C-反应蛋白测定方法和测定试剂技术

避免前带现象、无需稀释即可测定含高浓度Ｃ－反应蛋白样品的方法和其所用的试剂。使用具有磷酸胆碱基团、通式（Ⅰ）［Ｒ↑［１］、Ｒ↑［２］和Ｒ↑［３］为氢、取代或非取代烷基、取代或非取代烯基，Ｘ↓［１］－表示无机阴离子或有机阴离子］所示阳离子性基团的化合物和Ｃ－反应蛋白的抗体进行测定。或者使用具有磷酸胆碱基团的表面活性剂、具有式（Ⅱ）［Ｙ↓［１］为疏水基团，Ｒ↑［１］、Ｒ↑［２］和Ｒ↑［３］为氢、取代或非取代烷基、取代或非取代烯基］所示阳离子性基团的表面活性剂和Ｃ－反应蛋白的抗体进行测定。Ｃ－反应蛋白的抗体，优选以聚苯乙烯类胶乳等水不溶性载体担载的。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及C-反应蛋白测定用试剂和测定方法，更详细地说就是涉及具有磷酸胆碱基团和阳离子性基团的化合物和C-反应蛋白的抗体的C-反应蛋白测定试剂、以及应用该试剂测定C-反应蛋白的方法、含有具磷酸胆碱基团的表面活性剂、具阳离子性基团的表面活性剂和C-反应蛋白的抗体的C-反应蛋白测定试剂、以及应用该试剂测定C-反应蛋白的方法。作为急性相反应物质一种的C-反应蛋白(C-reactive protein)作为各种感染性疾病、炎症性疾病和发生组织破坏的疾病等诊断和过程观察的标记物，是临床检查领域内经常测定的一个项目。作为C-反应蛋白的测定方法，已知有使用和C-反应蛋白特异结合的抗体或抗血清的毛细管法、一维免疫扩散法、免疫比浊法、胶乳免疫比浊法等测定方法。这些测定方法利用抗原C-反应蛋白和抗体结合形成巨大凝聚体而检测种种凝聚。例如，在胶乳免疫比浊法中，使用承载(致敏)抗体的粒径0.1～1微米的聚苯乙烯胶乳等载体，和相应的抗原发生抗原抗体反应时，反应液中的散射光增加，透过光减少，以吸光度或积分球浊度检测此变化就能够测定C-反应蛋白。但是，在观察此抗原抗体反应所致凝聚的方法中，已知会引起所谓“前带现象”(prozone phenomenon)的问题。所说的“前带现象”是因抗原和抗体相比有更高浓度，反而使浊度减少的现象。结果使测定时试样中抗原虽然有很高浓度，但得出低浓度的错误结论。为了避免此前带现象，必需将试样稀释、或增加使用的抗体而进行再次测定，使操作复杂化。已知磷酸胆碱在钙离子存在下和C-反应蛋白特异结合，形成凝聚体。此外，已知使用对硝基苯基磷酸胆碱琼脂糖B层析柱进行亲合层析而精制C-反应蛋白。还有，作为C-反应蛋白的定量方法，有使用含磷脂酰胆碱、胆固醇、氯化胆碱、钙等的试剂的方法(特开昭52-123295号公报)、使用含结合磷酸胆碱的高分子的试剂的方法、以及使用含结合磷酸胆碱的高分子和C-反应蛋白的特异抗体的试剂的方法(特开昭62-259063号公报)。此外，作为应用积分球浊度进行检测、使用胶乳试剂的C-反应蛋白测定方法，例如有使用协和梅迪克斯公司的C-反应蛋白用胶乳试剂(Extel CRP用EL1200)的方法。本专利技术的目的在于提供避免前带现象、无需稀释含高浓度C-反应蛋白试样的测定方法及其所用的试剂。本专利技术者们对上述课题进行了深入研究，结果发现，(A)使用具有磷酸胆碱和阳离子性基团的化合物和C-反应蛋白的抗体、或(B)使用具有磷酸胆碱基团的表面活性剂、具有阳离子性基团的表面活性剂和C-反应蛋白的抗体，能够测定试样中的C-反应蛋白，对于含高浓度C-反应蛋白的试样无需稀释就能避免前带现象而测定C-反应蛋白，从而完成了本专利技术。即，本专利技术涉及一种C-反应蛋白的测定方法，其特征在于使用含有磷酸胆碱基团和除磷酸胆碱基团外的阳离子性基团的化合物和C-反应蛋白的抗体、或使用具有磷酸胆碱基团的表面活性剂、具有除磷酸胆碱基团外的阳离子性基团的表面活性剂和C-反应蛋白的抗体来测定C-反应蛋白(专利技术1)。此外，本专利技术涉及根据专利技术1记载的C-反应蛋白测定方法，其特征在于具有磷酸胆碱基团和除磷酸胆碱基团外的阳离子性基团的化合物中阳离子性基团为通式(Ⅰ) 所示的基团(专利技术2)；根据专利技术1或2记载的C-反应蛋白的测定方法，其特征在于具有磷酸胆碱基团和除磷酸胆碱外的阴离子基团的化合物为具有磷酸胆碱基团的单体和具有阳离子性基团的单体结合的共聚物(专利技术3)；根据专利技术3记载的C-反应蛋白的测定方法，其特征在于具有磷酸胆碱基团的单体和具有阳离子性基团的单体分别为具有磷酸胆碱基和乙烯基的单体、以及具有阳离子性基团和乙烯基的单体(专利技术4)；根据专利技术4记载的C-反应蛋白测定方法，其特征在于具有磷酸胆碱基团和乙烯基的单体和具有阳离子性基团和乙烯基的单体分别为2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酸胆碱和氯化2-羟基-3-甲基丙烯酰氧基丙基三甲基铵(专利技术5)；根据专利技术1记载的C-反应蛋白测定方法，其特征在于具有具有磷酸胆碱基团的表面活性剂为通式(Ⅱ) 所示的化合物(专利技术6)。此外本专利技术涉及根据专利技术6记载的C-反应蛋白测定方法，其特征在于式(Ⅱ)所示的化合物是从溶血磷脂酰胆碱己酸酯、溶血磷脂酰胆碱肉豆蔻酸酯、溶血磷脂酰胆碱棕榈酸酯、溶血磷脂酰胆碱硬脂酸酯、大豆来源的溶血磷脂酰胆碱、磷脂酰胆碱二丁酸酯、磷脂酰胆碱二己酸酯、磷酸胆碱油氧基乙酯、神经鞘氨基磷酸胆碱中选出的1种或2种以上的化合物(专利技术7)；根据专利技术1、6和7任一项记载的C-反应蛋白测定方法，其特征在于具有阳离子性基团的表面活性剂为铵盐的表面活性剂(专利技术8)；根据专利技术8记载的C-反应蛋白测定方法，其特征在于铵盐表面活性剂为通式(Ⅲ) 所示的化合物(专利技术9)；根据专利技术9记载的C-反应蛋白测定方法，其特征在于式(Ⅲ)所示的化合物为从氯化十八烷基三甲基铵、氯化十六烷基三甲基铵、氯化十四烷基三甲基铵、氯化十二烷基三甲基铵等中选出的1种或2种以上的化合物(专利技术10)；根据专利技术1～10任一项记载的C-反应蛋白测定方法，其特征在于C-反应蛋白的抗体为水不溶性载体担载的(专利技术11)；根据专利技术11记载的C-反应蛋白测定方法，其特征在于不溶性载体为聚苯乙烯类胶乳(专利技术12)。还有，本专利技术涉及一种C-反应蛋白测定用试剂，其特征在于含有具磷酸胆碱基团和除磷酸胆碱基团外的阳离子性基团的化合物和C-反应蛋白的抗体、或者含有具磷酸胆碱基团的表面活性剂、具有除磷酸胆碱基团外的阳离子基团的表面活性剂和C-反应蛋白的抗体(专利技术13)；根据专利技术13记载的C-反应蛋白测定用试剂，其特征在于具有磷酸胆碱基团和除磷酸胆碱基团外的阳离子性基团的化合物中的阳离子性基团为通式(Ⅰ) 所示的基团(专利技术14)；根据专利技术13或14记载的C-反应蛋白测定用试剂，其特征在于具有磷酸胆碱基团和除磷酸胆碱基团外的阳离子性基团的化合物为具有磷酸胆碱基团的单体和具有阳离子性基团的单体结合而成的共聚物(专利技术15)；根据专利技术15记载的C-反应蛋白测定用试剂，其特征在于具有磷酸胆碱基团的单体和具有阳离子性基团的单体分别为具有磷酸胆碱基团和乙烯基的单体和具有阳离子性基团和乙烯基的单体(专利技术16)；根据专利技术16记载的C-反应蛋白测定用试剂，其特征在于具有磷酸胆碱基团和乙烯基的单体和具有阳离子性基团和乙烯基的单体分别为2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酸胆碱和氯化2-羟基-3-甲基丙烯酰氧基丙基三甲基铵(专利技术17)。此外，本专利技术还涉及根据专利技术13记载的C-反应蛋白测定用试剂，其特征在于具有磷酸胆碱基团的表面活性剂为通式(Ⅱ) 所示的化合物(专利技术18)；根据专利技术18记载的C-反应蛋白测定用试剂，其特征在于式(Ⅱ)的化合物为从溶血磷脂酰胆碱己酸酯、溶血磷脂酰胆碱肉豆蔻酸酯、溶血磷脂酰胆碱棕榈酸酯、溶血磷脂酰胆碱硬脂酸酯、大豆来源的溶血磷脂酰胆碱、磷脂酰胆碱二丁酸酯、磷脂酰胆碱二己酸酯、磷酸胆碱油氧基乙酯、神经鞘氨基磷酸胆碱中选出的1种或2种以上的化合物(专利技术19)；根据专利技术13、18和19任一项记载的C-反应蛋白测定用试剂，其特征在于具有阳离子性基团的表面活性剂为铵盐表面活性剂(专利技术20)；根据专利技术20记载的C-反应蛋白测定用试剂，其特征在于铵盐的表面活性剂为通式(Ⅲ) 所示的化合物(发本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种Ｃ－反应蛋白的测定方法，其特征在于使用含有磷酸胆碱基团、除磷酸胆碱基团外的阳离子性基团的化合物和Ｃ－反应蛋白的抗体、或使用具有磷酸胆碱基团的表面活性剂、具有除磷酸胆碱基团外的阳离子性基团的表面活性剂和Ｃ－反应蛋白的抗体来测定Ｃ－反应蛋白。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：横滨裕明，梅原晴美，松森繁，山田智，首藤健志郎，榊秀次郎，铃木宪，
申请(专利权)人：协和梅迪克斯株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]