本发明专利技术公开了一种针对微量、降解检材的STR试剂盒及其应用，所述试剂盒包括17对STR基因座的特异性扩增引物，共分为5组，涉及6中颜色的荧光标记。本发明专利技术针对微量、降解等疑难检材的检测，具有快速、灵敏度高和抗抑制能力强的优点；本发明专利技术建立的17个基因座的迷你型扩增体系，扩增片段短，适用于微量、高度降解或抑制剂含量高的疑难样本，在实际应用中可成功获得白骨化尸骨、接触性脱落细胞、土壤中的血液样本等特殊生物检材的STR分型；本发明专利技术所述的体系中引入DYS391基因座，能够对性别基因Amelogenin起到辅助判定的作用；本发明专利技术所述试剂盒能够快速检出，整个PCR过程不超过50分钟。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学领域，涉及分子遗传学，具体涉及一种针对微量、降解检材的STR试剂盒及其应用。
技术介绍
短串联重复序列基因座(STR)是目前普遍应用的遗传标记。90年代初STR基因座多态性的发现，特别是STR基因座具有片段小容易扩增，适宜于检验微量和降解检材，而且各基因座的扩增条件相似而能够复合扩增，因而具有灵敏、准确、快速、信息量大等优点。尤其是在建立DNA数据库方面，STR复合扩增技术具有极大的优越性。因此美国FBI选择了13个STR基因座用于建立DNA数据库—CODIS(CombinedDNAIndexSystem):CSF1PO、D3S1358、D5S818、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D21S11、FGA、TH01、TPOX、vWA。这些STR基因座联用具有较高的个体识别率，通常被称为13个核心基因座。正因为STR所具备的优点和应用前景，法医学界以及一些大的公司均投入大量的资金对其进行了开发性的研究。90年代中后期以美国AB公司为代表的研发商建立起荧光复合扩增体系。经历多年的发展已经升级到六色荧光系统，法医常用试剂盒从最初的ABI(AppliedBiosystems，USA)Identifiler，Promega(USA)的PowerPlex16到现在ABI的包含24个STR基因座的AmpFeSTRglobalfiler和Promega包含27个STR的PowerPlexfusion。国内厂家包括中德美联的17+1，EX20，基点认知的20A、25A，海尔施的STRtyper21G、STRtyper26G和物证鉴定中心的mini和Typer15等。自90年代中期公安部提出“统一规划、统一标准、分步实施、滚动发展”的DNA数据库建设原则开始，我国的DNA数据库已有15年的历史。10余年来，DNA数据库集聚了3000万以上STR数据，在超过100万起的案件中发挥了作用，已经初步实现了跨时空多化应用的建设目标，在精准打击犯罪中发挥了具大的作用。然而，在实际检测过程中，由于样本的多样性和其他各种条件的限制，出现了数量较多的疑难检材，即无法获得分型结果的样本。这些疑难样本主要为以下几类：1)高度降解检材。法医物证是人体各种体液与组织，具有容易变性、变质、降解和腐败的特点。不同检材所受环境因素的影响千差万别，尤其是来源自犯罪现场的检材，自身的变性、降解和腐败等改变的程度是不能人为控制的，也是无法预知。STR基因座片段小，相对于其他方法来说，对降解检材的适应性更好，但高度降解检材，用常规STR试剂盒无法取得完整分型结果。2)微量检材。现场检材多为微量，珍贵，样本中DNA含量非常少，通常只有几个细胞的DNA含量，无法达到常规STR试剂盒的最低检出限，导致无扩增结果或只有部分扩增结果。3)含高浓度抑制剂的检材。现场检材来源广泛，可能存在的抑制成分多样，对试剂盒的抗抑制能力有较高要求。一些样本的来源特殊如土壤中的血迹等，即使经过DNA提取的步骤，仍有大量的PCR抑制剂如血红素、腐殖酸等的存在，破坏PCR的扩增过程，导致无法获得完整的分型结果。Chelex等粗提DNA的提取方法也会残留较多的抑制剂成分。我国在DNA数据库建设初期，使用STR试剂盒是被国外产品，主要是ABI公司垄断的，随着中德美联17+1、EX20；基点认知的20A；二所的typer15的研发生产，才逐步打破国外垄断，目前在DNA数据库建设中，国产试剂盒占有率超过50％。但由于案件现场样本的复杂性和对STR试剂盒要求高，暂时使用均为国外厂商试剂盒，主流是ABI2010年根据IdentifilerTM优化推出的IdentifilerTMplus。
技术实现思路
解决的技术问题：为了克服现有技术的缺陷，开发一种针对来源于犯罪现场的微量、降解等疑难检材的STR试剂盒，且同时具有快速、高灵敏度和强抗抑制能力的优点，本专利技术提供了一种针对微量、降解检材的STR试剂盒及其应用。技术方案：一种针对微量、降解检材的STR试剂盒，所述试剂盒包括17对STR基因座的特异性扩增引物，其中STR基因座为：D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、TPOX、TH01、D18S51、D2S1338、vWA、D21S11、DYS391、D8S1179、D5S818、CSF1PO、D19S433、FGA及Amelogenin。优选的，所述17对STR基因座的特异性扩增引物的序列如下：D3S1358、SEQIDNO.1～2；D13S317、SEQIDNO.3～4；D7S820、SEQIDNO.5～6；D17S539、SEQIDNO.7～8；TPOX、SEQIDNO.9～10；TH01、SEQIDNO.11～12；D18S51、SEQIDNO.13～14；D2S1338、SEQIDNO.15～17；vWA、SEQIDNO.17～18；D21S11、SEQIDNO.19～20；DYS391、SEQIDNO.21～22；D8S1179、SEQIDNO.23～24；D5S818、SEQIDNO.25～26；CSF1PO、SEQIDNO.27～28；D19S433、SEQIDNO.29～30；FGA、SEQIDNO.31～32；Amelogenin、SEQIDNO.33～34。优选的，所述引物的浓度如下：D3S1358、0.6μM；D13S317、0.45μM；D7S820、0.5μM；D16S539、0.6μM；TPOX、0.8μM；TH01、0.55μM；D18S51、0.9μM；D2S1338、1.0μM；vWA、0.6μM；D21S11、0.86μM；DYS391、0.7μM；D8S1179、0.95μM；D5S818、0.75μM；CSF1PO、0.65μM；D19S433、0.8μM；FGA、1μM；Amelogenin、0.65μM。所述试剂盒中的引物及其序列和在扩增体系中的浓度如下表所示：优选的，所述引物的PCR产物均小于300bp。优选的，所述引物分为五组：第一组，D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539；第二组，Amelogenin、TPOX、TH01、D18S51；第三组，D2S1338、vWA、D21S11；第四组，DYS391、D8S1179、D5S818、CSF1PO；第五组，D19S433、FGA；每对引物中至少一条采用荧光染料标记其5’端。优选的，所述荧光染料为6-FAM、HEX、VIG550、VIG590、VIG620中任意一种，且每组采用的荧光标记不同；其中6-FAM为蓝色荧光，HEX为绿色荧光，VIG550为黄色荧光，VIG590为红色荧光，VIG620为紫色荧光。优选的，所述试剂盒中含有分子内标，且分子内标由橙色荧光SIZ标记。优选的，所述试剂盒的组分如下：ReactionMix，2mL；基因组DNA，10ng；引物混合物，1mL；5U/μL的热启动Taq酶，100μL；sdH2O，1.95mL；其中，所述的ReactionMix成分为：MgCl27.5mM，pH8.3Tris-HCl125mM,KCl125mM,dNTPs7.5mM,BSA2mg\本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种针对微量、降解检材的STR试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括17对STR基因座的特异性扩增引物，其中STR基因座为：D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、TPOX、TH01、D18S51、D2S1338、vWA、D21S11、DYS391、D8S1179、D5S818、CSF1PO、D19S433、FGA及Amelogenin。
【技术特征摘要】
1.一种针对微量、降解检材的STR试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括17对STR基因座的特异性扩增引物，其中STR基因座为：D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、TPOX、TH01、D18S51、D2S1338、vWA、D21S11、DYS391、D8S1179、D5S818、CSF1PO、D19S433、FGA及Amelogenin。2.根据权利要求1所述的一种针对微量、降解检材的STR试剂盒，其特征在于，所述17对STR基因座的特异性扩增引物的序列如下：D3S1358、SEQIDNO.1～2；D13S317、SEQIDNO.3～4；D7S820、SEQIDNO.5～6；D17S539、SEQIDNO.7～8；TPOX、SEQIDNO.9～10；TH01、SEQIDNO.11～12；D18S51、SEQIDNO.13～14；D2S1338、SEQIDNO.15～17；vWA、SEQIDNO.17～18；D21S11、SEQIDNO.19～20；DYS391、SEQIDNO.21～22；D8S1179、SEQIDNO.23～24；D5S818、SEQIDNO.25～26；CSF1PO、SEQIDNO.27～28；D19S433、SEQIDNO.29～30；FGA、SEQIDNO.31～32；Amelogenin、SEQIDNO.33～34。3.根据权利要求1所述的一种针对微量、降解检材的STR试剂盒，其特征在于，所述引物的浓度如下：D3S1358、0.6μM；D13S317、0.45μM；D7S820、0.5μM；D16S539、0.6μM；TPOX、0.8μM；TH01、0.55μM；D18S51、0.9μM；D2S1338、1.0μM；vWA、0.6μM；D21S11、0.86μM；DYS391、0.7μM；D8S1179、0.95μM；D5S818、0.75μM；CSF1PO、0.65μM；D19S433、0....
【专利技术属性】
技术研发人员：周如华，石云杰，张健，王鑫，孙元鹏，陈林丽，张雷，王艳芳，郭育林，周翔，郑卫国，
申请(专利权)人：无锡中德美联生物技术有限公司，苏州市公安局，
类型：发明
国别省市：江苏;32
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。