用于结核潜伏感染诊断的试剂盒及蛋白芯片制造技术

本发明专利技术提供了一种用于结核潜伏感染诊断的试剂盒及蛋白芯片，通过检测白细胞介素‑6、肿瘤坏死因子受体II、表皮调节素和干扰素诱导蛋白10这四种蛋白的表达水平，能够将结核潜伏感染者和健康人群区分开来，并具有较高的灵敏度和特异性。将这四种蛋白对应的特异性抗体固定于基片上，制备成蛋白芯片，能够同时检测四种蛋白的表达水平，而且具有样本需求量低、简单、快捷的优点。在结核潜伏感染的分子生物学研究和临床检测中的应用，有利于结核潜伏感染的早期诊断，能够更准确的发现结核潜伏感染者。

Diagnostic kit and protein chip for latent infection of tuberculosis

The invention provides a kit and a protein chip for the diagnosis of latent infection of tuberculosis. By detecting the expression levels of four proteins, i.e. interleukin-6, tumor necrosis factor receptor II, epidermal regulator and interferon induced protein 10, it can distinguish the latent infection of tuberculosis from the healthy population, and has high sensitivity and specificity. The specific antibodies corresponding to these four proteins were fixed on the substrate to prepare protein chip, which can detect the expression level of the four proteins at the same time, and has the advantages of low sample demand, simple and fast. The application in the study of molecular biology and clinical detection of latent infection of tuberculosis is conducive to the early diagnosis of latent infection of tuberculosis and the more accurate detection of latent infection of tuberculosis.

【技术实现步骤摘要】
用于结核潜伏感染诊断的试剂盒及蛋白芯片
本专利技术属于生物医学
，特别涉及一种用于结核潜伏感染诊断的试剂盒及蛋白芯片。
技术介绍
结核病是继艾滋病之后由单一病原体引起的死亡人数最多的传染病，造成结核病疫情严重主要的原因之一是缺乏有效的早期诊断技术。结核菌感染后并不是全部人都会发病，一部分人群会转归为潜伏感染状态，即结核潜伏感染者。这部分人群在体内持续存在结核菌，但由于机体免疫力对结核菌的控制，并没有临床表现。当机体免疫力下降后，潜伏在机体内的结核菌就会“死灰复燃”，在体内结核菌会再复制，最后转变为结核病人。潜伏感染者一生中有10％的机会转变为结核病人。在中国约四分之一的人口感染了结核菌，如果能对这部分人群进行观察或者干预，能大大的降低结核病的发生。但是目前结核感染还缺乏特异性的诊断方法，临床上有抗体和细胞免疫检测，细胞免疫检查包括PPD皮试和IGRA技术。PPD皮试比较简便，但是与BCG有交叉反应，假阳性率比较高，特别是在中国广泛接种卡介苗(BCG)的情况下，其使用效率明显受限。IGRA技术检测的是结核特异性IFNg的表达，虽然特异性明显提高，但是目前该方法相对比较费事和费时，价格都相对较贵，严重的限制了临床上的推广和使用。因此，有必要提供一种高灵敏度、高特异性的用于结核潜伏感染者诊断的方法和产品。
技术实现思路
基于此，本专利技术的目的在于提供一种高灵敏度、高特异性的用于结核潜伏感染者诊断的试剂盒。为实现上述目的，本专利技术具体技术方案如下：检测白细胞介素-6、肿瘤坏死因子受体II、表皮调节素和干扰素诱导蛋白10的试剂在制备用于结核潜伏感染诊断的试剂盒中的应用。一种用于结核潜伏感染诊断的试剂盒，包含有能够定量检测白细胞介素-6、肿瘤坏死因子受体II、表皮调节素和干扰素诱导蛋白10的试剂。本专利技术还提供一种用于结核潜伏感染诊断的蛋白芯片，具体技术方案如下：一种用于结核潜伏感染诊断的蛋白芯片，包含有：基片和固定在所述基片上的捕获抗体；所述捕获抗体包括：针对白细胞介素-6的特异性抗体、针对肿瘤坏死因子受体II的特异性抗体、针对表皮调节素的特异性抗体和针对干扰素诱导蛋白10的特异性抗体；所述基片为包被有活性环氧基团的基片。本专利技术还提供了一种用于结核潜伏感染诊断的蛋白芯片的制备方法，具体技术方案如下：一种用于结核潜伏感染诊断的蛋白芯片的制备方法，包括以下步骤：在蛋白芯片的基片上包被活性环氧基团；将捕获抗体固定于所述蛋白芯片的基片上；所述捕获抗体包括：针对白细胞介素-6的特异性抗体、针对肿瘤坏死因子受体II的特异性抗体、针对表皮调节素的特异性抗体和针对干扰素诱导蛋白10的特异性抗体。基于上述技术方案，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术的专利技术人发现，通过检测白细胞介素-6、肿瘤坏死因子受体II、表皮调节素和干扰素诱导蛋白10这四种蛋白的表达水平，能够将结核潜伏感染者和健康人群区分开来，并具有较高的灵敏度和特异性。将这四种蛋白对应的特异性抗体固定于基片上，制备成蛋白芯片，能够同时检测四种蛋白的表达水平，而且具有样本需求量低、简单、快捷的优点。在结核潜伏感染的分子生物学研究和临床检测中的应用，有利于结核潜伏感染的早期诊断，能够更准确的发现结核潜伏感染者。附图说明图1为蛋白芯片的点样区域分布示意图。具体实施方式为了便于理解本专利技术，下面将参照实施例对本专利技术进行更全面的描述，以下给出了本专利技术的较佳实施例。但是，本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。提供这些实施例的目的是使对本专利技术的公开内容的理解更加透彻全面。应理解，下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例中所用到的各种常用试剂，均为市售产品。除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。本专利技术的一种用于结核潜伏感染诊断的蛋白芯片，包含有：基片和固定在所述基片上的捕获抗体；所述捕获抗体包括：针对白细胞介素-6的特异性抗体、针对肿瘤坏死因子受体II的特异性抗体、针对表皮调节素的特异性抗体和针对干扰素诱导蛋白10的特异性抗体。可选地，所述蛋白芯片上还包含有阳性对照。优选地，所述阳性对照为固定在所述基片上的小牛IgG。优选地，所述阳性对照可以是不同浓度的小牛IgG。更优选的，所述小牛IgG为生物素标记的小牛IgG。优选地，所述基片为包被有活性环氧基团的基片。活性环氧基团包被的玻片可以更有效地吸附包被抗体在芯片的表面，并且使抗体的稳定性增加。优选地，所述基片上包括有若干个互不干扰的点样区域。更优选地，所述若干个互不干扰的点样区域由可拆卸型框架分离得到。点样前采用特定的框架结构，优化了芯片点阵，使得样本可批量检测，操作简便，样本用量小，互不交叉污染。进一步优选地，所述基板上包括有16～32个互不干扰的点样小区。如图1所示，每个点样小区内点样有针对白细胞介素-6的特异性抗体、针对肿瘤坏死因子受体II的特异性抗体、针对表皮调节素的特异性抗体和针对干扰素诱导蛋白10的特异性抗体和两种不同浓度的阳性对照小牛IgG。具体地，每种特异性抗体重复点样4次，两种不同浓度的阳性对照小牛IgG也重复点样4次。在其他一些实施方式中，重复点样的次数可以根据需要合理设定，例如重复点样3～10次。本专利技术的一种用于结核潜伏感染诊断的蛋白芯片的制备方法，包括以下步骤：将捕获抗体固定于蛋白芯片的基片上；所述捕获抗体包括：针对白细胞介素-6的特异性抗体、针对肿瘤坏死因子受体II的特异性抗体、针对表皮调节素的特异性抗体和针对干扰素诱导蛋白10的特异性抗体。优选地，所述捕获抗体固定于蛋白芯片的基片上包括以下步骤：将100-1000pl捕获抗体的溶液点样于所述基片上，室温下静置过夜后，真空干燥1-4小时；所述捕获抗体的溶液中含有0.02-20ng捕获抗体和0.01-10g/100ml的牛白蛋白。其中，室温的过夜静置有利于抗体更有效地固定在玻片上。优选地，真空干燥时间为1.5-2.5小时。更优选地，所述点样的条件为：温度70-75F、湿度40-45％。这样的点样条件下，可以改善点样的形态，使抗体在玻片上的分布更加均匀。进一步地，真空抽气干燥后，用抗水蒸气的塑料小袋抽气密封并于0-8℃保存。优选地，于(4±0.5)℃保存。用这种方法所保存的芯片使得抗体更有效地固定在芯片表面，并有效地增加芯片保存的稳定性。优选地，所述蛋白芯片的基片上包括有若干互不干扰的点样区域，由孔可拆卸型框架分隔得到。优选地，所述制备方法还包括：将阳性对照的捕获抗体本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.检测白细胞介素-6、肿瘤坏死因子受体II、表皮调节素和干扰素诱导蛋白10的试剂在制备结核潜伏感染诊断的试剂盒中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.检测白细胞介素-6、肿瘤坏死因子受体II、表皮调节素和干扰素诱导蛋白10的试剂在制备结核潜伏感染诊断的试剂盒中的应用。


2.一种用于结核潜伏感染诊断的试剂盒，其特征在于，包括能够定量检测白细胞介素-6、肿瘤坏死因子受体II、表皮调节素和干扰素诱导蛋白10的试剂。


3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，包括：
针对白细胞介素-6的特异性抗体、针对肿瘤坏死因子受体II的特异性抗体、针对表皮调节素的特异性抗体和针对干扰素诱导蛋白10的特异性抗体。


4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，包括：
针对白细胞介素-6的捕获抗体、针对肿瘤坏死因子受体II的捕获抗体、针对表皮调节素的捕获抗体、针对干扰素诱导蛋白10的捕获抗体；
针对白细胞介素-6的检测抗体、针对肿瘤坏死因子受体II的检测抗体、针对表皮调节素的检测抗体和针对干扰素诱导蛋白10的检测抗体；
其中，针对同一蛋白质的检测抗体与捕获抗体分别识别蛋白质的不同表位。


5.根据权利要求2-4任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：蛋白标准品和/或荧光素Cy3标记的链霉亲和素；
所述蛋白标准品为白细胞介素-6、肿瘤坏死因子受体II、表皮调节素和干扰素诱导蛋白10的混合物。


6....

【专利技术属性】
技术研发人员：黄若磐，杨倩婷，张明霞，陈骑，张惠华，易玉华，
申请(专利权)人：广州瑞博奥生物科技有限公司，深圳市第三人民医院，
类型：发明
国别省市：广东;44