本发明专利技术涉及一种直接测定甘油三酯Sn‑2位棕榈酸含量的方法，采用GC‑MS法进行检测，样品前处理包括利用盐酸‑甲醇溶液对脂肪酸及分离的Sn‑2位单甘脂进行甲酯化反应，利用C16:0甲酯峰面积相对含量比值计算出Sn‑2位棕榈酸的绝对含量。本发明专利技术方法前处理操作简单，对样本含水量没有要求，缩短了前处理时间，提高了样品回收率。可直接测定Sn‑2位棕榈酸含量，计算方法简单。可以应用到豆粉、奶粉、牛奶、母乳，奶油，酸奶及其他乳制品中。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于化学分析
，具体涉及一种直接测定甘油三酯Sn-2位棕榈酸含量的方法。
技术介绍
脂肪在婴儿成长发育中起重要作用，母乳和婴儿配方奶粉中脂肪的含量虽然只占总重量的3-4％，但却为正值成长发育阶段的婴儿提供50-60％的能量，同时对于多种维他命和矿物质的吸收有着关键性的作用。棕榈酸(饱和脂肪酸-C16:0)是母乳中大量存在的饱和脂肪酸的其中一种。食物当中的脂肪是由脂肪酸构成，并以三种形式存在于自然界中：饱和脂肪酸，单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸。母乳和婴儿配方奶粉中的饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸是连在三叉形的甘油基上。每个甘油基都可连接三个脂肪酸，称作Sn-1位,Sn-2位和Sn-3位，也叫做alpha,beta和gamma位。所有形式的脂肪必须经由小肠消化吸收后方能释放其能量，棕榈酸在不同位置的结构会对脂肪的摄取、消化、吸收等新陈代谢方面起到至关重要的作用。在肠道中，Sn-1位和Sn-3位的脂肪酸在消化酶的分解作用下从三酸甘油酯中释放出来而形成游离脂肪酸，并与仍然连结在甘油基Sn-2位上的脂肪酸一起被肠道吸收，再转化成婴儿所需要的能量与营养。为了达到理想的健康，婴儿的食物当中同时需要饱和脂肪酸及不饱和脂肪酸，而母乳中这两种脂肪酸的组合比例处于完美的状态。而在牛乳中以及绝大多数在市场上销售的婴儿配方奶粉中的棕榈酸，都是处于Sn-1和Sn-3位上。像棕榈酸这样的饱和脂肪酸大量流失。这会导致两个问题。第一，对于正值生长及发育阶段的婴儿来说，大量流失饱和脂肪酸即流失了大量宝贵的能量来源，会对婴儿的生长及发育产生严重的负面影响。第二，同样重要，游离饱和脂肪酸会和食物中的钙质结合而形成钙皂，使钙质不能进入血液中，无助于骨骼的正常生长及发育。同时，由于肠道中大量钙质的流失会提高粪便的硬度，从而导致婴儿便秘和腹痛。由此可见，脂肪酸的结构位置对于能量和矿物质的吸收起到了关键作用。母乳中高达70％的棕榈酸连在分子主链中间的Sn-2位上，而不饱和脂肪酸主要连在Sn-1和Sn-3位上。经过消化后，这些不饱和脂肪酸很容易被肠道吸收而进入到血液中。同样地，对于仍然连甘油基Sn-2位上的棕榈酸也很容易被肠道所吸收。多年来，人们一直致力研究婴儿配方奶粉的成分，使其尽可能接近母乳，并在很多方面取得了成功。然而发展是无止境的。对于婴儿配方奶粉中脂肪组合的更深层研究，大大推动了新一代婴儿配方奶粉的发展，而新的研究成果可使婴儿配方奶粉中脂肪结构更接近天然母乳。Sn-2棕榈酸(Sn-2Palmitate)是一种创新而且与母乳脂肪结构最接近的母乳脂肪代替品。多项研究表明，Sn-2棕榈酸能为婴儿提供多种独特的营养及健康好处。经过婴儿营养科学研究证明，Sn-2棕榈酸是一种具有独特脂肪结构的结构脂技术，且被公认为婴儿配方奶粉脂肪类产品发展的一款具突破性的产品，亦是最接近母乳脂肪结构的母乳脂肪代替品。2008年中华人民共和国卫生部第13号公告批准了OPO(1,3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯)作为营养强化剂可用于婴儿配方奶粉的生产，并于2010年中华人民共和国卫生部第1号公告中明确了OPO扩大使用范围及使用量。OPO被作为一种显著有效的营养功能成分正在被广泛的添加到婴幼儿配方乳粉中，国际大型婴幼儿配方乳粉生产企业争相把“添加OPO”作为宣传亮点，大量已经添加“OPO”的婴幼儿配方乳粉正在市场上流通。而OPO中有效成分Sn-2位棕榈酸的检测方法尚未明确。因此，亟待建立婴幼儿配方乳粉中Sn-2位棕榈酸的定量检测方法。目前Sn-2位棕榈酸检测方法：国标《GB/T 24894-2010动植物油脂甘三酯分子2-位脂肪酸组分的测定》，由于前处理过程中涉及步骤复杂，操作繁琐，回收率低；中国专利公开号CN104237475A公开了一种间接测定1,3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯含量的方法，其从理论计算过程复杂；文献“气相色谱法测定婴幼儿配方乳粉中1,3-二油酸2-棕榈酸甘油三酯(马小宁等，检验检疫学刊)”公开的方法需要比较特殊的仪器和复杂的前处理过程。
技术实现思路
为克服现有技术不足，本专利技术提供一种直接测定甘油三酯Sn-2位棕榈酸含量的方法，旨在为保障婴幼儿乳品安全和质量提供技术支持本专利技术技术方案如下：一种直接测定甘油三酯Sn-2位棕榈酸含量的方法，采用GC-MS法进行检测，其样品前处理包括利用盐酸-甲醇溶液对试样进行甲酯化反应。上述直接测定甘油三酯Sn-2位棕榈酸含量的方法，所述试样包括待测样品、待测样品水解后的脂肪溶液、待测样品中分离的Sn-2位单甘油酯。优选地，所述盐酸-甲醇溶液中盐酸浓度为0.5-3mol/L，进一步优选为0.5mol/L。上述直接测定甘油三酯Sn-2位棕榈酸含量的方法，包括采用GC-MS(气相色谱-质谱)法进行检测；优选地，色谱条件如下：GC：进样器：Thermo Scientific TriPlus RSH自动进样器；色谱柱：HP-88气相色谱柱(100m×0.250mm,0.20μm)；进样口温度：200℃；恒流速模式：1mL/min；进样量：1μL；分流比：10:1；载气：N2；柱温箱升温程序如下表：表柱温箱升温程序MS：电子轰击离子源：EI；scan模式；离子源温度：280℃；传输线温度：240℃；四级杆质量扫描范围：35-400amu；溶剂延迟10min；本专利技术方法计算Sn-2位棕榈酸占总棕榈酸百分含量采用面积归一法进行定量。优选地，本专利技术采用氨基固相萃取柱分离Sn-2位单甘油酯；不仅操作简便，而且准确度更高。具体地，上述直接测定甘油三酯Sn-2位棕榈酸含量的方法，包括以下步骤：1)从待测样品中提取脂肪，用猪胰酯酶水解，将水解后的脂肪溶液过氨基固相萃取柱分离得Sn-2位单甘油酯；2)用上述盐酸-甲醇溶液分别对上述水解后的脂肪溶液和Sn-2位单甘油酯进行甲酯化反应，然后进行GC-MS检测；根据峰面积获得Sn-2位棕榈酸占总棕榈酸百分含量；3)将待测样品用盐酸-甲醇溶液进行甲酯化反应，按照与步骤2)相同的条件进行GC-MS检测，按照外标法(C16:0甲酯)获得待测样品中总棕榈酸含量；计算获得待测样品中Sn-2位棕榈酸含量。若待测样品为液态，例如牛奶、母乳、奶油、酸奶等，可以直接进行甲酯化反应；若待测样品为固态，例如豆粉、配方奶粉等，可用适量水溶解后再进行甲酯化反应。所述从待测样品中提取脂肪的方法可按现有技术方法进行，例如食品中脂肪的测定方法(GB/T 5009.6-2003)、食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中脂肪酸的测定(GB 5413.27-2010)、ISO14156(IDF172)等。优选地，所述从待测样品中提取脂肪的方法包括：取待测样品(或待测样品溶液)，加入适量氨水调节呈碱性，转移至分液漏斗中，加乙醇摇匀；分2次加入乙醚，摇匀；加入石油醚，振荡；静置直至上层溶液澄清；重复以上步骤提取数次，将醚溶液合并，在氮气保护下45℃旋转蒸发至干，得待测脂肪。所述用猪胰酯酶水解脂肪的方法可按现有技术方法进行。优选地，所述用氨基固相萃取柱分离Sn-2位单甘油酯的方法包括将水解后的脂肪溶液加入到用正己烷活化的氨基固相萃取柱中，弃去流出液；用正己烷-乙酸乙酯淋洗液(v/v＝85:15)淋洗，弃去流出液；用二氯甲烷-本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种直接测定甘油三酯Sn‑2位棕榈酸含量的方法，其特征在于，采用GC‑MS法进行检测，其中样品前处理包括利用盐酸‑甲醇溶液对试样进行甲酯化反应。
【技术特征摘要】
1.一种直接测定甘油三酯Sn-2位棕榈酸含量的方法，其特征在于，采用GC-MS法进行检测，其中样品前处理包括利用盐酸-甲醇溶液对试样进行甲酯化反应。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述试样包括待测样品、待测样品水解后的脂肪溶液、待测样品中分离的Sn-2位单甘油酯。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述盐酸-甲醇溶液中盐酸浓度为0.5-3mol/L，优选为0.5mol/L。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，GC-MS法检测条件如下：GC：进样器：Thermo Scientific TriPlus RSH自动进样器；色谱柱：HP-88气相色谱柱(100m×0.250mm,0.20μm)；进样口温度：200℃；恒流速模式：1mL/min；进样量：1μL；分流比：10:1；载气：N2；柱温箱升温程序如下：MS：电子轰击离子源：EI；scan模式；离子源温度：280℃；传输线温度：240℃；四级杆质量扫描范围：35-400amu；溶剂延迟10min。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待测样品包括豆粉、奶粉、牛奶、母乳，奶油，酸奶。6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)从待测样品中提取脂肪，用猪胰酯酶水解，将水解后的脂肪溶液过氨基固相萃取柱分离得Sn-2...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈历俊，张明辉，乔为仓，姜铁民，周伟明，
申请(专利权)人：北京三元食品股份有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
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