Method and kit for measuring circulating enzyme of the invention relates to the use of beta hydroxybutyric acid, beta hydroxybutyrate dehydrogenase and NAD + - specific oxidation of beta hydroxybutyrate, generating acetoacetate and thio nadh. Acetoacetate in the presence of beta hydroxybutyrate dehydrogenase and NADH, produce beta hydroxybutyric acid and oxidized coenzyme. The reaction cycle, resulting in a large number of thio NADH, generated by measuring the absorbance of thio also reduced coenzyme rising rate at the wavelength of 405nm, can calculate beta hydroxybutyric acid content, the amplification method for trace beta hydroxybutyric acid, has the advantages of high sensitivity, good stability, low cost etc.. The kit comprises a coenzyme, beta hydroxybutyrate dehydrogenase, NAD + thio, buffer, surfactant and stabilizer. The invention can determine beta hydroxybutyric acid content by biochemical analyzer.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医学检验测定
,具体涉及一种β-羟丁酸的循环酶测定方法及其测定试剂盒。
技术介绍
酮体是甘油三酯的代谢产物。当体内的葡萄糖绝对或相对不足时,就会大量分解体内的甘油三酯生成甘油和脂肪酸,脂肪酸在肝脏氧化生成能量和和酮体,该酮体包括2%的丙酮、23%的乙酰乙酸和75%的β-羟丁酸,若体内酮体含量过高就会引起酮症酸中毒。酮中毒是一种危险生命的疾病。及时、准确地检测酮体水平是预知酮症酸中毒的很需要手段。酮体也是检测和控制糖尿病的重要标志物。酮体和血糖一样,是检测代谢控制的一项重要的标记物。I型糖尿病病人的最重要的特征之一就是易发展成为酮症酸中毒,这是由于胰岛素相对或绝对缺乏,葡萄糖的利用障碍,机体就过度消耗脂肪,产生大量的酮体,造成酮症酸中毒,是一种威胁生命的疾病。Ⅱ型糖尿病的后期,因胰岛素治疗无效,而过度消耗体内的甘油三酯,产生大量的酮体,形成酮症酸中毒。另外,糖尿病的孕妇更易发生酮症酸中毒,是因为胎儿生长发育非常快,需要大量的营养和能量,母体的高酮血症容易发生死胎,或影响胎儿神经系统的发育。因此及时准确地检测酮体水平是十分关键的,是预知酮症酸中毒的重要手段。上个世纪,我国在临床上普遍使用的是以硝普钠盐为基础的定性或半定量检测方法。此方法只能检测丙酮和乙酰乙酸,但是这两者含量都很低,约占总酮体的话30%以下,最大的问题是两者都不稳定,容易挥发和分解,因此,就造成了灵敏度低,重复性和特异性差, ...
【技术保护点】
一种β‑羟丁酸的测定方法,其特征在于:样本中的β‑羟丁酸被β‑羟丁酸脱氢酶和硫代氧化型辅酶Ⅰ(Thio‑NAD+)特异性氧化,生成乙酰乙酸和硫代还原型辅酶Ⅰ(Thio‑NADH);乙酰乙酸在β‑羟丁酸脱氢酶及还原型辅酶Ⅰ(NADH)存在下,又生成β‑羟丁酸和氧化型辅酶Ⅰ(NAD+),反应循环进行,产生大量的硫代还原型辅酶Ⅰ(Thio‑NADH),通过405nm波长下测定生成的Thio‑NADH的吸光度变化来定量样本中的β‑羟丁酸含量,其反应方程式如下:该方法对样本中微量的β‑羟丁酸起放大作用,β‑羟丁酸的计算公式如下:。
【技术特征摘要】
1.一种β-羟丁酸的测定方法,其特征在于:样本中的β-羟丁酸被β-羟丁酸脱氢酶和硫
代氧化型辅酶Ⅰ(Thio-NAD+)特异性氧化,生成乙酰乙酸和硫代还原型辅酶Ⅰ(Thio-NADH);
乙酰乙酸在β-羟丁酸脱氢酶及还原型辅酶Ⅰ(NADH)存在下,又生成β-羟丁酸和氧化型辅酶Ⅰ
(NAD+),反应循环进行,产生大量的硫代还原型辅酶Ⅰ(Thio-NADH),通过405nm波长下测定
生成的Thio-NADH的吸光度变化来定量样本中的β-羟丁酸含量,其反应方程式如下:
该方法对样本中微量的β-羟丁酸起放大作用,β-羟丁酸的计算公式如下:
。
2.一种β-羟丁酸测定试剂盒,其特征在于:该试剂盒由以下组分构成:
β-羟丁酸脱氢酶1-100KU/L
缓冲液5-500mmol/L
表面活性剂0.005-5%
稳定剂...
【专利技术属性】
技术研发人员:孟广宇,吉爽爽,李丰盛,
申请(专利权)人:江苏迈源生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:江苏;32
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