HCG周期检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种HCG周期检测试剂盒，包括上盖和卡壳，卡壳内设有两个平行设置的凹槽，其中一个凹槽中安装有T1检测试纸，另一个凹槽中安装有T2检测试纸；其制备方法的步骤包括：硝酸纤维素膜的制备；胶体金垫的标记及固相；组装及裁切。本发明专利技术应用双抗体夹心法及免疫层析法的原理定性检测孕龄妇女尿液中的人绒毛膜促性腺激素（hCG），检测步骤较为简单，5分钟内就可以观察到结果，一般使用者可以自己进行检测，检测结果较为精确。本发明专利技术通过第一检测线和第二检测线颜色深浅，从而可估算怀孕周数，推测受孕时间。

【技术实现步骤摘要】
HCG周期检测试剂盒及其制备方法
本专利技术属于医学检验试剂领域，涉及一种HCG周期检测试剂盒的制备方法。
技术介绍
在早孕期间，怀孕天数是从上一次月经结束后的第一天开始算起，这种计算方法较为不精确；一般的早孕检测试纸是采用双抗体夹心一步法进行检测的，以胶体金为指示标记，检测尿液中HCG浓度，只能用以判断是否怀孕，而不能检测出怀孕时间。人绒毛膜促性腺激素(humanchorionicgonadotropin,hCG)是妊娠期期间由胎盘滋养层细胞分泌生产的一种糖蛋白激素，由两个不同的亚基，α、β以非共价键连接组成。在激素的产生、分泌、代谢等过程中，hCG分子会发现断裂、离解等多种变化，从而在血、尿中以多种分子形式存在。HCG是唯一不随胎盘重量增加而分泌增多的胎盘激素，妊娠1周后血液HCG为5-50mmIU/ml，尿液HCG＞25mIU/ml，第8-10周左右达到高峰，持续1-2周后迅速减低，以后逐渐下降并以1/5-1/10左右峰值水平维持至分娩。目前，通过抽血检验、超声检测、HCG检测与超声检测结合的方法来检测怀孕天数，但是这些方法需要专业人员经过较长时间的检测才能得到检测结果，操作较为复杂。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服以上的不足，提供一种检测方便、检测速度快、检测效率高的的HCG周期检测试剂盒及其制备方法。本专利技术的目的通过以下技术方案来实现：一种HCG周期检测试剂盒，包括上盖和卡壳，卡壳内设有两个平行设置的凹槽，其中一个凹槽中安装有T1检测试纸，另一个凹槽中安装有T2检测试纸；T1检测试纸包括第一塑料基片，第一塑料基片上设有第一上样垫和第一吸水垫，第一上样垫和第一吸水垫上均设有第一保护膜，第一上样垫和第一吸水垫之间下方设有第一硝酸纤维素膜，第一上样垫的连接端设有固相化胶体金T1线，固相化胶体金T1线的一端与第一硝酸纤维素膜的一端搭接在一起，第一硝酸纤维素膜上依次包被有第一检测线和第一质控线，固相化胶体金T1线为抗β-HCG单克隆抗体；第一检测线包被抗α-HCG单克隆抗体和第一质控线包被抗鼠IgG多克隆抗体；T2检测试纸包括第二塑料基片，第二塑料基片上设有第二上样垫和第二吸水垫，第二上样垫和第二吸水垫上均设有第二保护膜，第二上样垫和第二吸水垫之间下方设有第二硝酸纤维素膜，第二上样垫的连接端设有固相化胶体金T2线，固相化胶体金T2线的一端与第二硝酸纤维素膜的一端搭接在一起，第二硝酸纤维素膜上依次包被有第二检测线和第二质控线，固相化胶体金T2线为抗β-HCG单克隆抗体+游离β抗体；第二检测线包被抗α-HCG单克隆抗体和第二质控线包被抗鼠IgG多克隆抗体；一种HCG周期检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：A、硝酸纤维素膜的制备：a、选择3um～10um孔径的硝酸纤维素膜，根据需要将膜分切成宽度为大于等于2.0cm,长度为30.5cm的规格备；b、用0.1M磷酸盐缓冲液配制供测线包被使用的抗α-HCG单克隆抗体1.3mg/ml及用质量百分含量0.85%的氯化钠缓冲液配制质控线包被使用的抗鼠IgG多克隆抗体2.0mg/ml；c、选择硝酸纤维素膜的抗体包被面并作标记，将需包被的检测线和质控线平行均匀的包被在膜片上，且检测线与质控线的间距控制在距离0.5cm，硝酸纤维素膜在4℃～35℃的恒温条件下干燥备用；d、配置封闭处理浸泡液，向配液罐加入实际生产量的纯化水；用电子分析天平称量0.1Mol缓冲液、质量百分含量0.5%的糖份、质量百分含量1%的封闭蛋白、质量百分含量0.05％的防腐剂，直接加入到配液罐中搅拌，搅拌直至完全溶解，加纯化水定容至所需体积，充分搅拌均匀，搅拌时间不少于10分钟，备用；e、将包被膜放于处理槽中，加入配好的温度在36℃0.01M的PBS缓冲液，确保每条膜完全浸没在0.01M的PBS缓冲液中5分钟，并保证膜不移动、不重叠，5分钟后将膜从处理槽中取出，将0.01M的PBS缓冲液倒掉；再将第一次用0.01M的PBS缓冲液浸泡过5分钟的膜放入处理槽中，加入配好的0.01M的PBS缓冲液，确保每条膜完全浸没在0.01M的PBS缓冲液中30分钟，并保证膜不移动、不重叠，30分钟后将膜从处理槽中取出，将0.01M的PBS缓冲液倒掉；然后将用0.01M的PBS缓冲液浸泡过两次的膜放于处理槽中，用配好的封闭处理浸泡液浸泡，确保每条膜完全浸没在处理液中15分钟，并保证膜不移动、不重叠，15分钟后将膜从处理槽中取出，用镊子将每框的膜重新拉一边，确保膜没有移到框子外面和没有膜重贴后，再将框子和膜放入处理液中继续浸泡20分钟，20分钟后将膜从处理槽中取出，用镊子将膜拉在纱布上晾稍干；f、贴板干燥：撕去胶板双面胶上切割线中间的白纸，用镊子将膜正好放在胶板中央空白位置并使切角在右上方，且胶板右边与膜右边平齐，避免在生产过程中的误差，确保显色位置相对准确，贴板时全部顶C线一头贴，膜贴在胶板上后，隔着双面胶纸抹平膜面，避免有气泡，控制室内的温度18～28℃、相对湿度≤40％，并保证干燥间空气能循环流通且除湿机风不会直接吹到膜面上。干燥时间≥4小时，后备用；B、聚酯纤维条的标记及固相：a、胶体金复溶液的配制：向配液罐加入实际生产量的纯化水；用电子分析天平称量质量百分含量5%的海藻糖、质量百分含量2%的牛血清白蛋白、质量百分含量0.5%的柠檬酸三钠、质量百分含量0.05%的聚乙二醇、质量百分含量0.05％的NaN3，直接加入到配液罐中搅拌，搅拌直至完全溶解，加纯化水定容至所需体积，充分搅拌均匀，搅拌时间大于30分钟，备用；b、用量筒量取需要标记量的胶体金，按PH6.5-7.0进行调节，即加入体积百分含量0.53%的0.2mol/L的碳酸钾溶液，于磁力搅拌器上搅拌15分钟后，取抗β-HCG单克隆抗体按5ug/ml标记胶体金体积体积百分含量5%的双蒸水中稀释并混合均匀，加入胶体金中，于磁力搅拌器上搅拌30分钟后加入体积百分含量0.5‰稳定剂后搅拌30分钟后离心，收集沉淀，用胶体金复溶液按体积百分含量3%复溶，于磁力搅拌器上搅拌至混合均匀，备用；c、取上述b体积百分含量3%复溶的胶体金，用胶体金复溶液按体积百分含量40%复溶，于磁力搅拌器上混合均匀，将混合均匀的胶体金溶液按照50μl/cm2进行浇制在准备好的胶体金吸附垫上，置于干燥室晾干≥4个小时，干燥室控制温度18-28℃，相对湿度≤40%，保证空气畅通且气流不能直接吹于胶体金吸附垫上，将干燥好的标记金放入到装有干燥剂的铝箔袋中，密封保存，做好标记为T1线，备用；注：胶体金为浇制，是因为浇制的胶体金可以自由的裁切宽度，从而方便调节产品的深浅显色。d、用量筒量取需要标记量的胶体金，按PH6.5-7.0进行调节，即加入体积百分含量0.53%0.2mol/L的碳酸钾溶液，于磁力搅拌器上搅拌15分钟后，取抗β-HCG单克隆抗体按5ug/ml标记胶体金，用体积百分含量5%的双蒸水稀释并混合均匀，加入胶体金中，于磁力搅拌器上搅拌30分钟后加入体积百分含量0.5‰稳定剂后搅拌30分钟后离心，收集沉淀，用胶体金复溶液按体积百分含量3%复溶，于磁力搅拌器上搅拌至混合均匀，备用；e、取上述d体积百分含量3%复溶的胶体金，用胶体金复溶液按体积百分含量40%复溶，再按抗体标记量1:10加入游离本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种HCG周期检测试剂盒，其特征在于：包括上盖（3）和卡壳（4），所述卡壳（4）内设有两个平行设置的凹槽，其中一个所述凹槽中安装有T1检测试纸（1），另一个所述凹槽中安装有T2检测试纸（2）；所述T1检测线试（1）包括第一塑料基片（1‑1），所述第一塑料基片（1‑1）上设有第一上样垫（1‑2）和第一吸水垫（1‑3），所述第一上样垫（1‑2）和所述第一吸水垫（1‑3）上均设有第一保护膜（1‑4），所述第一上样垫（1‑2）和所述第一吸水垫（1‑3）之间下方设有第一硝酸纤维素膜（1‑5），所述第一上样垫（1‑2）的连接端设有固相化胶体金T1线（1‑6），所述固相化胶体金T1线（1‑6）的一端与所述第一硝酸纤维素膜（1‑5）的一端搭接在一起，所述第一硝酸纤维素膜（1‑5）上依次包被有第一检测线（T1）和第一质控线（C1），所述固相化胶体金T1线（1‑6）为抗β‑HCG单克隆抗体；第一检测线（T1）包被抗α‑HCG单克隆抗体和第一质控线（C1）包被抗鼠IgG多克隆抗体；所述T2检测线试（2）包括第二塑料基片（2‑1），所述第二塑料基片（2‑1）上设有第二上样垫（2‑2）和第二吸水垫（2‑3），所述第二上样垫（2‑2）和所述第二吸水垫（2‑3）上均设有第二保护膜（2‑4），所述第二上样垫（2‑2）和所述第二吸水垫（2‑3）之间下方设有第二硝酸纤维素膜（2‑5），所述第二上样垫（2‑2）的连接端设有固相化胶体金T2线（2‑6），所述固相化胶体金T2线（2‑6）的一端与所述第二硝酸纤维素膜（2‑5）的一端搭接在一起，所述第二硝酸纤维素膜（2‑5）上依次包被有第二检测线（T2）和第二质控线（C2），所述固相化胶体金T2线（2‑6）为抗β‑HCG单克隆抗体+游离β抗体；第二检测线（T2）包被抗α‑HCG单克隆抗体和第二质控线（C2）包被抗鼠IgG多克隆抗体；一种HCG周期检测试剂盒的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：A、硝酸纤维素膜的制备：a、选择3um～10um孔径的硝酸纤维素膜，根据需要将膜分切成宽度为大于等于2.0cm,长度为30.5cm的规格备；b、用0.1M磷酸盐缓冲液配制供测线包被使用的抗α‑HCG单克隆抗体1.3mg/ml及用质量百分含量0.85%的氯化钠缓冲液配制质控线包被使用的抗鼠IgG多克隆抗体2.0mg/ml；c、选择硝酸纤维素膜的抗体包被面并作标记，将需包被的检测线和质控线平行均匀的包被在膜片上，且检测线与质控线的间距控制在距离0.5cm，硝酸纤维素膜在4℃～35℃的恒温条件下干燥备用；d、配置封闭处理浸泡液，向配液罐加入实际生产量的纯化水；用电子分析天平称量0.1Mol缓冲液、质量百分含量0.5%的糖份、质量百分含量1%的封闭蛋白、质量百分含量0.05％的防腐剂，直接加入到配液罐中搅拌，搅拌直至完全溶解，加纯化水定容至所需体积，充分搅拌均匀，搅拌时间不少于10分钟，备用；e、将包被膜放于处理槽中，加入配好的温度在36℃0.01M的PBS缓冲液，确保每条膜完全浸没在0.01M的PBS缓冲液中5分钟，并保证膜不移动、不重叠，5分钟后将膜从处理槽中取出，将0.01M的PBS缓冲液倒掉；再将第一次用0.01M的PBS缓冲液浸泡过5分钟的膜放入处理槽中，加入配好的0.01M的PBS缓冲液，确保每条膜完全浸没在0.01M的PBS缓冲液中30分钟，并保证膜不移动、不重叠，30分钟后将膜从处理槽中取出，将0.01M的PBS缓冲液倒掉；然后将用0.01M的PBS缓冲液浸泡过两次的膜放于处理槽中，用配好的封闭处理浸泡液浸泡，确保每条膜完全浸没在处理液中15分钟，并保证膜不移动、不重叠，15分钟后将膜从处理槽中取出，用镊子将每框的膜重新拉一边，确保膜没有移到框子外面和没有膜重贴后，再将框子和膜放入处理液中继续浸泡20分钟，20分钟后将膜从处理槽中取出，用镊子将膜拉在纱布上晾稍干；f、贴板干燥：撕去胶板双面胶上切割线中间的白纸，用镊子将膜正好放在胶板中央空白位置并使切角在右上方，且胶板右边与膜右边平齐，避免在生产过程中的误差，确保显色位置相对准确，贴板时全部顶C线一头贴，膜贴在胶板上后，隔着双面胶纸抹平膜面，避免有气泡，控制室内的温度18～28℃、相对湿度≤40％，并保证干燥间空气能循环流通且除湿机风不会直接吹到膜面上。...

【技术特征摘要】
1.一种HCG周期检测试剂盒，其特征在于：包括上盖（3）和卡壳（4），所述卡壳（4）内设有两个平行设置的凹槽，其中一个所述凹槽中安装有T1检测试纸（1），另一个所述凹槽中安装有T2检测试纸（2）；所述T1检测线试（1）包括第一塑料基片（1-1），所述第一塑料基片（1-1）上设有第一上样垫（1-2）和第一吸水垫（1-3），所述第一上样垫（1-2）和所述第一吸水垫（1-3）上均设有第一保护膜（1-4），所述第一上样垫（1-2）和所述第一吸水垫（1-3）之间下方设有第一硝酸纤维素膜（1-5），所述第一上样垫（1-2）的连接端设有固相化胶体金T1线（1-6），所述固相化胶体金T1线（1-6）的一端与所述第一硝酸纤维素膜（1-5）的一端搭接在一起，所述第一硝酸纤维素膜（1-5）上依次包被有第一检测线（T1）和第一质控线（C1），所述固相化胶体金T1线（1-6）为抗β-HCG单克隆抗体；第一检测线（T1）包被抗α-HCG单克隆抗体和第一质控线（C1）包被抗鼠IgG多克隆抗体；所述T2检测线试（2）包括第二塑料基片（2-1），所述第二塑料基片（2-1）上设有第二上样垫（2-2）和第二吸水垫（2-3），所述第二上样垫（2-2）和所述第二吸水垫（2-3）上均设有第二保护膜（2-4），所述第二上样垫（2-2）和所述第二吸水垫（2-3）之间下方设有第二硝酸纤维素膜（2-5），所述第二上样垫（2-2）的连接端设有固相化胶体金T2线（2-6），所述固相化胶体金T2线（2-6）的一端与所述第二硝酸纤维素膜（2-5）的一端搭接在一起，所述第二硝酸纤维素膜（2-5）上依次包被有第二检测线（T2）和第二质控线（C2），所述固相化胶体金T2线（2-6）为抗β-HCG单克隆抗体+游离β抗体；第二检测线（T2）包被抗α-HCG单克隆抗体和第二质控线（C2）包被抗鼠IgG多克隆抗体；一种HCG周期检测试剂盒的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：A、硝酸纤维素膜的制备：a、选择3um～10um孔径的硝酸纤维素膜，根据需要将膜分切成宽度为大于等于2.0cm,长度为30.5cm的规格备；b、用0.1M磷酸盐缓冲液配制供测线包被使用的抗α-HCG单克隆抗体1.3mg/ml及用质量百分含量0.85%的氯化钠缓冲液配制质控线包被使用的抗鼠IgG多克隆抗体2.0mg/ml；c、选择硝酸纤维素膜的抗体包被面并作标记，将需包被的检测线和质控线平行均匀的包被在膜片上，且检测线与质控线的间距控制在距离0.5cm，硝酸纤维素膜在4℃～35℃的恒温条件下干燥备用；d、配置封闭处理浸泡液，向配液罐加入实际生产量的纯化水；用电子分析天平称量0.1Mol缓冲液、质量百分含量0.5%的糖份、质量百分含量1%的封闭蛋白、质量百分含量0.05％的防腐剂，直接加入到配液罐中搅拌，搅拌直至完全溶解，加纯化水定容至所需体积，充分搅拌均匀，搅拌时间不少于10分钟，备用；e、将包被膜放于处理槽中，加入配好的温度在36℃0.01M的PBS缓冲液，确保每条膜完全浸没在0.01M的PBS缓冲液中5分钟，并保证膜不移动、不重叠，5分钟后将膜从处理槽中取出，将0.01M的PBS缓冲液倒掉；再将第一次用0.01M的PBS缓冲液浸泡过5分钟的膜放入处理槽中，加入配好的0.01M的PBS缓冲液，确保每条膜完全浸没在0.01M的PBS缓冲液中30分钟，并保证膜不移动、不重叠，30分钟后将膜从处理槽中取出，将0.01M的PBS缓冲液倒掉；然后将用0.01M的PBS缓冲液浸泡过两次的膜放于处理槽中，用配好的封闭处理浸泡液浸泡，确保每条膜完全浸没在处理液中15分钟，并保证膜不移动、不重叠，15分钟后将膜从处理槽中取出，用镊子将每框的膜重新拉一边，确保膜没有移到框子外面和没有膜重贴后，再将框子和膜放入处理液中继续浸泡20分钟，20分钟后将膜从处理槽中取出，用镊子将膜拉在纱布上晾稍干；f、贴板干燥：撕去胶板双面胶上切割线中间的白纸，用镊子将膜正好放在胶板中央空白位置并使切角在右上方，且胶板右边与膜右边平齐，避免在生产过程中的误差，确保显色位置相对准确，贴板时全部顶C线一头贴，膜贴在胶板上后，隔着双面胶纸抹平膜面，避免有气泡，控制室内的温度18～28℃、相对湿度≤40％，并保证干燥间空气能循环流通且除湿机风不会直接吹到膜面上。2.干燥时间≥4小时，后备用；B...

【专利技术属性】
技术研发人员：欧卫军，孙一品，邵志燕，徐秋楠，
申请(专利权)人：南通伊仕生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32