一种红光检测缺血修饰白蛋白的试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术是一种红光检测缺血修饰白蛋白的试剂盒及其检测方法。试剂盒是由第一试剂二价金属离子钴、锌、铜或镍溶液和第二试剂ｐＨ８－１０的金属离子显色剂溶液或用第二试剂显色的ＩＭＡ测试纸条组成。检测方法是将生物样品和第一试剂溶液混合成混合液，然后加入第二试剂显色，或将混合液滴加在ＩＭＡ测试纸条上显色，形成蓝色或绿色配合物，在红光６４０－７００ｎｍ波长测定其吸光度或反射光率，其测定值可诊断病人是否有缺血症状。本发明专利技术开发了一种适合床边诊断的快速检测ＩＭＡ方法，步骤简单，仅１５分钟左右就能完成，并避免了样品中干扰物的影响，使测定结果更接近真值。试剂盒成本低廉，灵敏度高，特异性强，性能稳定，便于运输和保存。

Reagent kit for detecting ischemia modified albumin by red light and detection method thereof

The invention relates to a reagent kit for detecting ischemia modified albumin by red light and a detection method thereof. The kit is composed of a first reagent, two valence metal ions, cobalt, zinc, copper or nickel solution, and second reagent pH8 - 10 metal ion chromogenic agent solution or IMA test strip prepared with second reagent color. The detection method is that the first biological samples and mixed reagent solution into the mixture, then add second reagent, or mixed liquid dripped on the IMA test paper color, form blue or green complexes, measuring the absorbance or the reflectivity in the red light of 640 700nm wavelength, the measured value can diagnose whether patients ischemic symptoms. The invention provides a method for rapid detection of IMA, bedside diagnosis of simple steps, only 15 minutes to complete, and to avoid the influence of interferents in the sample, the measured result is more close to the true value. The kit has the advantages of low cost, high sensitivity, strong specificity, stable performance, and convenient transportation and preservation.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种红光检测缺血修饰白蛋白(IMA)的试剂盒及其检测方法。 这种试剂盒及其检测方法主要是将病人的生物样品和第一试剂己知过量的二价金 属离子溶液混合，混合液中含有与白蛋白结合的和未与白蛋白结合的金属离子， 然后加入第二试剂pH8-10的金属离子显色剂溶液显色或用IMA测试纸条显色， 在红光640-700nm波长检测金属离子显色剂和未与白蛋白结合的钴、锌、铜离子 生成的蓝色配合物或和镍离子生成的绿色配合物的吸光度或反射光率，其测定值 可诊断病人是否中风状。
技术介绍
缺血通常是由于局部血管狭窄或阻塞导致组织器官的供氧能力下降，临床上 常见的缺血性疾病有脑中风(Stroke)、急性冠状动脉综合症(Acute Coronary Syndrome，ACS)、下肢缺血性血管病变和肺栓塞等。脑中风是一种突然起病的脑血液循环障碍性疾病，是严重危害人类健康和生 命安全。我国每年发生中风病人达200多万，发病率高达120/10万，致残率高达 75%，死亡约120万人。脑中风的早期发现对预后极其重要，当前脑中风的主要 诊断手段是CT和核磁共振，但出现影像学的变化至少需要六至八小时，而抢救 的黄金时间是在六小时内，因此迫切需要一种早期预警指标，IMA是目前最有潜 力的脑中风的早期检测指标之一，可用于中风的早期诊断，降低致残率和死亡率。冠心病是中国人死亡的第二位原因。ACS是以冠状动脉粥样硬化斑块破裂或 糜烂，继发完全或不完全闭塞性血栓形成为病理基础的一组临床综合征；其症状 包括胸痛、上腹部和臂部不适、喘气、恶心和呕吐等；常规心电图检测仅能发现 约50%的患者，容易漏诊；临床目前常用的肌钙蛋白I对于ACS有较高的特异性， 但灵敏度较低，不利于ACS的早期筛査，IMA是目前国际上公认的心肌缺血的早 期检测指标，可用于心肌缺血的诊断，提高对ACS的早期诊断及用于ACS危险 性分级，以降低对非缺血病人的收治率和心血管高危个体的漏诊率，节省医疗资下肢缺血性血管病变主要分为下肢动脉硬化闭塞症和深静脉血栓，目前我国 60岁以上血管病变的发病率高达79.9%，而70岁以上的发病率几乎接近100%。 下肢动脉硬化闭塞症的主要原因为下肢中小动脉狭窄或闭塞引起的供血不足导 致的坏死，主要表现为患者肢端因缺血坏死而发生坏疽，严重者须截肢。下肢深 静脉血栓是由于血凝块堵塞深静脉，导致静脉回流严重受阻，从而使受堵塞的肢 体其远端的肿胀疼痛，是肺栓塞的主要危险因素。据统计，美国每年肺栓塞发病 率约60万，三分之一死亡，占死因第三位。约20 30%患者未及时或未能获诊 断和治疗而死亡，若能及时诊断和给予抗凝治疗，病死率可望降低。因此对下肢 缺血和肺栓塞的早期诊断是十分必要的，但目前除超声、CT等影像学外急需一 种生化检测手段协助临床医师诊断，研究表明IMA对两者有重要的辅助诊断价值。综上所述，在脑中风、急性冠状动脉综合征、下肢缺血性血管病变和肺栓塞 等缺血性疾病早期诊断方面，IMA是理想的辅助诊断指标。IMA在缺血数分钟内就 可升高，可衡量与缺血组织接触的白蛋白改变程度，IMA在心肌缺血时就升高， 能在缺血缓解后高水平维持数小时，不象其它心肌标志物在坏死时才出现。已知 报道有美国Bar-Or D等(US7， 070， 937, 2006年)专利技术的IMA检测试剂盒， 其基本原理为正常对照组的样品中白蛋白以活性形式存在，加入过度已知量的 钴离子溶液后，钴离子即可与白蛋白结合，溶液中未结合的钴离子浓度较低；而 缺血病人的样品中含有较多缺血修饰白蛋白，由于IMA与钴离子结合的能力弱， 溶液中就存在较高浓度的未结合的钴离子，采用二硫苏糖醇(DTT)显色剂显色, 检测未与白蛋白结合的钴离子，在450-500nm波长检测样品的吸光度，所得数据 与己知标准IMA曲线进行对照，即可得出IMA值。但是美国Bar-Or D方法在 450-500nm波长检测IMA不能避免蛋白质特别是白蛋白、脂血、血红蛋白和胆红 素等物质的严重干扰，影响灵敏度和特异性，限止了推广使用，因此开发一种新 的IMA检测试剂盒及其检测方法，是临床上迫切需要的。
技术实现思路
本专利技术提供。这种试剂 盒及其检测方法主要是将病人的生物样品和第一试剂己知过量的二价金属离子 钴、锌、铜或镍溶液混合，混合液中含有与白蛋白结合的和未与白蛋白结合的金 属离子，然后加入第二试剂pH8-10的金属离子显色剂溶液显色或用IMA测试纸 条显色，在红光640-700nm波长检测金属离子显色剂和未与白蛋白结合的钴、锌、铜离子形成的蓝色配合物或和镍离子形成的绿色配合物的吸光度或反射光率，其测定值可诊断病人是否有缺血症状。并由于本检测方法能避免样品中千扰物的影响，使测定值更接近真值。本专利技术红光检测缺血修饰白蛋白试剂盒是由第一试剂二价金属离子钴、锌、铜或镍溶液(10.00-60.00mg/100ml)和第二试剂由pH8-10氨水-氯化铵缓冲液配制的0.10-3.00 mg/ml金属离子显色剂溶液或用第二试剂显色的IMA测试纸条组成。IMA测试纸条1 (参见图1)的结构包括显色纸块2和作为底层的条状硬质塑料衬垫3，将纸块通过pH8-10氨水-氯化铵缓冲液配制的0.10-3.00 mg/ml金属离子显色剂溶液浸润干燥后制成显色纸块2，然后将显色纸块2粘贴在条状硬质塑料衬垫3上，即成IMA测试纸条1。检测的基本原理为将病人生物样品如全血、血清、血浆、体液或组织液和第一试剂已知过量的二价金属离子溶液混合形成混合液，然后加入第二试剂由氨水-氯化铵缓冲液配制的pH8-10的金属离子显色剂溶液显色，或将所述混合液滴加在IMA测试纸条上显色。正常对照组样品中的白蛋白以活性形式存在，在和第一试剂已知过量的二价金属离子溶液混合后，混合液中未与白蛋白结合的金属离子的数量较少，而心肌缺血病人含有较多的缺血修饰白蛋白，由于IMA与金属离子结合的能力弱，混合液中存在较多数量的未与白蛋白结合的金属离子。第二试剂pH8-10的金属离子显色剂溶液或IMA测试纸条上显色纸块中的金属离子显色剂能和未与白蛋白结合的钴、锌、铜离子形成的蓝色配合物或和镍离子形成的绿色配合物，在红光640-700nm处采用分光光度比色仪检测样品的吸光度或采用反射光率检测仪检测反射光率，所得数值与一已知标准IMA曲线进行对照，即可得到IMA值，其测定值用每毫升单位(U/ml)表示。在红光波长检测时，样品中的蛋白质特别是白蛋白、血红蛋白、脂血和胆红素等几乎没有吸收，在此条件下的检测结果是更接近真值。本专利技术红光检测缺血修饰白蛋白试剂盒的检测方法，检测IMA方法的步骤如下(参见图2): (1)将病人的生物样品如全血、血清、血浆、体液或组织液和第一试剂已知过量的二价金属离子钴、锌、铜或镍溶液(10.00-60.00mg/100ml)混合，混合液中含有与白蛋白结合的和未与白蛋白结合的金属离子，18-37 °C孵育5分钟；(2)然后加入第二试剂由pH8-10氨水-氯化铵缓冲液配制的0.10-3.00mg/ml金属离子显色剂溶液显色或将混合液滴加在IMA测试纸条上显色，金属离子显色剂和未与白蛋白结合的钴、锌、铜离子生成蓝色配合物或和镍离子生成绿色配合物，18-37 °C孵育5-10分钟；(本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种红光检测缺血修饰白蛋白的试剂盒，其特征在于试剂盒是由第一试剂二价金属离子钴、锌、铜或镍溶液１０．００－６０．００ｍｇ／１００ｍｌ和第二试剂由ｐＨ８－１０氨水－氯化铵缓冲液配制的０．１０－３．００ｍｇ／ｍｌ金属离子显色剂溶液，或用第二试剂显色的ＩＭＡ测试纸条（１）组成。

【技术特征摘要】
1.一种红光检测缺血修饰白蛋白的试剂盒，其特征在于试剂盒是由第一试剂二价金属离子钴、锌、铜或镍溶液10.00-60.00mg/100ml和第二试剂由pH8-10氨水-氯化铵缓冲液配制的0.10-3.00mg/ml金属离子显色剂溶液，或用第二试剂显色的IMA测试纸条(1)组成。2. 如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述的IMA测试纸条(1)的结 构包括将纸块通过pH8-10氨水-氯化铵缓冲液配制的0.10-3.00 mg/ml金属离子显 色剂溶液浸润干燥后制成的显色纸块(2)和条状硬质塑料衬垫(3)，显色纸块(2) 粘贴在条状硬质塑料衬垫(3)上。3. 权利要求1和2所述试剂盒的检测方法，其特征在于检测方法的步骤是(1) 将病人的生物样品和第一试剂已知过量的二价金属离子钴、锌、铜或镍溶液混合成混合液，18-37 °C孵育5分钟；(2) 然后加入第二试剂由pH8-10氨水-氯化铵缓冲液配制的金属离子显色剂 溶液显色，或将所述混合液滴加在IMA测试纸条(1)上显色，金属离子显色剂 和未与白蛋白结合的钴、锌、铜...

【专利技术属性】
技术研发人员：贺坚慧，程振球，刘佳，潘曙明，江静，
申请(专利权)人：贺坚慧，
类型：发明
国别省市：31[]