一种测定全量程‑C反应蛋白的试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种测定全量程‑C反应蛋白的试剂盒及其制备方法，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分：试剂R1：缓冲液、无机盐离子、加速剂，试剂R2：缓冲液、稳定剂、防腐剂、表面活性剂、助悬剂、胶乳包被抗C反应蛋白抗体，制备方法为：按照组分含量配制好试剂；将待测样本与试剂R1和试剂R2混合，使其充分反应；用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度差值；根据吸光度变化值计算出样本中的全量程‑C反应蛋白的试剂盒的浓度。本发明专利技术具有测定准确度高等优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医学及生物化学
，具体来说是一种测定全量程-C反应蛋白的试剂盒及其制备方法。
技术介绍
C反应蛋白(CRP)是指在机体受到感染或组织损伤时血浆中一些急剧上升的蛋白质，因其可以结合肺炎球菌细胞壁C-多糖的蛋白质，故命名为C-反应蛋白,C反应蛋白(CRP)可以激活补体和加强吞噬细胞的吞噬而起调理作用，从而清除入侵机体的病原微生物和损伤，坏死，凋亡的组织细胞，在机体的天然免疫过程中发挥重要的保护作用,C反应蛋白(CRP)由肝细胞所合成，具有激活补体和促进粒细胞及巨噬细胞的吞噬作用,C反应蛋白(CRP)是第一个被认为是急性时相反应蛋白，正常情况下含量极微量，在急性床上和感染时其血浓度急剧升高,是临床上最常用的急性时相反应指标。C反应蛋白(CRP)可用于细菌和病毒感染的鉴别诊断，C反应蛋白(CRP)升高与感染的程度正相关，当病毒感染时，C反应蛋白(CRP)在绝大多数病毒感染中的血清浓度变化不大或基本保持不变。CRP在急性局部缺血和心肌梗塞时升高。C反应蛋白因检测方法灵敏度的不同，可分为普通CRP、超敏CRP和全量程CRP。全量程CRP的检测和范围均较为宽广。目前，检测全量程C反应蛋白(CRP)主要有酶联免疫吸附法、放射免疫法、化学发光、胶乳增强免疫比浊法等。酶联免疫吸附法操作复杂、耗时长、对操作人员有较高的专业技术要求,且无法完成定量检测，检测准确度也不高，放射免疫法有放射性元素，会对环境产生污染，化学发光成本较高。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是为了克服现有技术操作复杂、具有环境污染以及测定准确度低的缺陷，而提供一种测定全量程-C反应蛋白的试剂盒及其制备方法。本专利技术解决上述技术问题提供的技术方案是：本专利技术公开了一种测定全量程-C反应蛋白的试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：试剂R1：缓冲液 20~180 mmol/L无机盐离子 150~400 mmol/L加速剂 10~70 g/L其溶剂为纯化水试剂R2：缓冲液 20~180 mmol/L稳定剂 8~42 g/L防腐剂 0.2~0.8 g/L表面活性剂 1.0~3.0 mL/L助悬剂 10~90 mmol/L胶乳包被抗C反应蛋白抗体 1~8 g/L其溶剂为纯化水。作为优选，本专利技术公开了一种测定全量程-C反应蛋白的试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：试剂R1：缓冲液 100 mmol/L无机盐离子 220 mmol/L加速剂 40g/L其溶剂为纯化水试剂R2：缓冲液 100 mmol/L稳定剂 25 g/L防腐剂 0.5 g/L表面活性剂 2.0 mL/L助悬剂 50 mmol/L胶乳包被抗C反应蛋白抗体 4 g/L其溶剂为纯化水。作为优选，所述的试剂R1中，所述的缓冲液采用Tris缓冲液、MES缓冲液、磷酸盐缓冲液、MOPSO缓冲液中的一种或多种的组合，所述的无机盐离子采用氯化钾、硫酸钾、氯化钠中的一种或多种的组合，所述的加速剂采用聚乙二醇-2000、聚乙二醇-8000、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或多种组合。作为优选，所述的试剂R2中，所述的缓冲液采用Tris缓冲液、MES缓冲液、磷酸盐缓冲液、MOPSO缓冲液中的一种或多种的组合，所述的稳定剂采用牛血清白蛋白，所述的防腐剂采用山梨酸钠、苯甲酸钠、叠氮钠、硫柳汞、苯酚中的一种或多种的组合，所述的表面活性剂为曲拉通-100，所述的助悬剂为甘油。作为优选，所述的胶乳包被抗C反应蛋白抗体的制备方法为：用50 mmol/L的MES缓冲液将粒径为80-500nm的聚苯乙烯微球稀释成为所含的聚苯乙烯微球的质量浓度为1%-5%的溶液，然后每毫升溶液中加入1.0 mg 的1-乙基-3-（3-二甲基胺丙基）碳化二亚胺盐酸盐，在20-37℃的条件下反应1小时，反应完成后加入2，2’-硫代双镍，使用离心机，在25000 rpm/min的转速下离心30分钟，去上清，将沉淀用50 mmol/L的MES缓冲液进行稀释，再使用离心机，在25000 rpm/min的转速下离心30分钟，去上清，再将沉淀用50 mmol/L的MES缓冲液进行稀释，直至溶液中聚苯乙烯微球的质量浓度为0.1%-2%，然后边搅拌边加入抗C反应蛋白抗体，直至溶液中聚苯乙烯微球的质量浓度为0.5%-1.5%时为止，最后加入牛血清白蛋白，直至牛血清白蛋白的浓度为15g/L为止，在4℃的条件下封闭16-24小时，即制备得到胶乳包被抗C反应蛋白抗体。作为优选，本专利技术还公开了上述测定全量程-C反应蛋白的试剂盒的制备方法和使用方法，包括以下步骤：（a）按照下列组分含量配制好试剂：试剂R1：缓冲液 20~180 mmol/L无机盐离子 150~400 mmol/L加速剂 10~70 g/L其溶剂为纯化水试剂R2：缓冲液 20~180 mmol/L稳定剂 8~42 g/L防腐剂 0.2~0.8 g/L表面活性剂 1.0~3.0 mL/L助悬剂 10~90 mmol/L胶乳包被抗C反应蛋白抗体 1~8 g/L其溶剂为纯化水；（b）将待测样本与试剂R1和试剂R2混合，使其充分反应；（c）用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度差值；（d）根据吸光度变化值计算出样本中的全量程-C反应蛋白的试剂盒的浓度。作为优选，步骤（b）中，所述的试剂R1和试剂R2的体积比为2：1。作为优选，步骤（b）中，所述的待测样本与试剂R1和试剂R2的总体积的体积比在1：10到1：150之间。本专利技术的检测原理是：本专利技术主要的是利用抗原抗体反应的原理，样品中C-反应蛋白与试剂中的抗C反应蛋白抗体结合形成抗原-抗体复合本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种测定全量程‑C反应蛋白的试剂盒，其特征在于：包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：试剂R1：缓冲液                           20~180 mmol/L无机盐离子                       150~400 mmol/L加速剂                           10~70 g/L其溶剂为纯化水试剂R2：缓冲液                           20~180 mmol/L稳定剂                           8~42 g/L防腐剂                           0.2~0.8 g/L表面活性剂                       1.0~3.0 mL/L助悬剂                           10~90 mmol/L胶乳包被抗C反应蛋白抗体          1~8 g/L其溶剂为纯化水。

【技术特征摘要】
1.一种测定全量程-C反应蛋白的试剂盒，其特征在于：包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：试剂R1：缓冲液 20~180 mmol/L无机盐离子 150~400 mmol/L加速剂 10~70 g/L其溶剂为纯化水试剂R2：缓冲液 20~180 mmol/L稳定剂 8~42 g/L防腐剂 0.2~0.8 g/L表面活性剂 1.0~3.0 mL/L助悬剂 10~90 mmol/L胶乳包被抗C反应蛋白抗体 1~8 g/L其溶剂为纯化水。2.根据权利要求1所述的一种测定全量程-C反应蛋白的试剂盒，其特征在于：包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：试剂R1：缓冲液 100 mmol/L无机盐离子 220 mmol/L加速剂 40g/L其溶剂为纯化水试剂R2：缓冲液 100 mmol/L稳定剂 25 g/L防腐剂 0.5 g/L表面活性剂 2.0 mL/L助悬剂 50 mmol/L胶乳包被抗C反应蛋白抗体 4 g/L其溶剂为纯化水。3.根据权利要求1或2所述的一种测定全量程-C反应蛋白的试剂盒，其特征在于：所述的试剂R1中，所述的缓冲液采用Tris缓冲液、MES缓冲液、磷酸盐缓冲液、MOPSO缓冲液中的一种或多种的组合，所述的无机盐离子采用氯化钾、硫酸钾、氯化钠中的一种或多种的组合，所述的加速剂采用聚乙二醇-2000、聚乙二醇-8000、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或多种组合。4.根据权利要求1或2所述的一种测定全量程-C反应蛋白的试剂盒，其特征在于：所述的试剂R2中，所述的缓冲液采用Tris缓冲液、MES缓冲液、磷酸盐缓冲液、MOPSO缓冲液中的一种或多种的组合，所述的稳定剂采用牛血清白蛋白，所述的防腐剂采用山梨酸钠、苯甲酸钠、叠氮钠、硫柳汞、苯酚中的一种或多种的组合，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡晓辉，庄庆华，吴铮，徐运，
申请(专利权)人：安徽伊普诺康生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34