓冲液将25％戊二醛稀释至5％；(2)取1mg/mL病毒单克隆抗体0.5mL，加0.5ml5％戊二醛，37℃水浴结合2h；(3)加入220.0g/LNaCl0.1ml充分混匀后，置4℃10min预冷；(4)加冷无水乙醇2.4ml，颠倒混合，立即1000r/min离心10min；(5)弃上清，沉淀用冷80％乙醇洗一次，将离心管倒置，控干；(6)加入0.05mol/LPH9.5碳酸盐缓冲液0.5ml溶解沉淀物；(7)将150μgTHYRESFUS溶于0.5ml0.15mol/LNaCl，再与醛化病毒单克隆抗体溶液混合；(8)加入1.0mol/LpH9.5新型生物感应显色物质，调节pH值至9.0-9.5；(9)于4℃，电磁搅拌下结合24h；(10)加入0.1ml0.2mol/L赖氨酸，以封闭残留的醛基，终止反应；(11)4℃放置2h；(12)将反应物通过SephadexG-200凝胶柱，用PBS洗脱，收集第一洗脱峰；或将反应物装入透析袋，对0.01mol/LpH7.2PBS，4℃透析过夜并收集；浓缩收集液即为THYRESFUS-Anti-VMoAb结合物，用PBS调节THYRESFUS-Anti-VMoAb至浓度250mg/L，并加入终浓度10g/L牛血清白蛋白，100mL/L甘油，得到水化溶液。进一步地，阳性病毒血清是经自制的病毒双抗夹心ELISA试剂盒检测为阳性的血清。进一步地，阴性病毒血清是经自制的病毒双抗夹心ELISA试剂盒检测为阴性的血清。进一步地，自制的病毒双抗夹心ELISA试剂盒的制备及检测方法如下：20μg/mL病毒单克隆抗体包被ELISA反应板，37℃保温2h，洗板3次，加含1％牛血清白蛋白的PBS封闭液37℃，3h，PBS洗2次；加入1∶100稀释的待检血清100μL，37℃保温30分，洗板3次；加入效价为1∶1000的病毒兔抗体100μL，37℃保温30分，洗板3次；加入效价为1∶1000的HRP标记羊抗兔抗体100μL，37℃保温30分，洗板3次；TMB-H2O2显色，目测和仪器判断结果。进一步地，病毒为麻疹病毒或巨细胞病毒。本专利技术还公开了一种病毒感染的免疫学快速检测方法，采用上述的病毒感染的免疫学快速检测试剂盒，包括以下步骤：1)反应：取一洁净的载玻片上，分别标记为阳性对照孔、测试孔和阴性对照孔，在每孔用移液枪加入12μL的水化溶液，往阳性对照孔中加入3μL阳性病毒血清，而往测试孔中加入3μL待测血清，阴性对照孔加3μL阴性病毒血清，迅速混匀；将载玻片放入一湿盒内，将湿盒放入37℃保温箱反应30分钟；2)结果判断：37℃反应30分钟后，立刻取出湿盒；以一张白纸或白色泡沫盒为背景，通过反应溶液颜色的变化，即判断检测结果；如果溶液为无色，则说明病毒感染阴性；如果为红色，则说明病毒感染阳性。与现有技术相比，本专利技术可以获得包括以下技术效果：本专利技术的一步法病毒检测试剂盒使用独特的抗原抗体结合显色方法，整个检测过程只需0.5小时，大大缩短了检测时间；检测只需使用3μL的血清；整个检测过程只需一个37℃恒温箱。当然，实施本专利技术的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有技术效果。附图说明此处所说明的附图用来提供对本专利技术的进一步理解，构成本专利技术的一部分，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。在附图中：图1是本专利技术实施例2中检测麻疹病毒不同材料的结果对照图；其中，1号孔为麻疹病毒组织培养感染细胞裂解液(1∶1000)，2号孔为麻疹病毒阳性人血清(经自制麻疹病毒双抗夹心ELISA试剂盒检测为阳性)，3号孔为麻疹病毒阴性血清(经自制麻疹病毒双抗夹心ELISA试剂盒检测为阴性)，4号孔为风疹病毒阳性人血清(经风疹病毒双抗夹心ELISA试剂盒检测为阳性)，5号孔单纯疱疹I型病毒阳性血清(经自制的单纯疱疹I型双抗夹心ELISA试剂盒检测为阳性)，6号孔为巨细胞病毒阳性人血清(经自制的巨细胞病毒双抗夹心ELISA试剂盒检测为阳性)，7号孔为正常人血清；图2是本专利技术实施例3中的检测巨细胞病毒不同材料的结果对照图；其中，1号孔为巨细胞病毒组织培养感染细胞裂解液(1∶1000)，2号孔为巨细胞病毒组织培养感染细胞裂解液(1∶8000)，3号孔为巨细胞病毒阴性血清(经自制的巨细胞病毒双抗夹心ELISA试剂盒检测为阴性)，4号孔为麻疹病毒阳性人血清(经自制的麻疹病毒双抗夹心ELISA试剂盒检测为阳性)，5号孔单纯疱疹II型病毒阳性血清(经自制的单纯疱疹II型双抗夹心ELISA试剂盒检测为阳性)，6号孔为乙肝病毒阳性人血清(经自制的乙肝病毒双抗夹心ELISA试剂盒检测为阳性)，7号孔为正常人血清，8号孔为巨细胞病毒阳性血清(经自制的巨细胞病毒双抗夹心ELISA试剂盒检测为阳性)。具体实施方式以下将配合实施例来详细说明本专利技术的实施方式，藉此对本专利技术如何应用技术手段来解决技术问题并达成技术功效的实现过程能充分理解并据以实施。本专利技术的思路为：首先利用戊二醛这个常用的同型双功能交联剂，将生物感应显色物质4-氨基-(4’-氯)-5苯基酞嗪(THYRESFUS)和病毒单克隆抗体的氨基以五碳桥连接起来，得到结合物THYRESFUS-Anti-VMoAb，此时结合物中的THYRESFUS不显现颜色，但当THYRESFUS-Anti-VMoAb与样品中相应的病毒结合形成复合物THYRESFUS-Anti-VMoAb-病毒后，由于生物感应作用THYRESFUS显现红色；如果样品中没有相应病本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种病毒感染的免疫学快速检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒的组成如下：其中，水化溶液含10g/L牛血清白蛋白，100mL/L甘油，250mg/L THYRESFUS‑Anti‑V MoAb结合物的PBS液。

【技术特征摘要】
1.一种病毒感染的免疫学快速检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒的组成如下：其中，水化溶液含10g/L牛血清白蛋白，100mL/L甘油，250mg/LTHYRESFUS-Anti-VMoAb结合物的PBS液。2.根据权利要求1所述的病毒感染的免疫学快速检测试剂盒，其特征在于，所述THYRESFUS-Anti-VMoAb结合物通过以下方法制备得到：(1)用0.05mol/LPH9.5碳酸盐缓冲液将25％戊二醛稀释至5％；(2)取1mg/mL病毒单克隆抗体0.5mL，加0.5ml5％戊二醛，37℃水浴结合2h；(3)加入220.0g/LNaCl0.1ml充分混匀后，置4℃10min预冷；(4)加冷无水乙醇2.4ml，颠倒混合，立即1000r/min离心10min；(5)弃上清，沉淀用冷80％乙醇洗一次，将离心管倒置，控干；(6)加入0.05mol/LPH9.5碳酸盐缓冲液0.5ml溶解沉淀物；(7)将150μgTHYRESFUS溶于0.5ml0.15mol/LNaCl，再与醛化病毒单克隆抗体溶液混合；(8)加入1.0mol/LpH9.5新型生物感应显色物质，调节pH值至9.0-9.5；(9)于4℃，电磁搅拌下结合24h；(10)加入0.1ml0.2mol/L赖氨酸，以封闭残留的醛基，终止反应；(11)4℃放置2h；(12)将反应物通过SephadexG-200凝胶柱，用PBS洗脱，收集第一洗脱峰；或将反应物装入透析袋，对0.01mol/LpH7.2PBS，4℃透析过夜并收集；浓缩收集液即为THYRESFUS-Anti-VMoAb结合物，用PBS调节THYRESFUS-Anti-VMoAb至浓度250mg/L，并加入终浓度10g/L牛血清白蛋白，100mL/L甘油，得到水化溶液...

【专利技术属性】
技术研发人员：严银芳，严文馨，刘军，高平，
申请(专利权)人：严银芳，
类型：发明
国别省市：湖北;42