针对疑难检材的八色系统STR位点复合扩增试剂盒及应用技术方案

本发明专利技术公开了针对疑难检材的八色系统STR位点复合扩增试剂盒及应用，所述试剂盒包括26个STR基因座的特异性扩增引物，其中STR基因座为：CSF1PO、FGA、TH01、TPOX、vWA、D3S1358、D5S818、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D21S11、Penta D、Penta E、D6S1043、Amelogenin、D2S1338、D12S391、D19S433、D1S1656、D2S441、D22S1045、D10S1248，及两个性别辅助位点DYS391和Yindel。以上所有位点最大扩增增子在300bp内。本发明专利技术所述试剂盒对于现场案件中的低拷贝、高度降解和高抑制剂等疑难检材具有快速、高效检测的优点；所有基因座与已有案件数据库兼容；更短的扩增时间，有利于缩短案件排查时间，协助公安人员迅速锁定嫌疑人，提高案件破解效率。提高案件破解效率。提高案件破解效率。

【技术实现步骤摘要】
针对疑难检材的八色系统STR位点复合扩增试剂盒及应用


[0001]本专利技术属于分子生物学领域，涉及采用化学荧光分子标记引物进行基因检测，具体为针对疑难检材的八色系统STR位点复合扩增试剂盒及应用。

技术介绍

[0002]目前，法医实践中常用的案件检验荧光标记STR分型试剂盒来源于美国应用生物系统公司(ABI)和普洛麦格公司(Promega)。ABI公司最新推出了VeriFilerPlus PCR扩增试剂盒，该试剂盒是六色荧光系统，包含23个常染色体位点、2个性别位点Amelogenin和Y
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Indel，扩增产物大小范围是80bp
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430bp。Promega公司的案件检验新品是VersaPlex 27PY STR试剂盒，该试剂盒也是六色荧光系统，包含23个常染色体位点、1个性别位点Amelogenin和3个Y
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STR基因座(DYS391、DYS576和DYS570)，扩增产物大小范围是75bp
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480bp。以上两款STR试剂盒检测降解检材时，均会出现扩增片段越长扩增结果越差，即一些大片段STR基因座分型结果较差的现象。而增加模板量和增加循环次数、扩增次数、减小扩增体系，或采用巢式PCR等提高PCR灵敏度的方法可提高降解检材检验的成功率，但也存在着实验结果重复性差，实验室污染难控制等缺点。
[0003]随着对检验降解DNA检材研究的不断深入，STR分型技术有了新的进步，在原来STR的基础上，重新设计引物，使前后引物尽可能接近或达到核心重复序列处，减少扩增片段大小，即Mini
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STR技术。ABI和Promega公司曾分别推出MiniFiler和S5 System两款试剂盒，但它们均存在很大的局限性，位点少且与其他商品化试剂盒联合应用的互补性和通用性较差。国内基于六色荧光系统，无锡中德美联公司也推出了包含16个位点的Mini
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STR产品，虽然个体识别效能达到了Identifiler同等水平，但受限于遗传分析仪的荧光通道数，该试剂盒仍然满足不了客户对于更多位点和更高识别能力的要求。

技术实现思路

[0004]解决的技术问题：为了克服现有技术的不足，结合最新型的八色荧光染料标记体系，并采用迷你STR的概念来设计引物，开发一种包含26个位点、针对来源于案件现场的微量、降解、含有高抑制剂等疑难检材的八色荧光标记迷你型STR引物组、及其试剂盒和应用，且同时具有高效、快速、高灵敏度和强抗抑制能力的优点。
[0005]本专利技术试剂盒包含了公安部推荐的20个核心和4个优选基因座的全部信息，以及辅助性别判断的Y染色体基因座DYS391和Yindel。较市场上现有案件试剂盒，本专利技术所述试剂盒针对疑难检材、降解检材的检出率更高，能够获得更多的基因座信息，极大地提高了疑难检材利用率。鉴于此，本专利技术提供了针对疑难检材的八色系统STR位点复合扩增试剂盒及应用。
[0006]技术方案：针对疑难检材的八色系统STR位点复合扩增试剂盒，所述试剂盒包括26个STR基因座的特异性扩增引物，其中STR基因座为：CSF1PO、FGA、TH01、TPOX、vWA、D3S1358、D5S818、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D21S11、Penta D、Penta E、D6S1043、
Amelogenin、D2S1338、D12S391、D19S433、D1S1656、D2S441、D22S1045、D10S1248，及两个性别辅助位点DYS391和Yindel。
[0007]优选的，所述26个基因座的特异性扩增引物序列如下：CSF1PO、SEQ ID NO.1～2；FGA、SEQ ID NO.3～4；TH01、SEQ ID NO.5～6；TPOX、SEQ ID NO.7～8；vWA、SEQ ID NO.9～10；D3S1358、SEQ ID NO.11～12；D5S818、SEQ ID NO.13～14；D7S820、SEQ ID NO.15～16；D8S1179、SEQ ID NO.17～18；D13S317、SEQ ID NO.19～20；D16S539、SEQ ID NO.21～22；D18S51、SEQ ID NO.23～24；D21S11、SEQ ID NO.25～26；Penta D、SEQ ID NO.27～28；Penta E、SEQ ID NO.29～30；D6S1043、SEQ ID NO.31～32；Amelogenin、SEQ ID NO.33～34；D2S1338、SEQ ID NO.35～36；D12S391、SEQ ID NO.37～38；D19S433、SEQ ID NO.39～40；D1S1656、SEQ ID NO.41～42；D2S441、SEQ ID NO.43～44；D22S1045、SEQ ID NO.45～46；D10S1248、SEQ ID NO.47～48；DYS391、SEQ ID NO.49～50；Yindel、SEQ ID NO.51～52。
[0008]优选的，所述26个基因座的特异性扩增引物的浓度如下：SEQ ID NO.1～2、0.15μM；SEQ ID NO.3～4、0.17μM；SEQ ID NO.5～6、0.12μM；SEQ ID NO.7～8、0.13μM；SEQ ID NO.9～10、0.12μM；SEQ ID NO.11～12、0.14μM；SEQ ID NO.13～14、0.12μM；SEQ ID NO.15～16、0.13μM；SEQ ID NO.17～18、0.15μM；SEQ ID NO.19～20、0.14μM；SEQ ID NO.21～22、0.17μM；SEQ ID NO.23～24、0.12μM；SEQ ID NO.25～26、0.12μM；SEQ ID NO.27～28、0.17μM；SEQ ID NO.29～30、0.16μM；SEQ ID NO.31～32、0.17μM；SEQ ID NO.33～34、0.12μM；SEQ ID NO.35～36、0.11μM；SEQ ID NO.37～38、0.10μM；SEQ ID NO.39～40、0.08μM；SEQ ID NO.41～42、0.14μM；SEQ ID NO.43～44、0.17μM；SEQ ID NO.45～46、0.15μM；SEQ ID NO.47～48、0.14μM；SEQ ID NO.49～50、0.12μM；SEQ ID NO.51～52、0.14μM。
[0009]所述试剂盒中的引物及其序列和浓度如下表所示：
[0010][0011][0012][0013]优选的，所述26个基因座的特异性扩增引物分为7组；具体为：D3S1358、D1S1656、D8S1179、D21S11为一组；D2S441、D13S317、D16S539、CSF1PO、D10S1248为一组；Amelogenin、Yinde本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.针对疑难检材的八色系统STR位点复合扩增试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括26个STR基因座的特异性扩增引物，其中STR基因座为：CSF1PO、FGA、TH01、TPOX、vWA、D3S1358、D5S818、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D21S11、Penta D、Penta E、D6S1043、Amelogenin、D2S1338、D12S391、D19S433、D1S1656、D2S441、D22S1045、D10S1248，及两个性别辅助位点DYS391和Yindel。2.根据权利要求1所述的针对疑难检材的八色系统STR位点复合扩增试剂盒，其特征在于，所述26个基因座的特异性扩增引物序列如下：CSF1PO、SEQ ID NO.1～2；FGA、SEQ ID NO.3～4；TH01、SEQ ID NO.5～6；TPOX、SEQ ID NO.7～8；vWA、SEQ ID NO.9～10；D3S1358、SEQ ID NO.11～12；D5S818、SEQ ID NO.13～14；D7S820、SEQ ID NO.15～16；D8S1179、SEQ ID NO.17～18；D13S317、SEQ ID NO.19～20；D16S539、SEQ ID NO.21～22；D18S51、SEQ ID NO.23～24；D21S11、SEQ ID NO.25～26；Penta D、SEQ ID NO.27～28；Penta E、SEQ ID NO.29～30；D6S1043、SEQ ID NO.31～32；Amelogenin、SEQ ID NO.33～34；D2S1338、SEQ ID NO.35～36；D12S391、SEQ ID NO.37～38；D19S433、SEQ ID NO.39～40；D1S1656、SEQ ID NO.41～42；D2S441、SEQ ID NO.43～44；D22S1045、SEQ ID NO.45～46；D10S1248、SEQ ID NO.47～48；DYS391、SEQ ID NO.49～50；Yindel、SEQ ID NO.51～52。3.根据权利要求1所述的针对疑难检材的八色系统STR位点复合扩增试剂盒，其特征在于，所述26个基因座的特异性扩增引物的浓度如下：SEQ ID NO.1～2、0.15μM；SEQ ID NO.3～4、0.17μM；SEQ ID NO.5～6、0.12μM；SEQ ID NO.7～8、0.13μM；SEQ ID NO.9～10、0.12μM；SEQ ID NO.11～12、0.14μM；SEQ ID NO.13～14、0.12μM；SEQ ID NO.15～16、0.13μM；SEQ ID NO.17～18、0.15μM；SEQ ID NO.19～20、0.14μM；SEQ ID NO.21～22、0.17μM；SEQ ID NO.23～24、0.12μM；SEQ ID NO.25～26、0.12μM；SEQ ID NO.27～28、0.17μM；SEQ ID NO.29～30、0.16μM；SEQ ID NO.31～32、0.17μM；SEQ ID NO.33～34...

【专利技术属性】
技术研发人员：周如华，王鑫，石云杰，张健，陈维忠，崔扬，邵泽香，梅兴林，李娟，史明皓，姜颖晔，范晓芸，
申请(专利权)人：无锡中德美联生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：