一种检测牙周病相关蛋白的抗体芯片试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及生物检测技术领域，具体地，涉及一种检测牙周病相关蛋白的抗体芯片试剂盒。该试剂盒的抗体芯片以含有烷基糖苷的亲水试剂处理的玻片作为固相载体，且多种牙周病相关蛋白的特异性抗体混合物在22～24℃、30～40%的湿度条件下点样到固相载体上。本发明专利技术的试剂盒能够检测多个临床常用的牙周病相关蛋白，克服了现有技术操作繁琐、检测指标单一、灵敏度低等缺陷，具有廉价、便利、灵敏、准确、高通量、标本用量少、能在普通实验室推广和规模化等优点。

Antibody chip reagent kit for detecting periodontal disease related protein

The invention relates to the technical field of biological detection, in particular to an antibody chip reagent kit for detecting periodontal disease related proteins. The antibody chip kit containing alkyl polyglycoside hydrophilic reagent processing slide as solid carrier, and a variety of periodontal disease related protein specific antibody mixture at 22 to 24 DEG C, 30 ~ 40% humidity sample to a solid carrier. The kit of the invention can detect a common clinical periodontal disease related protein, overcomes the complex operation, low sensitivity, single index detection of defects, which is cheap, convenient, sensitive and accurate, high throughput and less amount of sample and the advantages in common laboratory promotion and scale etc..

【技术实现步骤摘要】
一种检测牙周病相关蛋白的抗体芯片试剂盒
本专利技术涉及生物检测
，具体地，涉及一种检测牙周病相关蛋白的抗体芯片试剂盒。
技术介绍
牙周病是指发生在牙支持组织(牙周组织)的疾病，包括仅累及牙龈组织的牙龈病和波及深层牙周组织(牙周膜、牙槽骨、牙骨质)的牙周炎两大类。牙周疾病是常见的口腔疾病，是引起成年人牙齿丧失的主要原因之一，也是危害人类牙齿和全身健康的主要口腔疾病。牙周病的早期症状不易引起重视，造成牙周组织长期慢性感染，炎症反复发作，不仅损害口腔咀嚼系统的功能，还会严重影响健康。牙周病是从简单的牙龈发炎到软组组和牙齿骨组织损害的疾病，在最坏的情况下会导致牙齿的脱落。因此牙周炎的早期诊断和预防至关重要。目前包括牙周袋探诊，牙菌斑和X光片影像学诊断在内的临床检测可作为牙周病症状的指标，但这些检测不能指示疾病的发展情况。因此有必要开发一种新的检测方法反映疾病的状况，有效地预防和监测疾病的发生。龈沟液(GCF)是指通过沟内上皮和结合上皮从牙龈结缔组织渗入到龈沟内的液体。牙龈健康者有极少量龈沟液，由组织内的渗透梯度而使组织液渗入龈沟内。因为龈沟液中通常有炎症细胞，其他化学成分与组织液也不完全相同；龈沟液的流出量与该部位的炎症程度成正比。龈沟液的液体成分主要来源于血清，其他成分则分别来自血清、邻近的牙周组织及细菌。龈沟液包括各种电解质、蛋白质、葡萄糖、酶等，也含有白细胞、脱落的上皮细胞等，还有细菌及其他微生物。龈沟液中含有多种酶，其中天冬氨酸转氨酶、碱性磷酸酶、胶原酶等与牙周病的严重程度和活动期有一定关系。龈沟液量增多是牙龈炎早期的主要表现之一，常早于临床表征的改变。牙龈炎症明显时，龈沟液明显增多。龈沟液可以通过无创手段如试纸条进行采集检测，因此龈沟液中的蛋白可作为理想的标志物用于疾病的检测。牙周病相关蛋白包括炎症细胞因子(例如IL-1β，IL-6，IL-8，IL-10，IL-12，IFNG，TNFa和CRP)，骨代谢相关的细胞因子(例如，OPG，OPN，RANK，RANKL和)和酶(例如碱性磷酸酶和天冬氨酸转氨酶)。检测牙周病的常用方法包括通过测量牙周袋的探诊深度、诊察附着在牙槽骨上的牙齿的X光照片并参考探诊出血。上述方法各有优缺点，在实际应用中，根据各自的实验目的和实验室条件进行选择。这些方法严重依赖于牙科医生的主观鉴定。探诊深度仅仅是对过去的附着丧失的测量，其在现在发生的牙周炎或其未来的发展中帮助很小。探诊出血能够表明复原过程而不是破坏过程。最近，虽然也开发了许多评估牙周病活动性的方法。然而，上述方法中没有一种提供了足够灵敏和特异的试验以诊断牙周炎及其破坏模式。非特异性方法的一个结果是几个实际没有患牙周炎的患者将被治疗。临床观察例如探诊深度不够可靠，因为深的牙周袋不是必然包含正在发生的炎症，X光线照相术评估必须结合详细的临床观察以给出正确的诊断，仅仅是在牙周袋中存在病原菌不能准确地反映疾病活动性。而且迄今为止开发的基于检测宿主或细菌来源蛋白质的酶学方法的诊断还不够特异的，因为免疫学检测法比较简单，迅速，重复性好，但假阳性率高，每次只能检测一个相关蛋白。有鉴于此，有必要开发一种新型的牙周病相关蛋白检测试剂盒，以克服现有技术中亟待解决的问题，实现多种目标蛋白的高通量、高灵敏度、高特异性和低成本检测。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种检测牙周病相关蛋白的抗体芯片试剂盒，该试剂盒能同时检测多个牙周病相关蛋白，克服了现有技术操作繁琐、检测指标单一、灵敏度低等缺陷，具有廉价、便利、灵敏、准确、高通量、标本用量少、能在普通实验室推广和规模化等优点。。为了实现上述目的，本专利技术是通过以下技术方案予以实现的：一种检测牙周病相关蛋白的抗体芯片试剂盒，包括抗体芯片，牙周病相关蛋白标准品混合物，生物素标记的牙周病相关蛋白检测抗体混合物；和荧光素Cy3标记的链霉亲和素；其中，所述抗体芯片以含有烷基糖苷的亲水试剂处理的玻片作为固相载体，且多种牙周病相关蛋白的特异性抗体混合物在22～24℃、30～40％的湿度条件下点样到固相载体上。以没有空间限制的标准组织玻片作为载体，可使点在同一微阵列上检测细胞粘附因子的数目不受空间的限制，另外，玻片具有非常低的自身荧光，而且荧光信号不具扩散性，不同点间的荧光信号不会彼此干扰，所以一次可以同时检测多个细胞粘附因子。但是，以不同的方法来处理标准组织玻片，会影响玻片的背景、检测灵敏度，本专利技术通过比较多种处理玻片的方法，发现以亲水试剂烷基糖苷处理的玻片背景低，检测灵敏度高，实现了不仅一次可以检测十几个细胞粘附因子，并且所检测的细胞粘附因子灵敏度可达单因子的ELISA检测灵敏度。优选地，所述牙周病相关蛋白检测抗体混合物为C反应蛋白、干扰素γ、白细胞介素-1α、白细胞介素-1β、白细胞介素-2、白细胞介素-4、白细胞介素-6、白细胞介素-8、白细胞介素-10、白细胞介素-12、白细胞介素-17、巨噬细胞炎性蛋白-1α、基质金属蛋白酶9、基质金属蛋白酶13、骨保护素、骨桥蛋白、骨活素、肿瘤坏死相关蛋白、肿瘤坏死因子β1、肿瘤坏死因子α的特异性抗体的混合物。更优选地，所述亲水试剂为质量分数为0.01～0.2％的烷基糖苷、0.01～0.1％的甘油，0.01～0.05％的聚乙二醇4000的超纯水溶液；亲水试剂处理玻片的方法为将玻片在亲水试剂中浸泡3～5分钟，晾干即可。最优选地，所述亲水试剂为质量分数为0.1％的烷基糖苷、0.05％的甘油，0.01％的聚乙二醇4000的超纯水溶液；亲水试剂处理玻片的方法为将玻片在亲水试剂中浸泡3分钟，晾干即可。优选地，所述牙周病相关蛋白检测抗体混合物在22℃、30％的湿度条件下点样到固相载体上。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：以不同的方法来处理标准组织玻片，会影响玻片的背景、检测灵敏度，本专利技术通过比较多种处理玻片的方法，发现以含有烷基糖苷的亲水试剂处理的玻片背景低，检测灵敏度高，实现了不仅一次可以检测十几个牙周病相关蛋白，并且所检测的牙周病相关蛋白的灵敏度可达单个蛋白的ELISA检测灵敏度。本专利技术的抗体芯片试剂盒克服了现有技术操作繁琐、检测指标单一、灵敏度低等缺陷，具有廉价、便利、灵敏、准确、高通量、标本用量少、能在普通实验室推广和规模化等优点。本专利技术的抗体芯片试剂盒尤其适用于C反应蛋白、干扰素γ、白细胞介素-1α、白细胞介素-1β、白细胞介素-2、白细胞介素-4、白细胞介素-6、白细胞介素-8、白细胞介素-10、白细胞介素-12、白细胞介素-17、巨噬细胞炎性蛋白-1α、基质金属蛋白酶9、基质金属蛋白酶13、骨保护素、骨桥蛋白、骨活素、肿瘤坏死相关蛋白、肿瘤坏死因子β1、肿瘤坏死因子α，这20种牙周病相关蛋白的特异性抗体的组合方式。因为，不同的牙周病相关蛋白的特异性抗体在本专利技术所述芯片检测系统中的灵敏性是不同的，所以，如果将一些低灵敏性的牙周病相关蛋白抗体与一些高灵敏性的牙周病相关蛋白抗体组合，会造成低灵敏性的牙周病相关蛋白的漏检。附图说明图1为抗体芯片点阵图。图2为牙周病相关蛋白的标准曲线图。具体实施方式下面结合说明书附图和具体实施例对本专利技术作出进一步地详细阐述，所述实施例只用于解释本专利技术，并非用于限定本专利技术的范围。下述实施例中所使用的试验本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测多种牙周病相关蛋白的抗体芯片试剂盒，包括抗体芯片，牙周病相关蛋白标准品混合物，生物素标记的牙周病相关蛋白检测抗体混合物；和荧光素Cy3标记的链霉亲和素；其特征在于，所述抗体芯片以含有烷基糖苷的亲水试剂处理的玻片作为固相载体，且多种牙周病相关蛋白的特异性抗体混合物在22～24℃、30～40%的湿度条件下点样到固相载体上。

【技术特征摘要】
1.一种检测多种牙周病相关蛋白的抗体芯片试剂盒，包括抗体芯片，牙周病相关蛋白标准品混合物，生物素标记的牙周病相关蛋白检测抗体混合物；和荧光素Cy3标记的链霉亲和素；其特征在于，所述抗体芯片以含有烷基糖苷的亲水试剂处理的玻片作为固相载体，且多种牙周病相关蛋白的特异性抗体混合物在22～24℃、30～40%的湿度条件下点样到固相载体上。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述牙周病相关蛋白检测抗体混合物为C反应蛋白、干扰素γ、白细胞介素-1α、白细胞介素-1β、白细胞介素-2、白细胞介素-4、白细胞介素-6、白细胞介素-8、白细胞介素-10、白细胞介素-12、白细胞介素-17、巨噬细胞炎性蛋白-1α、基质金属蛋白酶9、基质金属蛋白酶13、骨保护素、骨桥...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄若磐，毛应清，
申请(专利权)人：广州瑞博奥生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44