一种优选胱抑素C检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种胱抑素C检测试剂盒及其制备方法，所述试剂盒包括彼此独立的试剂R1和试剂R2，所述试剂R1主要由缓冲液1、无机盐离子1、稳定剂1、防腐剂1、增溶剂1和加速剂1组成；所述试剂R2主要由交联胱抑素C抗体的聚苯乙烯微球、缓冲液2、稳定剂2、增溶剂2、防腐剂2和保护剂2组成，所述聚苯乙烯微球与胱抑素C抗体通过物理吸附或者化学交联连接，并被β‑环糊精包合。本发明专利技术胱抑素C检测试剂盒具有制备成本低廉，稳定性良好，易于贮存，数据准确性好和检测灵敏度高的优点，可广泛应用于临床生化仪。

【技术实现步骤摘要】
一种优选胱抑素C检测试剂盒及其制备方法
本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种优选胱抑素C检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
肾脏疾病是临床上一种常见的疾病，迄今为止，早诊断、早治疗以及逆转损伤的肾功能是唯一能阻止肾脏疾病恶化的途径。临床评价肾脏疾病进展和严重程度一般以肾功能为参考，以肾小球滤过率(GFR)作为反映肾功能最重要的指标。胱抑素C，是一种半胱氨酸蛋白酶抑制剂，也被称为γ-微量蛋白或γ-后球蛋白，且是一种低分子量、碱性非糖化蛋白质，其分子量为13.3KD，由122个氨基酸残基组成，可由机体所有有核细胞产生，产生率恒定。循环中的胱抑素C仅经肾小球滤过而被清除，为反映肾小球滤过率变化的内源性标志物，并在近曲小管重吸收，但重吸收后被完全代谢分解，不返回血液。因此，可以通过血液中胱抑素C的浓度来反映肾小球的过滤速率。而且，胱抑素C血清浓度不受敏症过程、性别、年龄和肌肉重量影响，是反映肾小球滤过率变化的理想同源性标志物，并逐步发展为评估肾功能的一项敏感性好、特异性高的指标。目前，临床上主要依托免疫学方法完成胱抑素C的检测，借助抗原抗体的特异性结合，以双抗夹心的方式定量检测血清中胱抑素C的含量。具体的检测方法又包括：酶联免疫吸附测定法、化学发光法和免疫比浊法。前面两种方法由于操作繁琐、耗时长以及费用高等不足，严重限制其应用。随着全自动生化仪的普及和多种快速免疫比浊检测技术的发展，免疫比浊法兼具反应时间短，精密度好，检测范围宽，黄疸、溶血和脂血标本影响小，易于自动化等优势，已成为临床胱抑素C的主流检测方法。但是，由于免疫比浊法的检测原理缺乏酶促放大反应，导致现有的胱抑素C免疫比浊检测试剂盒不可避免的出现灵敏度较低等不足。同时，在试剂盒制备过程中，为保证产品达到所需灵敏度，较酶联免疫吸附测定法和化学发光法，免疫比浊法对所用抗体的质量要求更高，包被量和抗体使用量更大，也造成试剂盒成本的增加。且目前广泛使用在高分子胶乳微球的表面交联单克隆抗体，当交联有抗体的微球与抗原结合后，在短时间内会迅速聚集在一起，改变了反应液的散光性能或透光性能。现有胱抑素C检测试剂盒的制备也存在着操作复杂、耗时长，对操作者专业技能限制的以及无法保证产品稳定性和准确性的缺憾。
技术实现思路
本专利技术的目的就在于针对上述现有技术的不足，提供一种优选胱抑素C检测试剂盒，该试剂盒与现有胱抑素C检测试剂盒相比，能进一步提高胱抑素C检测的稳定性和准确性，且成本更低。本专利技术的另一目的是提供上述优选胱抑素C检测试剂盒的制备方法，该方法操作简单，易于推广使用。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：一种优选胱抑素C检测试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2，所述试剂R1主要由缓冲液1、无机盐离子1、稳定剂1、防腐剂1、增溶剂1和加速剂1组成；所述试剂R2主要由交联胱抑素C抗体的聚苯乙烯微球、缓冲液2、稳定剂2、增溶剂2、防腐剂2和保护剂2组成，且保护剂2为β-环糊精；所述聚苯乙烯微球与胱抑素C抗体通过物理吸附连接或者聚苯乙烯微球表面氨基、羧基、酰肼或者环氧基与胱抑素C抗体表面氨基共价偶联，并被β-环糊精(保护剂2)包合，聚苯乙烯微球粒径为100nm。本技术方案中的防腐剂1和2是指可以抑制试剂中细菌和微生物污染的一类试剂，对试剂具有防腐杀菌的作用。试剂R2中的保护剂2是一类能够保护胶乳颗粒表面的抗体的试剂。无机盐离子1可以保持试剂R1内的电荷平衡。本技术方案中的优选胱抑素C检测试剂盒，将胱抑素C抗体交联在聚苯乙烯微球表面，并被β-环糊精包合，当血液中的胱抑素C与胱抑素C抗体反应时，带动聚苯乙烯微球聚集产生一定浊度，而浊度与血液中的胱抑素C含量在一定范围成正比，可以用全自动生化仪在400-800nm波长下检测血液中胱抑素C的含量。优选地，上述优选胱抑素C检测试剂盒的组成如下：试剂R1，其组分为：试剂R2，其组分为：进一步优选地，上述优选胱抑素C检测试剂盒的具体组成如下：试剂R1，其组分为：试剂R2，其组分为：优选地，所述试剂R1中的缓冲液1选自Hepes缓冲液、Tris-HCl缓冲液、MOPS缓冲液、磷酸盐缓冲液、硼砂缓冲液中的任意一种或多种的组合，其pH为7.0～9.0；所述试剂R2中的缓冲液2选自磷酸盐缓冲液、硼砂缓冲液、Hepes缓冲液、Tris-HCl缓冲液、MOPS缓冲液中任意一种或多种的组合，其pH为7.0～9.0。优选地，所述试剂R1中的稳定剂1选自牛血清白蛋白、甘露糖、山梨醇、乙二胺四乙酸二钠、果糖中的一种或多种的组合；所述试剂R2中的稳定剂2选自牛血清白蛋白、甘露糖、山梨醇、乙二胺四乙酸二钠、果糖中的一种或多种的组合。优选地，所述试剂R1中的无机盐离子1选自氯化钾、氯化钠、氯化钙中的任意一种或多种的组合，具有价格低廉、原料易得的优点。优选地，所述试剂R1中的防腐剂1为叠氮钠、硫柳汞或者ProClin300；所述试剂R2中的防腐剂2为叠氮钠、硫柳汞或ProClin300。防腐剂1和2具有优良的防腐杀菌性能。优选地，所述试剂R1中的加速剂1为聚乙二醇-2000、聚乙二醇-6000、聚乙二醇-8000、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或多种的组合。优选地，所述试剂R1和试剂R2中的增溶剂1均为吐温20。还包括胱抑素C试剂的校准品，校准品为胱抑素C含量为0.1mg/L，0.5mg/L，1.0mg/L，2.0mg/L，4.0mg/L和8.0mg/L的六个梯度标准品，溶液为牛血清白蛋白10g/L、吐温200.3mmol/L、叠氮钠10mmol/L、磷酸盐缓冲液10mmol/L的缓冲液。如上述优选胱抑素C检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：(1)、试剂R1的制备：配制缓冲液1：磷酸盐缓冲液5～15mmol/L；在缓冲液1中加入牛血清白蛋白5～15g/L、吐温200.1～0.3mmol/L、聚乙二醇2.0～5.0mmol/L、氯化钠0.08～0.16mol/L、叠氮钠5～15mmol/L，搅拌混合均匀，即得试剂R1；(2)、试剂R2的制备：步骤一：将胱抑素C抗体进行4℃透析，再用磷酸盐缓冲液将胱抑素C抗体稀释至0.05～5mg/ml，得到胱抑素C抗体稀释液；将聚苯乙烯微球用纯化水离心、洗涤3次；步骤二：用磷酸盐缓冲液将经过步骤一洗涤后的聚苯乙烯微球稀释到质量浓度为0.1％～3％，再加入质量浓度为0.1～0.5％β-环糊精，在室温下搅拌反应30min，反应结束后15000rpm离心洗涤以除去未反应的β-环糊精，然后加入步骤一得到的胱抑素C抗体稀释液，室温下搅拌反应30min，再加入终止液终止反应，将得到的反应液15000rpm离心，用磷酸盐缓冲液洗涤沉淀，重复离心洗涤3次，最后加入磷酸盐缓冲液5～15mmol/L、牛血清白蛋白5～15g/L、吐温200.1～0.5mmol/L、叠氮钠5～15mmol/L搅拌混合均匀即得试剂R2；(3)、校准品的制备：按照需要的胱抑素C含量为0.1mg/L，0.5mg/L，1.0mg/L，2.0mg/L，4.0mg/L和8.0mg/L的六个梯度标准品，将相应的胱抑素C标准品分别加入含牛血清白蛋白10g/L、吐温200.3mmol/L、叠氮钠10mmol/L、磷酸盐缓冲液10mmol/L缓冲液中。优选地，上述优选胱抑素C检测试剂本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种优选胱抑素C检测试剂盒，其特征在于：包括彼此独立的试剂R1和试剂R2，所述试剂R1主要由缓冲液1、无机盐离子1、稳定剂1、防腐剂1、增溶剂1和加速剂1组成；所述试剂R2主要由交联胱抑素C抗体的聚苯乙烯微球、缓冲液2、稳定剂2、增溶剂2、防腐剂2和保护剂2组成，其中保护剂2为β‑环糊精；所述聚苯乙烯微球与胱抑素C抗体通过物理吸附连接或者聚苯乙烯微球表面氨基、羧基、酰肼或者环氧基与胱抑素C抗体表面氨基共价偶联，并被β‑环糊精包合，聚苯乙烯微球粒径为100nm。

【技术特征摘要】
1.一种优选胱抑素C检测试剂盒，其特征在于：包括彼此独立的试剂R1和试剂R2，所述试剂R1主要由缓冲液1、无机盐离子1、稳定剂1、防腐剂1、增溶剂1和加速剂1组成；所述试剂R2主要由交联胱抑素C抗体的聚苯乙烯微球、缓冲液2、稳定剂2、增溶剂2、防腐剂2和保护剂2组成，其中保护剂2为β-环糊精；所述聚苯乙烯微球与胱抑素C抗体通过物理吸附连接或者聚苯乙烯微球表面氨基、羧基、酰肼或者环氧基与胱抑素C抗体表面氨基共价偶联，并被β-环糊精包合，聚苯乙烯微球粒径为100nm。2.根据权利要求1所述的一种优选胱抑素C检测试剂盒，其特征在于，组成如下：试剂R1，其组分为：试剂R2，其组分为：3.根据权利要求2所述的一种优选胱抑素C检测试剂盒，其特征在于，具体组成如下：试剂R1，其组分为：试剂R2，其组分为：4.根据权利要求1所述的一种优选胱抑素C检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R1中的缓冲液1为Hepes缓冲液、Tris-HCl缓冲液、MOPS缓冲液、磷酸盐缓冲液、硼砂缓冲液中的任意一种或多种的组合，其pH为7.0～9.0；所述试剂R2中的缓冲液2为磷酸盐缓冲液、硼砂缓冲液、Hepes缓冲液、Tris-HCl缓冲液、MOPS缓冲液中任意一种或多种的组合，其pH为7.0～9.0。5.根据权利要求1所述的一种优选胱抑素C检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R1中的稳定剂1为牛血清白蛋白、甘露糖、山梨醇、乙二胺四乙酸二钠、果糖中的一种或多种的组合；所述试剂R2中的稳定剂2为牛血清白蛋白、甘露糖、山梨醇、乙二胺四乙酸二钠、果糖中的一种或多种的组合。6.根据权利要求1所述的一种优选胱抑素C检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R1中的防腐剂1为叠氮钠、硫柳汞或者ProClin300；所述试剂R2中的防腐剂2为叠氮钠、硫柳汞或ProClin300。7.根据权利要求1所述的一种优选胱抑素C检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R1中的无机盐离子1为KCl、NaCl、CaCl2、中的任意一种或多种的组合；所述试剂R1中的加速剂1为聚乙二醇-2000、聚乙二醇-6000、聚乙二醇-8000、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或多种的组合；所述试剂R1和试剂R2中的增溶剂1均为吐温20。8.根据权利要求1所述的一种优选胱抑素C检测试剂盒，其特征在于：还包括胱抑素C试剂的校准品，校准品为胱抑素C含量为0.1mg/L，0.5mg/L，1.0mg/L，2.0mg/L，4.0mg/L和8.0mg/L的六个梯度标准品，溶液为牛血清白蛋白10g/L、吐温200.3mmol/L、叠氮钠10mmol/L、磷酸盐缓冲液10mmol/L的缓冲液。9.如权利要求2所述的一种优选胱抑素C检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)、试剂R1的制备：配制缓冲液1：磷酸盐缓冲液5～15mmol/L；在缓冲液1中加入牛血清白蛋白5～15g/L、吐温200.1～0.3mmol/L、聚乙二醇2.0～...

【专利技术属性】
技术研发人员：张海悦，孙景春，闫小娟，魏滢，王姝，韩永双，韩峰，刘玉娟，
申请(专利权)人：吉林省富生医疗器械有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林,22