水牛21个STR位点的荧光标记复合扩增试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了水牛21个STR位点的荧光标记复合扩增试剂盒及其应用，所述试剂盒包括扩增21个水牛STR位点的特异性引物，其中STR位点为：CSSM019、BM2113、CSSM047、CSSM038、SPS113、CSRM060、CSSM057、CSSM033、CSSM029、CSSM022、CSSM043、UMN0929、TGLA126、ETH225、CSSM041、CSSM013、TGLA227、FJ232023、ILSTS030、FJ232022、CSSM032。与现有技术相比，本发明专利技术具有以下优点：(1)本发明专利技术所述试剂盒具有特异性强，灵敏度高，分型结果准确的优点，完全能够满足水牛亲权鉴定与个体识别的需要；(2)所述试剂盒涵盖了水牛21个STR基因座，不仅弥补了本领域产品或技术上的空缺，同时提高该类案件的解决速率。解决速率。解决速率。

【技术实现步骤摘要】
水牛21个STR位点的荧光标记复合扩增试剂盒及其应用


[0001]本专利技术属于法医遗传学领域，涉及一种荧光标记复合扩增检验系统，具体为水牛21个STR位点的荧光标记复合扩增试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]水牛，常见牛种之一，由亚洲野水牛在3000-6000年前驯化而来，主要分布在南亚、东南亚及东亚的热带和亚热带地区，是我国南方的一种重要家畜，通常用于水田的耕作，在稻作文化的发展和传播中扮演着重要的角色，是我国主要牛种之一。我国拥有丰富的水牛遗传资源，据联合国粮食与农业组织资料显示，中国水牛存栏量居世界第三位。
[0003]短串联重复序列基因座(short tandem repeat，STR)作为继限制性片段长度多态性之后的第二代遗传标记，自二十世纪八九十年代以来，被广泛应用于法医物证学方面相关的研究及鉴定，是目前应用最广泛的遗传标记之一。STR标记与其他遗传标记物相比，STR基因座片段小、容易扩增，更适用于微量和降解检材，且多个STR基因座可以同时进行复合扩增，具有快速、高效、准确、灵敏、信息量大等优点，被广泛应用于法医物证中的个体识别和亲子鉴定。经研究报道发现，该项技术也可用于牛亲权鉴定与个体识别。
[0004]目前市场上并没有针对水牛STR检测的商品化试剂盒，针对黄牛STR检测的商品化试剂盒有AB的Thermo Scientifc Bovine Genotypes Panel 3.1。因水牛与黄牛在生物分类学上分属不同的牛属，两者的基因存在较大的差异。根据黄牛基因筛选的STR位点并不能完全适用于水牛的检测。本专利技术筛选可用于水牛检测的21个特异性STR位点，可高效解决水牛个体识别的问题，不仅弥补国内该类产品的空缺，而且提高该类案件的解决速率。

技术实现思路

[0005]解决的技术问题：为了克服现有技术的缺陷，获得一种具有高分辨率且能够满足水牛亲权鉴定与个体识别的试剂盒，本专利技术提供了水牛21个STR位点的荧光标记复合扩增试剂盒及其应用。
[0006]技术方案：水牛21个STR位点的荧光标记复合扩增试剂盒，所述试剂盒包括扩增21个水牛STR位点的特异性引物，其中STR位点为：CSSM019、BM2113、CSSM047、CSSM038、SPS113、CSRM060、CSSM057、CSSM033、CSSM029、CSSM022、CSSM043、UMN0929、TGLA126、ETH225、CSSM041、CSSM013、TGLA227、FJ232023、ILSTS030、FJ232022、CSSM032。
[0007]优选的，所述特异性引物序列如下：CSSM019、SEQ ID NO:1～2；BM2113、SEQ ID NO:3～4；CSSM047、SEQ ID NO:5～6；CSSM038、SEQ ID NO:7～8；SPS113、SEQ ID NO:9～10；CSRM060、SEQ ID NO:11～12；CSSM057、SEQ ID NO:13～14；CSSM033、SEQ ID NO:15～16；CSSM029、SEQ ID NO:17～18；CSSM022、SEQ ID NO:19～20；CSSM043、SEQ ID NO:21～22；UMN0929、SEQ ID NO:23～24；TGLA126、SEQ ID NO:25～26；ETH225、SEQ ID NO:27～28；CSSM041、SEQ ID NO:29～30；CSSM013、SEQ ID NO:31～32；TGLA227、SEQ ID NO:33～34；FJ232023、SEQ ID NO:35～36；ILSTS030、SEQ ID NO:37～38；FJ232022、SEQ ID NO:39～
40；CSSM032、SEQ ID NO:41～42。
[0008]优选的，所述特异性引物在扩增体系中的终浓度为：CSSM019、0.4μM；BM2113、0.2μM；CSSM047、0.2μM；CSSM038、0.32μM；SPS113、0.4μM；CSRM060、0.6μM；CSSM057、0.4μM；CSSM033、0.6μM；CSSM029、0.2μM；CSSM022、0.2μM；CSSM043、0.4μM；UMN0929、0.4μM；TGLA126、0.4μM；ETH225、0.2μM；CSSM041、0.8μM；CSSM013、0.8μM；TGLA227、0.2μM；FJ232023、0.2μM；ILSTS030、0.6μM；FJ232022、0.6μM；CSSM032、0.6μM。
[0009]表1.21个STR基因座的引物信息
[0010][0011][0012]优选的，所述特异性引物分为四组：CSSM019、BM2113、CSSM047、CSSM038、SPS113、CSRM060为第一组，CSSM057、CSSM033、CSSM029、CSSM022、CSSM043、UMN0929为第二组，TGLA126、ETH225、CSSM041、CSSM013为第三组，TGLA227、FJ232023、ILSTS030、FJ232022、CSSM032为第四组；每对引物中至少一条采用荧光染料标记其5
’
端。
[0013]优选的，所述荧光染料为：6-FAM、HEX、TAMRA、ROX中任意一种，且每组采用的荧光标记不同；所述试剂盒包括分子内标，且分子内标由橙色荧光SIZ标记。
[0014]优选的，所述试剂盒包括特异性复合扩增引物、反应混合液、21个基因座位点的等
位基因、热启动Taq酶、DNA标准品、sdH2O和荧光分子量内标；其中反应混合液的组成为：MgCl
2 7.5mM,Tris-HCl 125mM，KCl 125mM，dNTPs 7.5mM，BSA2g/L。各组分及其含量见表2：
[0015]表2.PCR扩增体系
[0016]组分体积Reaction Mix10.0μL基因组DNAXμl含量为0.125-5ng引物混合物5.0μL热启动Taq酶(5U/μL)0.5μLsdH2O补足至25.0μL
[0017]以上任一所述水牛21个STR位点的荧光标记复合扩增试剂盒在水牛亲权鉴定或个体识别中的应用。
[0018]优选的，水牛亲权鉴定或个体识别中采用的样品来源包括利用Chelex法、磁珠提取法或有机抽提法提取的水牛基因组DNA。
[0019]所述试剂盒的应用步骤为：收集基因组DNA，进行PCR扩增，分析扩增产物；具体为：A、按照表2的组分配制扩增体系
[0020]B、扩增热循环
[0021](l)将PCR扩增管置于热循环仪上；
[0022](2)选择表3推荐的程序进行扩增；
[0023](3)扩增后的样品应避光保存；
[0024]表3热循环仪的扩增程序
[0025][0026]C、扩增产物在遗传分析仪上荧光检测
[0027]由去离子甲酰胺与系统中本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.水牛21个STR位点的荧光标记复合扩增试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括扩增21个水牛STR位点的特异性引物，其中STR位点为：CSSM019、BM2113、CSSM047、CSSM038、SPS113、CSRM060、CSSM057、CSSM033、CSSM029、CSSM022、CSSM043、UMN0929、TGLA126、ETH225、CSSM041、CSSM013、TGLA227、FJ232023、ILSTS030、FJ232022、CSSM032。2.根据权利要求1所述的水牛21个STR位点的荧光标记复合扩增试剂盒，其特征在于，所述特异性引物序列如下：CSSM019、SEQ ID NO:1～2；BM2113、SEQ ID NO:3～4；CSSM047、SEQ ID NO:5～6；CSSM038、SEQ ID NO:7～8；SPS113、SEQ ID NO:9～10；CSRM060、SEQ ID NO:11～12；CSSM057、SEQ ID NO:13～14；CSSM033、SEQ ID NO:15～16；CSSM029、SEQ ID NO:17～18；CSSM022、SEQ ID NO:19～20；CSSM043、SEQ ID NO:21～22；UMN0929、SEQ ID NO:23～24；TGLA126、SEQ ID NO:25～26；ETH225、SEQ ID NO:27～28；CSSM041、SEQ ID NO:29～30；CSSM013、SEQ ID NO:31～32；TGLA227、SEQ ID NO:33～34；FJ232023、SEQ ID NO:35～36；ILSTS030、SEQ ID NO:37～38；FJ232022、SEQ ID NO:39～40；CSSM032、SEQ ID NO:41～42。3.根据权利要求1所述的水牛21个STR位点的荧光标记复合扩增试剂盒，其特征在于，所述特异性引物在扩增体系中的终浓度为：CSSM019、0.4μM；BM2113、0.2μM；CSSM047、0.2μM；CSSM038、0.32μM；SPS113、0.4μM；CSRM060、0.6μM；CSSM057、0.4μM；CS...

【专利技术属性】
技术研发人员：史明皓，张雷，梅兴林，王皋，陈林丽，夏子芳，郑卫国，
申请(专利权)人：无锡中德美联生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：