一种快速检测钙卫蛋白的试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了一种试剂盒，包括如下组分：含多聚物的缓冲液；以及结合抗人钙卫蛋白抗体的聚苯乙烯胶乳溶液。采用该试剂盒检测钙卫蛋白时，具有以下优势：在使用时只需在两个时间点分别加入即可，操作非常方便快捷；灵敏度很高，保证能够检测到极低水平的钙卫蛋白；特异性强、重复性好且成本低；抗干扰能力强，即使检测样本中存在一定浓度的干扰物包括血红蛋白、胆红素、Vc、甘油三酯等，对本发明专利技术试剂盒的检测结果影响很小。本发明专利技术的试剂盒因具有以上优势，且能适应单人份、快速和即时出结果的定量检测，具有很高的临床应用价值。

Kit for rapid detection of calcium guard protein

The present invention provides a kit comprising the following components: a buffer containing a polymer; and a polystyrene latex solution that combines antibodies against human antibodies. The calprotectin of the kit, has the following advantages: when in use can only join respectively at two time points, the operation is very convenient; the sensitivity is very high, which can detect extremely low levels of calprotectin; strong specificity, good repeatability and strong anti-interference ability and low cost; and even though there is a certain concentration in the test sample disruptors including hemoglobin, bilirubin, Vc and TG. The results of detecting kit of the invention has little effect. Because of the above advantages, the kit has the advantages of being suitable for quantitative detection of single, rapid and immediate results, and has high clinical application value.

【技术实现步骤摘要】
一种快速检测钙卫蛋白的试剂盒
本专利技术涉及医学免疫体外诊断领域，特别涉及一种钙卫蛋白检测试剂盒。
技术介绍
钙卫蛋白是一个分子量为36kD的钙、锌结合蛋白。由两条分子量为14kD的重链和一条分子量为8kD的轻链以共价键连接的钙结合蛋白质异三聚体组成。每条链可结合两个Ca2+，从而具有耐热性和增强水解性的特性。钙卫蛋白主要来源于中性粒细胞和单核细胞，具有多种生物学功能，体外研究表明它具有抑菌性能，抑菌效果可与抗生素相提并论。钙卫蛋白是中性粒细胞和活化的巨噬细胞质中重要的蛋白质，在许多炎症情况下含量增加，可作为急性炎症性标志物。目前虽然钙卫蛋白在人类生物体中多处被发现，包括：血清、唾液、脑脊液和尿液。但在粪便中容易测得，且其成分稳定，室温下可在大便中稳定存在7d左右，且不易被细菌和各种酶类破坏，不受饮食的影响。粪便的钙卫蛋白的检测是一种简单、迅速的、灵敏度高、特异性强、廉价的、非侵袭的炎性肠病检测方法。这种检测方法可以在正常人的黏膜和患病患者的炎性黏膜中都可以获得准确的检测结果。钙卫蛋白被认为是多种疾病中可靠的炎症指标，它可以清楚的区分器质性疾病如炎症性疾病IBD和功能性疾病如IBS。这种体外诊断工具可以避免昂贵的费用和结肠镜侵入性的检查。2005年3月14-17日在伯明翰召开的英国肠胃病学学会(BSG)年会，专题讨论了炎症性肠病(IBD)-钙卫蛋白-肠激惹综合征(IBS)，将钙卫蛋白作为一个新的有用的诊断参考标志，用于：区别炎性肠病和肠激惹综合征；评估炎性肠病炎活动性；评价炎性肠病黏膜治愈情况。对于钙卫蛋白的检测，目前临床的方法包括：酶联免疫法(ELISA)、胶体金法等方法，但这些方法都有各自的特点及不足。ELISA法由于定量准确，广泛应用于医院检验科，但检测时间长，不便捷；胶体金法虽然方便、快捷，但其是一种定性方法，灵敏度较低；因此，临床上迫切需求建立一种快速、便捷、经济的钙卫蛋白定量检测方法。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种检测钙卫蛋白的试剂盒，采用该试剂盒检测钙卫蛋白时，操作方便快捷、特异性强、灵敏度高、重复性好、成本低、检测结果准确且抗干扰能力强，适于临床快速检测。为了解决上述技术问题，本专利技术通过如下技术方案实现:本专利技术第一方面提供了组合物，包括如下组分：含多聚物的缓冲液；以及结合抗人钙卫蛋白抗体的聚苯乙烯胶乳溶液。所述多聚物为Triton系列表面活性剂、Tween系列表面活性剂、月桂醚、聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯壬基苯基醚和聚氧乙烯辛基苯醚中的至少一种。所述聚苯乙烯胶乳的颗粒直径为100-300nm。在一优选例中，所述含多聚物的缓冲液中，多聚体的质量占其总体积百分比为0.1％-5.0％。在一优选例中，结合抗人钙卫蛋白抗体的聚苯乙烯胶乳溶液的固含量w/v为0.5-5.0％。在一优选例中，所述结合抗人钙卫蛋白抗体的聚苯乙烯胶乳溶液中的聚苯乙烯胶乳与抗人钙卫蛋白抗体的包被是采用化学交联法制备；在一优选例中，所述化学交联法采用的化学交联缓冲液选自2-(N-吗啡啉)乙磺酸MES缓冲液、3-吗啉-2-羟基丙磺酸MOPSO缓冲液、3-(N-吗啉)丙磺酸MOPS缓冲液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES缓冲液和磷酸缓冲液中的至少一种。在一优选例中，所述化学交联法采用的化学交联剂选自碳化亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺、N-羟基硫代琥珀酰亚胺、酰肼和异氰酸酯中的至少一种。在一优选例中，所述含多聚物的缓冲液包括如下组分：三羟甲基氨基甲烷、氯化钠、TritonX-100、牛血清蛋白、乙二醇聚氧乙烯醚和叠氮钠；或所述含多聚物的缓冲液包括如下组分：三羟甲基氨基甲烷、氯化钠、Tween-20、牛血清蛋白、乙二醇聚氧乙烯醚和叠氮钠；或所述含多聚物的缓冲液包括如下组分：磷酸盐、氯化钠、TritonX-100、牛血清蛋白、乙二醇聚氧乙烯醚和叠氮钠；所述结合抗人钙卫蛋白抗体的聚苯乙烯胶乳溶液包括如下组分：磷酸盐、抗人钙卫蛋白抗体包被胶乳颗粒、氯化钠、牛血清蛋白和叠氮钠。在一优选例中，所述含多聚物的缓冲液包括如下浓度的各组分：三羟甲基氨基甲烷或磷酸盐20-100mmol/L氯化钠7-10g/LTritonX-100或Tween-204-12g/L牛血清蛋白4-7g/L乙二醇聚氧乙烯醚40-60g/L叠氮钠3-6g/L。在一优选例中，所述含多聚物的缓冲液的pH值为6.5-7.5；在一优选例中，所述结合抗人钙卫蛋白抗体的聚苯乙烯胶乳溶液包括如下浓度的各组分：磷酸盐80-120mmol/L抗人钙卫蛋白抗体包被胶乳颗粒10-35％氯化钠7-10g/L牛血清蛋白4-7g/L叠氮钠4-6g/L。在一优选例中，所述结合抗人钙卫蛋白抗体的聚苯乙烯胶乳溶液的pH值为7-8。在一优选例中，所述含多聚物的缓冲液包括如下浓度的各组分：三羟甲基氨基甲烷25mmol/L氯化钠8.5g/LTritonX-1005g/L牛血清蛋白5g/L乙二醇聚氧乙烯醚50g/L叠氮钠4g/L。在一优选例中，所述含多聚物的缓冲液的pH值为7.0。在一优选例中，所述结合抗人钙卫蛋白抗体的聚苯乙烯胶乳溶液包括如下浓度的各组分：磷酸盐100mmol/L抗人钙卫蛋白抗体包被胶乳颗粒15％氯化钠8.5g/L牛血清蛋白5g/L叠氮钠5g/L；在一优选例中，所述结合抗人钙卫蛋白抗体的聚苯乙烯胶乳溶液的pH值为7.5。在一优选例中，还包括校准品。在一优选例中，所述校准品为钙卫蛋白校准品，所述钙卫蛋白校准品的浓度分别为10,30,100,300,600ug/g。在一优选例中，所述结合抗人钙卫蛋白抗体的聚苯乙烯胶乳溶液采用以下方法制备而成：取聚苯乙烯胶乳加入MES缓冲液中，同时加入EDC和NHS，待溶解混合均匀后，活化胶乳，当胶乳活化完成后，将胶乳均分为两份，其中一份胶乳加入抗人钙卫蛋白单克隆抗体A，另一份胶乳加入抗人钙卫蛋白单克隆抗体B，并将两者均进行交联，交联完成后均进行离心，弃去上清液，分别将两者的沉淀溶于MES缓冲液中，得到两者的钙卫蛋白单克隆抗体标记液，然后将两者的钙卫蛋白单克隆抗体标记液进行混合，即制得结合抗人钙卫蛋白抗体的聚苯乙烯胶乳溶液。在一优选例中，所述两者的钙卫蛋白单克隆抗体标记液是按1：1的体积比进行混合。本专利技术第二方面提供了所述的组合物在制备检测钙卫蛋白的产品中的应用。在一优选例中，所述产品为试剂盒。本专利技术是采用聚苯乙烯胶乳包被的抗钙卫蛋白的抗体，与待测样本例如粪便等中的钙卫蛋白发生结合反应，在均相体系中形成免疫复合物，当透射光透过反应体系时发生光强度变化，根据测量钙卫蛋白校准品的光强度绘制校准曲线，测量待测样本中的光强度变化，依据校准曲线分析计算出检测样本中钙卫蛋白的浓度。本专利技术的关键有如下两个方面：首先是选择合适的聚苯乙烯胶乳，其大小(直径)要稍小于波长，聚苯乙烯胶乳的颗粒直径为100-300nm，更优选的，聚苯乙烯胶乳的颗粒直径为150-250nm；其次是采用合适的方法将聚苯乙烯胶乳包被目的抗体，常用的包被方法有物理吸附法和化学交联法，本专利技术两种方法均可采用，但更优选的选择化学交联法。本专利技术涉及的“TritonX-100”为聚乙二醇辛基苯基醚。本专利技术涉及的“叠氮钠”为叠氮化钠。本专利技术涉及的“磷酸氢二钠十二水合物”又称“十二水合磷酸氢二钠”，CAS号为10本文档来自技高网...

【技术保护点】
组合物，其特征在于：包括如下组分：含多聚物的缓冲液；以及结合抗人钙卫蛋白抗体的聚苯乙烯胶乳溶液；所述多聚物为Triton系列表面活性剂、Tween系列表面活性剂、月桂醚、聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯壬基苯基醚和聚氧乙烯辛基苯醚中的至少一种；所述聚苯乙烯胶乳的颗粒直径为100‑300nm。

【技术特征摘要】
1.组合物，其特征在于：包括如下组分：含多聚物的缓冲液；以及结合抗人钙卫蛋白抗体的聚苯乙烯胶乳溶液；所述多聚物为Triton系列表面活性剂、Tween系列表面活性剂、月桂醚、聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯壬基苯基醚和聚氧乙烯辛基苯醚中的至少一种；所述聚苯乙烯胶乳的颗粒直径为100-300nm。2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于：所述含多聚物的缓冲液中，多聚体的质量占其总体积百分比为0.1％-5.0％；任选的，结合抗人钙卫蛋白抗体的聚苯乙烯胶乳溶液的固含量w/v为0.5-5.0％。3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于：所述结合抗人钙卫蛋白抗体的聚苯乙烯胶乳溶液中的聚苯乙烯胶乳与抗人钙卫蛋白抗体的包被是采用化学交联法制备；任选的，所述化学交联法采用的化学交联缓冲液选自2-(N-吗啡啉)乙磺酸MES缓冲液、3-吗啉-2-羟基丙磺酸MOPSO缓冲液、3-(N-吗啉)丙磺酸MOPS缓冲液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES缓冲液和磷酸缓冲液中的至少一种；任选的，所述化学交联法采用的化学交联剂选自碳化亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺、N-羟基硫代琥珀酰亚胺、酰肼和异氰酸酯中的至少一种。4.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于：所述含多聚物的缓冲液包括如下组分：三羟甲基氨基甲烷、氯化钠、TritonX-100、牛血清蛋白、乙二醇聚氧乙烯醚和叠氮钠；或所述含多聚物的缓冲液包括如下组分：三羟甲基氨基甲烷、氯化钠、Tween-20、牛血清蛋白、乙二醇聚氧乙烯醚和叠氮钠；或所述含多聚物的缓冲液包括如下组分：磷酸盐、氯化钠、TritonX-100、牛血清蛋白、乙二醇聚氧乙烯醚和叠氮钠；所述结合抗人钙卫蛋白抗体的聚苯乙烯胶乳溶液包括如下组分：磷酸盐、抗人钙卫蛋白抗体包被胶乳颗粒、氯化钠、牛血清蛋白和叠氮钠。5.根据权利要求4所述的组合物，其特征在于：所述含多聚物的缓冲液包括如下浓度的各组分：三羟甲基氨基甲烷或磷酸盐20-100mmol/L氯化钠7-10g/LTritonX-100或Tween-204-12g/L牛血清蛋白4-7g/L乙二醇聚氧乙烯醚40-60g...

【专利技术属性】
技术研发人员：李印军，杨永崧，吕典，
申请(专利权)人：深圳市汇松科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44