锂诊断/测定试剂盒及锂浓度测定方法技术

本发明专利技术涉及一种利用能被锂抑制活性的酶比色法及酶联法技术的锂诊断／测定试剂盒，同时本发明专利技术还涉及测定锂浓度的方法原理、试剂的组成及成分，属于医学／工业／环境检验测定技术领域。本发明专利技术的试剂盒主要成分包括：缓冲液、还原型辅酶、氯化镁、肌醇－１－磷酸、草酰乙酸、肌醇－１－磷酸酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、甲酸脱氢酶及稳定剂；通过分别将对照及锂样品与试剂按一定的体积比混合，使之发生一系列的酶促反应，再将反应物置于紫外／可见光分析仪下，检测主波长３４０ｎｍ处吸光度下降的程度／速度，比较对照及锂样品吸光度下降的程度／速度的差别，从而测算出锂的浓度大小。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种锂诊断/测定试剂盒，同时本专利技术还涉及测定锂浓度的方法，属于医学/工业/环境检验测定

技术介绍
20世纪40年代，Cade首次用锂盐治疗躁狂症成功，总有效率约7()0%，锂盐对躁狂和抑郁的复发有预防作用，也用于治疗分裂情感性精神病。另外，锂盐可使双相障碍维持治疗阶段的自杀行为减少86%，而当停用锂盐后，自杀危险性会增加7.5倍。当血锂浓度达到或超过1.5mmol/L,会出现不同程度的中毒症状，血锂浓度3.0mmo1 / L以上可危及生命。近几年，临床实验室多数方法学都有了新的发展，但锂的测定方法基本维持火焰原子发射法、火焰原子吸收法及离子选择电极法。原子吸收的方法是将稀释的标本吸入乙炔火焰中，利用空心阴极元素灯光源发出被测元素的特征辐射光，为火焰原子化器产生的样品蒸汽中的待测元素基态原子所吸ifc锂在波长670.8 nm处的被吸光的特征辐射光的大小与标本中的锂浓度成正比。但目前国内的临床实验室没有统一的实验方法和实验操作规程，也很难在精神病医院的实验室中查找到其使用情况。自然界中无游离锂，因此实际指锂离子或锂盐，而碳酸锂是最重要的锂化物。碳酸锂被用于陶瓷釉料的生产、特种玻璃、铝的熔炼和钢铁铸造粉末。氢氧化锂和氯化锂应用在润滑剂、空调和干燥系统中。丁基锂、锂金属、特种无机物和特种有机物，被用于制药、合成橡胶等领域。锂是一种稀有金属，锂电池就以它为主要原料，航空航天工业也离不开锂。金属锂与锂合金在核能发电、轻质高比强合金、轻金属焊接等诸多领域都有着广阔的开发利用前景。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提出一种利用酶比色法(EnzymaticColorimetric Method)及酶(偶)联法(Couple Reaction)技术，监测还原型烟酰胺辅酶(还原型辅酶)在340nm波长处吸光度的变化，得以测定锂浓度的方法，同时，本专利技术还将给出用以实现该方法的锂诊断/测定试剂盒，采用该试剂不仅可以在紫外/可见光分析仪或半、全自动生化分析仪上进行锂浓度测定，而且测定速度快、准确度高，因而可以得到切实的推广应用。本专利技术锂浓度测定方法原理如下肌醇-l-磷酸+水肌醇-1-磷酸酶/1^2+/0+肌醇+磷酸根磷酸根+草酰乙酸磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶二氧化碳+磷酸烯醇式丙酮酸+水二氧化碳+还原型辅酶 甲酸脱氢酶 甲酸+辅酶这种方法应用能被锂抑制活性的肌醇-l-磷酸酶(inositol-l-phosphase; EC3丄3.25)酶(偶)联磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(phosphoenolpyruvatecarboxylase; EC 4.1.1.31)、甲酸脱氢酶(Formate dehydrogenase; EC 1.2.1.2;EC 1.2丄43)酶促反应连续监测法/速率比色法。肌醇-l-磷酸酶(需要镁离子激活其活性，锂离子能抑制镁离子的激活作用)酶解肌醇-l-磷酸反应产生磷酸根，再通过(偶)联合磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、甲酸脱氢酶的作用，最终将还原型辅酶(在340nm处有吸收峰)氧化成为辅酶(在340nm处没有吸收峰)，从而得以测定还原型辅酶在340nm处吸光度下降的程度/速度，比较对照及锂样品吸光度下降的程度/速度的差别，可以测算锂的浓度大小。实验表明，从测定结果的准确性和配制成本的经济性两方面综合考虑，无论是单剂、双剂还是三剂，如下成分关系的本专利技术锂诊断/测定试剂盒较为缓冲液稳定剂还原型辅酶肌醇-l-磷酸酶磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶甲酸脱氢酶氯化镁肌醇-l-磷酸草酰乙酸氯化镁可以用其它镁盐取代；如硫酸镁等,100 mmol/L500 mmol/L0.25 mmol/L10000U/L10000U/L10000U/L0.6 mmol/L8 mmol/L12 mmol/L本专利技术的锂诊断/测定试剂盒可以是单剂，包括缓冲液、稳定剂、还原型辅酶、氯化镁、肌醇-l-磷酸酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、甲酸脱氢酶、肌醇-l-磷酸、草酰乙酸。试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。也可以将上述单剂试剂配成如下双剂试剂试剂1缓冲液、稳定剂、还原型辅酶、氯化镁、肌醇-l-磷酸、草酰乙酸。试剂2缓冲液、稳定剂、肌醇-l-磷酸酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、甲酸脱氢酶。还原型辅酶、氯化镁、肌醇-l-磷酸酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、甲酸脱氢酶、肌醇-l-磷酸、草酰乙酸在试剂1或试剂2中的位置可以不限。试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。还可以将上述单剂试剂配成如下三剂试剂试剂1缓冲液、稳定剂、还原型辅酶、氯化镁、肌醇-l-磷酸、草酰乙酸。试剂2缓冲液、稳定剂、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、甲酸脱氢酶。试剂3缓冲液、稳定剂、肌醇-l-磷酸酶。还原型辅酶、氯化镁、肌醇-l-磷酸酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、甲酸脱氢酶、肌醇-l-磷酸、草酰乙酸在试剂l、试剂2或试剂3中的位置可以不限。试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。无论是单剂、双剂还是三剂，本专利技术测定锂浓度的方法，其还原型辅酶可以是NADPH、 NADH或thio- NADH中的一种。具体实施例方式下面结合实施例子对本专利技术作进一步的说明。实施例一本实施例的锂诊断/测定试剂为单试剂，包括三(羧甲基)氨基甲烷一盐酸缓冲液100 mmol/L稳定剂还原型辅酶肌醇-l-磷酸酶磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶甲酸脱氢酶氯化镁肌醇-l-磷酸500 mmol/L0.25 mmol/L10000U/L10000 U/L10000U/L0.6 mmol/L8 mmol/L草酰乙酸 12mmol/L试剂全部溶解配好后，分装入瓶，进行冷冻干燥，制成干粉试剂；使用前，加入纯净水，复溶后使用。在全自动生化分析仪上设定温度37'C，反应时间10分钟，起始吸光度1.8±0.7，测试主波长340nm，测试副波长405nm，被测对照及锂样品与试剂的体积比例为1/25，反应方向为负反应(下降反应)，延迟时间大约1分钟左右，检测时间5分钟左右。分别加入对照及样品和试剂后，使之混合并发生反应，最终将反应物置于生化分析仪下，检测主波长340nm吸光度下降的程度/速度，比较对照及锂样品吸光度下降的程度/速度的差别，从而测算出锂的浓度大小。实施例二本实施例的锂诊断/测定试剂为双试剂，包括试剂1三(羧甲基)氨基甲烷一盐酸缓冲液100mmol/L稳定剂50 mmol/L还原型辅酶氯化镁 肌醇-l-磷酸草酰乙酸0.25 mmol/L0.6 mmol/L8 mmol/L12 mmol/L试剂2三(羧甲基)氨基甲烷一盐酸缓冲液 稳定剂肌醇-l-磷酸酶磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶 甲酸脱氢酶100 mmol/L 500 mmol/L 10000U/L 10000U/L 10000U/L试剂全部溶解配好后，分装入瓶，制成液体双试剂，可以直接使用。 在全自动生化分析仪上设定温度37'C，反应时间10分钟，起始吸光度 1.8±0.7，测试主波长340nm，测试副波长405nm，被测对照及锂样品与试 剂l、试剂2的体积比例为2/20/5，反应方向为负反应(下降反应)，延迟时 间大约l分钟左右，检测时间5分钟左右。分别加入对照及样品和试剂后，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用能被锂抑制活性的酶比色法及酶联法技术的锂浓度测定方法，其方法原理如下：　肌醇－１－磷酸＋水　肌醇－１－磷酸酶／Ｍｇ↑［２＋］／Ｌｉ↑［＋］　肌醇＋磷酸根　磷酸根＋草酰乙酸　磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶　二氧化碳＋磷酸烯 醇式丙酮酸＋水　二氧化碳＋还原型辅酶　甲酸脱氢酶　甲酸＋辅酶　将最终反应物置于紫外／可见光分析仪或半、全自动生化分析仪下，检测主波长３４０ｎｍ吸光度下降的程度／速度，比较对照及锂样品吸光度下降的程度／速度的差别，测算出锂的浓 度大小测定结果。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王尔中，
申请(专利权)人：苏州艾杰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]