基于蛋白标志物PSG3辅助诊断肝癌或消化道癌症患者的试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种基于蛋白质标记物PSG3辅助诊断癌症，尤其是肝癌与结肠癌的试剂盒。本发明专利技术要求保护用于检测蛋白质PSG3的产品在制备用于诊断肝癌与结肠癌的试剂盒中的应用。在本发明专利技术中，发明专利技术人首次在肝癌和结肠癌患者外周血中发现了蛋白标记物PSG3的存在，并发现肝癌和结肠癌患者外周血中蛋白标记物PSG3的浓度高于健康者，即蛋白标记物PSG3具有辅助诊断肝癌和结肠癌患者的价值。本发明专利技术对肝癌和结肠癌的辅助诊断具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
基于蛋白标志物PSG3辅助诊断肝癌或消化道癌症患者的试剂盒
本专利技术涉及一种蛋白标志物PSG3在辅助诊断肝癌或消化道患者中的应用，以及制备相应的检测试剂盒中的应用。
技术介绍
原发性肝癌是全球第6位、中国第3位最常见的癌症。据国际癌症研究中心(IARC)估计，2000年全球肝癌发病数为56.4万人，其中约55％发生在中国，即中国肝癌发病30.6万人，肝癌死亡30.0万，占我国居民肿瘤死亡的第二位。肝癌出现症状时多属中晚期，切除后复发、转移率高。因此，肝癌的早期诊断对延长患者的生存时间和降低肝癌死亡率具有重要意义。目前，影像学诊断、细胞与组织学诊断及化学诊断是肿瘤诊断的三大主要方法。影像学诊断在肝癌诊断中起重要的作用，但是在诊断小肝癌及区分良恶性结节中均具有一定的局限。超声检查或CT阳性结果，结合血清甲胎蛋白(α-fetoprotein，AFP)水平高于400ng/ml的检测结果，可对肝癌做出确诊。但是，通常当这些条件都符合时，已经错过了治疗的最佳时机。无论是超声波检查、CT扫描还是核磁共振，对小病灶的鉴定都有一定的局限性，尤其是肝硬化结节在影象学上与小肝癌结节有许多的相似之处。因此，虽然影像学技术取得了巨大的进步，但临床上仍需结合肝癌的分子标志物，在较为复杂的病例中将良恶性肝病进行区分。此外，肿瘤的临床分期及肿瘤大小是肝癌治疗效果的决定因素，因此，肿瘤标志物还可用于肝癌危险人群(如HBV慢性携带者和肝硬化患者)的普查。目前肝癌诊断最常用的标志物是甲胎蛋白(AFP)，在症状和影像学改变发生前数月即可出现异常。正常人血清中AFP含量一般小于10ng/ml。当AFP的诊断值定为20ng/ml时，其敏感性为50～60％，但在肿瘤较小的病例中，敏感性显著降低，有报道仅为40％。单独使用AFP作为肝癌诊断标志物的另一个问题是缺乏特异性，在相当多的慢性肝炎患者尤其是肝硬化患者中，AFP含量也达20-200ng/ml。目前认为可与AFP互补诊断的标志物有AFP异质体、γ-谷氨酰转移酶同工酶II和异常凝血酶原等，但由于它们在敏感性和特异性上的不足，以及检测方法的繁琐复杂，使其始终停留在实验室研究水平，未能转化成临床常规检查项目。因此，探索新的肿瘤分子标志物，以及建立相应的易于推广的检测方法，仍是当今肝癌研究领域的重要课题之一。同样，消化道肿瘤在我国也是导致死亡的主要病因之一。其中的结直肠癌起病隐匿，早期常无明显的临床症状，而且病情发展较慢，病人出现明显症状时大多已经到了中晚期。目前，结肠的治疗主要是以手术为主，但结肠癌转移后的化疗效果差，术后约有40％的患者出现复发，且晚期患者术后生存率较低。尽管有许多学者已经做了大量的关于结肠癌分子水平的研究，但是目前仍然缺乏有效地早期诊断结肠癌的分子标志物。肿瘤标志物可以有效地作为临床诊断依据，可以监测高危人群、早期诊断、指导治疗、判断治疗疗效、检测复发及转移，是肿瘤患者的重要检查指标、具有重要的临床意义。结肠癌的发生前期会有一段时间的癌前病变，如结肠息肉，因此在早期发现并阻断或延迟癌症的发展，有极其重要的意义。因此，寻找发现有价值的肿瘤标志物对于提高消化道肿瘤、尤其是结直肠癌的诊断和预测发生、发展及改善预后具有重要的临床指导意义。人类血液中包含丰富的各种细胞成分和分子物质，能很好地反映机体不同组织和器官的生理、病理状态，且其标本容易获得，因此，是一种理想的肿瘤无创诊断手段。因此，仍有待开发敏感性和特异性良好的标志物。妊娠特异蛋白3(Humanpregnancyspecificbeta-1-glycoprotein3，PSG3)，是一种分泌到细胞外的糖蛋白。PSG家族中共包含11个蛋白，包括PSG1、PSG2、PSG3等。PSG蛋白一般都包括N端同免疫球蛋白可变区类似的结构，随后是2-3个免疫球蛋白恒定区C2样结构域，以及一个短的疏水尾，位于C端。PSG根据其结构组成可分为4类，I型(N-A1-A2-B2-C)、IIa型(N-A1-B2-C)和IIb型(N-A2-B2-C)、III型(N-B2-C)、IV型(A1-B2-C)。目前PSG家族的作用机制尚不清楚，在正常情况下，胎盘的合胞体滋养层细胞中大量表达，在妊娠期女性外周血中PSG蛋白含量升高，可达200-400μg/ml。关于PSG家族在癌症中的研究鲜有报道。PSG3蛋白长度428个氨基酸，分子量47,945Da，蛋白的氨基酸序列如下(SEQIDNO：1)：MGPLSAPPCTQRITWKGLLLTALLLNFWNLPTTAQVTIEAEPTKVSKGKDVLLLVHNLPQNLAGYIWYKGQMKDLYHYITSYVVDGQIIIYGPAYSGRETVYSNASLLIQNVTREDAGSYTLHIVKRGDGTRGETGHFTFTLYLETPKPSISSSNLYPREDMEAVSLTCDPETPDASYLWWMNGQSLPMTHSLQLSKNKRTLFLFGVTKYTAGPYECEIRNPVSASRSDPVTLNLLPKLPKPYITINNLNPRENKDVLAFTCEPKSENYTYIWWLNGQSLPVSPRVKRPIENRILILPSVTRNETGPYQCEIQDRYGGIRSYPVTLNVLYGPDLPRIYPSFTYYHSGENLYLSCFADSNPPAEYSWTINGKFQLSGQKLFIPQITTKHSGLYACSVRNSATGMESSKSMTVKVSAPSGTGHLPGLNPL有关PSGs在肿瘤中的研究报道较少。Salahshor等应用差异基因表达谱分析发现结直肠癌、肝转移癌、子宫肿瘤组织中均可检测到异常升高的PSG9转录本，与正常结直肠粘膜相比，PSG9在腺瘤中上调2倍，且结直肠癌PSG9表达异常上调呈APC突变依赖性(Salahshoretal,2005)。KamarliZP等的研究表明，PSG1在骨恶性肿瘤患者血清中蛋白浓度升高(Kamarlietal,2004)。而关于PSG3在肿瘤中的研究还未见报道。
技术实现思路
本专利技术第一方面涉及检测PSG3蛋白的分子在制备用于辅助诊断癌症，尤其是肝癌或消化道癌症患者的试剂盒或检测试剂中的用途。根据本专利技术第一方面任一项的用途，其中所述检测PSG3蛋白的分子是指能够特异性检测PSG3蛋白表达的分子，例如可以为核酸、蛋白质或化合物。根据本专利技术第一方面任一项的用途，其中所述蛋白质为抗体，其能够与PSG3蛋白特异性结合，优选为单克隆抗体。在本专利技术的实施方案中，所述检测PSG3蛋白的分子为单克隆抗体，其能够与PSG3蛋白特异性结合。在本专利技术的具体实施方案中，采用免疫化学的方法检测PSG3蛋白。根据本专利技术第一方面任一项的用途，其中所述的肝癌为肝细胞肝癌。根据本专利技术第一方面任一项的用途，其中所述的消化道癌症为结直肠癌。根据本专利技术第一方面任一项的用途，所述试剂盒或检测试剂用于血浆样品的检测。根据本专利技术第一方面任一项的用途，其中所述辅助诊断的判断方法为，血浆中PSG3的含量高于551.65μg/ml，则待检者为候选的肝细胞肝癌或结直肠癌患者。根据本专利技术第一方面任一项的用途，其中所述检测PSG3蛋白的分子还带有可检测的标记。根据本专利技术第一方面任一项的用途，其中所述试剂盒或检本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于检测蛋白标志物PSG3的产品在制备用于辅助诊断癌症患者的试剂盒中的应用。

【技术特征摘要】
1.用于检测蛋白标志物PSG3的产品在制备用于辅助诊断癌症患者的试剂盒中的应用。2.权利要求1的应用，其中所述癌症为肝癌或消化道癌症。3.用于辅助诊断癌症患者的试剂盒或检测试剂，其中含有检测蛋白标记物PSG3的产品。4.权利要求3的试剂盒或检测试剂，其中所述癌症为肝癌或消化道癌症。5.权利要求2的应用或权利要求4的试剂盒或检测试剂，其中所述肝癌为肝细胞癌，所述的消化道癌症为结直肠癌。6.前述任一项权利要求所述的应用或试剂盒或检测试剂，所述试剂盒或检测试剂用于血浆样品的检测，优选地，所述检测方...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖汀，程书钧，陈实平，高燕宁，张开泰，冯林，郭宏林，
申请(专利权)人：中国医学科学院肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：北京,11