一种测定前白蛋白的试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种测定前白蛋白的试剂盒及其制备方法，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分组成试剂盒，包括的成分及相应含量为：试剂R1：Tris缓冲液50~150 mmol/L、氯化钠、EDTA、聚乙二醇‑8000、曲拉通X‑100、叠氮钠，试剂R2：Tris缓冲液、氯化钠、甘油、曲拉通X‑100、叠氮钠、抗前白蛋白抗体，制备方法为：按照组分含量配制好试剂；将待测样本与试剂R1和试剂R2混合，使其充分反应；用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度差值；根据吸光度变化值计算出样本中的前白蛋白的浓度。本发明专利技术具有准确度高、无污染等优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医学及生物化学
，具体来说是一种测定前白蛋白的试剂盒及其制备方法。
技术介绍
前白蛋白（Prealbumin, PA），又称转甲状腺素蛋白（transthyretin），分子量5.4万，由肝细胞合成，在电泳分离时，常显示在白蛋白的前方，其半衰期很短，仅约1.9天。因此，测定其在血浆中的浓度对于了解蛋白质的营养不良、肝功能不全、比白蛋白和转铁蛋白具有更高的敏感性。PA除了作为组织修补的材料外，还可视为一种运载蛋白，它结合T4与T3，而对T3亲和力更大，PA与视黄醇结合蛋白形成复合物，具有运载维生素A的作用。前白蛋白分子量小，半衰期短，升高和降低更为明显，可作为早期肝功能损伤的指标，比白蛋白具有更高敏感性。前白蛋白的检测同时可用于判断患者的营养状况，例如肿瘤术前和术后的，亦或者当下营养供应的情况。 前白蛋白可作为实体瘤患者化疗后肝功能损害的预见性指标。除了作为一种灵敏的营养蛋白质指标，前白蛋白（Prealbumin, PA）在急性炎症、恶性肿瘤、肝硬化或肾炎时其血浓度下降。肝脏疾病时前白蛋白更敏感，有人认为有30%白蛋白正常的肝病患者的前白蛋白减少，坏死后肝硬化几乎是零。肝硬化肝细胞坏死较轻，前白蛋白变化不大，预后较好，当病情改善时，前白蛋白亦迅速升高。亚急性肝坏死前白蛋白一直在低值，故前白蛋白可用作判断肝病预后指标。肝癌以及阻塞性黄疸患者均可降低，其降低程度与病情有密切关系。肾病综合征前白蛋白不仅不减少，而且在饮食充分时还可以升高。营养不良负氮平衡时前白蛋白减少。目前检测前白蛋白的方法有免疫扩散法、免疫电泳法、放射免疫法等，但其操作均较为复杂，耗时长，对操作人员有一定专业技能要求，且有的方法还需要较昂贵的仪器，成本均较高，而且存在准确度低的缺陷，另外由于放射免疫法存在放射性元素，因此存在放射性污染。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是为了克服现有技术存在放射性污染、准确度低的缺陷，而提供一种测定前白蛋白的试剂盒及其制备方法。本专利技术解决上述技术问题提供的技术方案是：本专利技术公开了一种测定前白蛋白的试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分组成试剂盒，包括的成分及相应含量为：试剂R1：Tris缓冲液 50~150 mmol/L氯化钠 50~300 mmol/LEDTA 25~55 mmol/L聚乙二醇-8000 10~44 g/L曲拉通X-100 0.5~2.5 mL/L叠氮钠 0.3~1.1 g/L其溶剂为纯化水试剂R2：Tris缓冲液 30~90 mmol/L氯化钠 50~110 mmol/L甘油 20~60 mmol/L曲拉通X-100 0.5~2.5 mL/L叠氮钠 0.3~1.1 g/L抗前白蛋白抗体 0.5~2.5 g/L其溶剂为纯化水。作为优选，本专利技术公开了一种测定前白蛋白的试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分组成试剂盒，包括的成分及相应含量为：试剂R1：Tris缓冲液 100 mmol/L氯化钠 170mmol/LEDTA 40 mmol/L聚乙二醇-8000 25 g/L曲拉通X-100 1.5 mL/L叠氮钠 0.7 g/L其溶剂为纯化水试剂R2：Tris缓冲液 60 mmol/L氯化钠 80 mmol/L甘油 40 mmol/L曲拉通X-100 1.5 mL/L叠氮钠 0.7 g/L抗前白蛋白抗体 1.5 g/L其溶剂为纯化水。作为优选，本专利技术还公开了上述测定前白蛋白的试剂盒的制备方法和使用方法，包括以下步骤：（a）按照下列组分含量配制好试剂：试剂R1：Tris缓冲液 50~150 mmol/L氯化钠 50~300 mmol/LEDTA 25~55 mmol/L聚乙二醇-8000 10~44 g/L曲拉通X-100 0.5~2.5 mL/L叠氮钠 0.3~1.1 g/L其溶剂为纯化水试剂R2：Tris缓冲液 30~90 mmol/L氯化钠 50~110 mmol/L甘油 20~60 mmol/L曲拉通X-100 0.5~2.5 mL/L叠氮钠 0.3~1.1 g/L抗前白蛋白抗体 0.5~2.5 g/L其溶剂为纯化水；（b）将待测样本与试剂R1和试剂R2混合，使其充分反应；（c）用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度差值；（d）根据吸光度变化值计算出样本中的前白蛋白的浓度。作为优选，步骤（b）中，所述的试剂R1与试剂R2的体积比为3:1。作为优选，步骤（b）中，所述的待测样本与试剂R1和试剂R2的总体积的体积比在1:5到1:80之间。本专利技术的检测原理是：样品中前白蛋白（PA）可与试剂中相应的特异性抗前白蛋白抗体结合形成抗原-抗体复合物，产生一定浊度，该浊度高低在一定抗体存在时与抗原的含量成正比。在340nm波长下测定浊度并通过多点定标曲线可进行前白蛋白的定量测定。样本中前白蛋白（PA）的活性（mg/L）= CS ×（mg/L）式中：ΔAU以空白管吸光度作对照的样品管吸光度值ΔAB以空白管吸光度作对照的校准管吸光度值CS校准液中PA的浓度。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益优点：本专利技术通过添加适当浓度的PEG-8000作为反应的加速促凝剂，以及表面活性剂曲拉通X-100，加快了反应的速度，同时表面活性剂使得溶解度增加，以至于较小的抗原抗体反应都可以在加速促凝剂的作用下，快速发生反应，大大提高了准确度，EDTA的添加螯合了部分样品中金属离子的干扰，使得检测结果也更为准确。具体实施方式以下结合具体实施例进一步说明，但本专利技术并不仅限于这些实施例。实施例1本专利技术的试剂盒包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，其中：试剂R1：Tris缓冲液 100 mmol/L氯化钠 170mmol/LEDTA 40 mmol/L聚乙二醇-8000 25 g/L曲拉通X-100 1.5 mL/L叠氮钠 0.7 g/L其溶剂为纯化水试剂R2：Tris缓冲液 60 mmol/L氯化钠 80 mmol/L甘油 40 mmol/本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种测定前白蛋白的试剂盒，其特征在于：包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分组成试剂盒，包括的成分及相应含量为：试剂R1：Tris缓冲液           50~150 mmol/L氯化钠               50~300 mmol/LEDTA                 25~55 mmol/L聚乙二醇‑8000        10~44 g/L曲拉通X‑100          0.5~2.5 mL/L叠氮钠               0.3~1.1 g/L其溶剂为纯化水试剂R2：Tris缓冲液           30~90 mmol/L氯化钠               50~110 mmol/L甘油                 20~60 mmol/L曲拉通X‑100          0.5~2.5 mL/L叠氮钠               0.3~1.1 g/L抗前白蛋白抗体       0.5~2.5 g/L其溶剂为纯化水。

【技术特征摘要】
1.一种测定前白蛋白的试剂盒，其特征在于：包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分组成试剂盒，包括的成分及相应含量为：试剂R1：Tris缓冲液 50~150 mmol/L氯化钠 50~300 mmol/LEDTA 25~55 mmol/L聚乙二醇-8000 10~44 g/L曲拉通X-100 0.5~2.5 mL/L叠氮钠 0.3~1.1 g/L其溶剂为纯化水试剂R2：Tris缓冲液 30~90 mmol/L氯化钠 50~110 mmol/L甘油 20~60 mmol/L曲拉通X-100 0.5~2.5 mL/L叠氮钠 0.3~1.1 g/L抗前白蛋白抗体 0.5~2.5 g/L其溶剂为纯化水。2.根据权利要求1所述的一种测定前白蛋白的试剂盒，其特征在于：包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分组成试剂盒，包括的成分及相应含量为：试剂R1：Tris缓冲液 100 mmol/L氯化钠 170mmol/LEDTA 40 mmol/L聚乙二醇-8000 25 g/L曲拉通X-100 1.5 mL/L叠氮钠 0.7 g/L其溶剂为纯化水试剂R2：Tris缓冲液 60 mmol/L氯化钠 80 mmol/L甘油 40...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡晓辉，庄庆华，吴铮，徐运，
申请(专利权)人：安徽伊普诺康生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34