检测人表面活性蛋白A的胶体金试纸条及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于医学检验领域，涉及一种检测人表面活性蛋白A的胶体金试纸条及其制备方法和应用。本发明专利技术的检测人表面活性蛋白A的胶体金试纸条，依次由吸水垫、硝酸纤维素膜、免疫胶体金垫、样品垫和聚氯乙烯底板构成；所述硝酸纤维素膜包有质控线C线和检测线T线，C线为二抗，T线为兔抗人表面活性蛋白A多克隆抗体Ⅱ；所述免疫胶体金垫为包被有胶体金标记的鼠抗人表面活性蛋白A单克隆抗体Ⅰ的玻璃纤维。本发明专利技术的胶体金试纸条能快速检测体液中人表面活性蛋白A，兼具灵敏性和特异性，操作简单，使用方便，用时短，能应用在新生儿呼吸窘迫综合征早期检测或诊断产品和检测其他体液中人表面活性蛋白A的产品中。

【技术实现步骤摘要】
检测人表面活性蛋白A的胶体金试纸条及其制备方法和应用
本专利技术属于医学检验领域，涉及一种检测人表面活性蛋白A的胶体金试纸条及其制备方法和应用。
技术介绍
新生儿呼吸窘迫综合征(NeonatalRespiratoryDistressSyndrome，NRDS)是一种因肺表面活性物质缺乏而导致的新生儿早期死亡的严重疾病，其病死率极高，主要见于早产儿。新生儿呼吸窘迫综合征的防治目标是尽早干预，尽可能提高存活率，同时最大程度减少潜在的不良反应。自肺表面活性物质(pulmonarysurfactant,PS)替代疗法问世以来，NRDS的病死率虽降至20％，但新生儿呼吸窘迫综合征仍是导致新生儿死亡的主要原因。虽然肺表面活性物质的应用能降低NDRS的发生率或及减少并发症发生，但预防性给药是必会很大程度上会造成肺表面活性物质的滥用，可能导致诸多不良反应。因此，在启动预防性给予肺表面活性物质之前快速的确诊是治愈新生儿呼吸窘迫综合征的关键。虽然X射线检查是判定新生儿呼吸窘迫综合征的金标准，但患儿大多在出生24小时后的胸片才表现出显著的X射线特征，但由于该病发展迅速，等待X射线的确诊将耽误新生儿呼吸窘迫综合征的治疗。因此，临床上常通过检测新生儿的肺成熟度来指导肺表面活性物质的预防性给药。通过羊水检测肺成熟度的方法有多种，比如泡沫稳定性法，卵磷脂/鞘磷脂比值法，PS/白蛋白比值法等。虽然综合上述方法可在一定程度预测新生儿的肺成熟度，但这些方法操作复杂、检测时间较长，并需要专门的仪器设备和专业的技术操作人员。而目前临床上尚无适于急救需要的简便、快捷而准确的预测新生儿呼吸窘迫综征的方法。胎儿肺成熟有赖于肺表面活性物质的存在，因此，通过测定羊水中肺表面活性物质的成分，可间接预测胎儿肺成熟度。肺表面活性物质中的活性成分除了磷脂外，尚有与之结合的4种表面活性蛋白(surfactantprotein，SP)，其中表面活性蛋白A(SPA)是含量最多的一种表面活性蛋白，其含量在一定程度上可以反映SP的浓度。目前，已有报道通过测定羊水、脐血、胃液中表面活性蛋白A含量可预测新生儿肺成熟度，其中检测羊水中SPA的方法的敏感度和特异度分别为88.2％和68.5％，且联合传统的泡沫稳定性法可实现100％的新生儿呼吸窘迫综征的诊断准确率。因此，羊水中表面活性蛋白A可作为一种特异性的肺成熟度标志物用于新生儿呼吸窘迫综征的早期筛查和辅助预测，而如何快速、特异性、高灵敏度的检测羊水中表面活性蛋白A的水平对于新生儿呼吸窘迫综征患者的诊断和治疗具有重要的临床意义，且具有广泛的临床应用前景和市场潜力。目前，SPA的检测方法主要是酶联免疫吸附测定(enzymelinkedimmunosorbentassay，ELASA)，由于该方法操作繁琐、耗时长，不适宜SPA的快速检测。胶体金试纸条是集单克隆抗体技术、胶体金免疫层析技术和新型层析材料为一体的一项新型体外诊断技术，该技术利用微孔膜的毛细管作用，使滴加在样品垫上的溶液缓慢经过金标垫和醋酸纤维素膜到达试纸条的另一端，待测物金标试剂复合物与之发生抗原抗体特异性结合而被截留，使得胶体金标记物聚集在检测带上，可通过目测得到直观的检测结果。胶体金试纸条具有简单、快速、灵敏、准确、可现场操作等优点，已被广泛应用于传染病、肿瘤、早孕等领域的体外检测。目前国内外尚无基于表面活性蛋白A检测的胶体金试纸条用于新生儿呼吸窘迫综合征的快速检测中，因此开发一种用于快速检测新生儿呼吸窘迫综合征的胶体金试纸条，具有重要的临床意义，可满足临床儿科和产科的迫切需求，有利于新生儿呼吸窘迫综合征的预防性给药，从而降低新生儿呼吸窘迫综合征的死亡率。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种检测人表面活性蛋白A的胶体金试纸条，该胶体金试纸条能快速检测体液中人表面活性蛋白A，兼具灵敏性和特异性，操作简单，使用方便，用时短，能应用在新生儿呼吸窘迫综合征早期检测或诊断产品中。为实现上述目的，本专利技术的技术方案为：检测人表面活性蛋白A的胶体金试纸条，依次由吸水垫、硝酸纤维素膜、免疫胶体金垫、样品垫和聚氯乙烯底板构成；所述硝酸纤维素膜包有质控线C线和检测线T线，C线为二抗，T线为兔抗人表面活性蛋白A多克隆抗体Ⅱ；所述免疫胶体金垫为包被有胶体金标记的鼠抗人表面活性蛋白A单克隆抗体Ⅰ的玻璃纤维。所述检测人表面活性蛋白A的胶体金试纸条在高度方向上的排布包括聚氯乙烯底板和反应试剂载体吸附层，所述反应试剂载体吸附层固定在所述聚氯乙烯底板上；从沾液端到手持端依次设有样品垫、免疫胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，在所述免疫胶体金垫和吸水垫上覆盖有保护膜层，在所述硝酸纤维素膜上包被有条状的检测线T线和条状的质控线C线，所述检测线T线和所述质控线C线均呈与胶体金试纸条长度方向垂直的条状。本专利技术的检测人表面活性蛋白A的胶体金试纸条通过双抗原夹心法，结合免疫胶体金技术快速检测羊水中的表面活性蛋白A，用于新生儿呼吸窘迫综合征的快速辅助检测，兼具灵敏性和特异性，操作简单，使用方便，用时短，可满足临床儿科和产科的迫切需求，有利于新生儿呼吸窘迫综合征的预防性给药，从而降低新生儿呼吸窘迫综合征的死亡率。所述胶体金试纸条的检测原理大体为：在样品垫滴加入待测样品后，通过毛细作用，待测样品将免疫胶体金垫中鼠抗人表面活性蛋白A单克隆抗体Ⅰ标记的胶体金溶解释放出来并向吸水垫一端的方向移动。如果被检测样品中含有人表面活性蛋白A，则其与胶体金上标记的鼠抗人表面活性蛋白A单克隆抗体Ⅰ发生特异性反应，生成胶体金-鼠抗人表面活性蛋白A单克隆抗体Ⅰ-人表面活性蛋白A复合物，当样品在硝酸纤维素膜上继续移动到T线时，其中人表面活性蛋白A和兔抗人表面活性蛋白A多克隆抗体Ⅱ发生特异性反应并被其捕获，形成胶体金-鼠抗人表面活性蛋白A单克隆抗体Ⅰ-人表面活性蛋白A-兔抗人表面活性蛋白A多克隆抗体Ⅱ复合物从而将胶体金固定在T线位置，在该检测线线由于胶体金的聚集而形成一条红色条带，样品继续移动到C线处时，多余的胶体金-鼠抗人表面活性蛋白A单克隆抗体Ⅰ-人表面活性蛋白A复合物会被羊抗鼠二抗(GAM)捕获，因而在C线处形成一条红色条带。C线显色证明该次测试的有效性，C线不显色则视为测试无效，需重新检测。进一步，所述样品垫为玻璃纤维膜；所述吸水垫为吸水纸。进一步，所述二抗选用羊抗鼠二抗。进一步，所述胶体金试纸条的宽度为3-5mm；所述T线和C线的各相邻线的间隔为4-6mm；所述样品垫与免疫胶体金垫之间重叠1-2mm；所述免疫胶体金垫与硝酸纤维素膜之间重叠1-2mm；所述硝酸纤维素膜与吸水垫之间重叠1-2mm。作为一种优选，所述胶体金试纸条的宽度为4mm；所述T线和C线的各相邻线的间隔为5mm；所述样品垫与免疫胶体金垫之间重叠1mm；所述免疫胶体金垫与硝酸纤维素膜之间重叠1mm；所述硝酸纤维素膜与吸水垫之间重叠2mm。进一步，所述胶体金标记的鼠抗人表面活性蛋白A单克隆抗体Ⅰ为每80-150μg鼠抗人表面活性蛋白A单克隆抗体Ⅰ采用1mLOD520nm值为1.5-2.0的胶体金溶液标记，胶体金颗粒平均直径为30-50nm；所述T线上兔抗人表面活性蛋白A多克隆抗体Ⅱ的合适包被量为0.3-1.5μg；所述C线上二抗的合适包被量为0.15-0本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测人表面活性蛋白A的胶体金试纸条，其特征在于，依次由吸水垫、硝酸纤维素膜、免疫胶体金垫、样品垫和聚氯乙烯底板构成；所述硝酸纤维素膜包有质控线C线和检测线T线，C线为二抗，T线为兔抗人表面活性蛋白A多克隆抗体Ⅱ；所述免疫胶体金垫为包被有胶体金标记的鼠抗人表面活性蛋白A单克隆抗体Ⅰ的玻璃纤维。

【技术特征摘要】
1.检测人表面活性蛋白A的胶体金试纸条，其特征在于，依次由吸水垫、硝酸纤维素膜、免疫胶体金垫、样品垫和聚氯乙烯底板构成；所述硝酸纤维素膜包有质控线C线和检测线T线，C线为二抗，T线为兔抗人表面活性蛋白A多克隆抗体Ⅱ；所述免疫胶体金垫为包被有胶体金标记的鼠抗人表面活性蛋白A单克隆抗体Ⅰ的玻璃纤维。2.根据权利要求1所述的胶体金试纸条，其特征在于，所述样品垫为玻璃纤维膜；所述吸水垫为吸水纸。3.根据权利要求1所述的胶体金试纸条，其特征在于，所述二抗选用羊抗鼠二抗。4.根据权利要求1所述的胶体金试纸条，其特征在于，所述胶体金试纸条的宽度为3-5mm；所述T线和C线的各相邻线的间隔为4-6mm；所述样品垫与免疫胶体金垫之间重叠1-2mm；所述免疫胶体金垫与硝酸纤维素膜之间重叠1-2mm；所述硝酸纤维素膜与吸水垫之间重叠1-2mm。5.根据权利要求1所述的胶体金试纸条，其特征在于，所述胶体金标记的鼠抗人表面活性蛋白A单克隆抗体Ⅰ为每80-150μg鼠抗人表面活性蛋白A单克隆抗体Ⅰ采用1mLOD520nm值为1.5-2.0的胶体金溶液标记，胶体金颗粒平均直径为30-50nm；所述T线上兔抗人表面活性蛋白A多克隆抗体Ⅱ的合适包被量为0.3-1.5μg；所述C线上二抗的合适包被量为0.15-0.75μg。6.权利要求1-5任一项所述的胶体金试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)胶体金溶液的制备：将氯化金水溶液用柠檬三钠还原成的胶体金溶液；2)人表面活性蛋白A免疫胶体金溶液的制备：将步骤1)制得的胶体金溶液pH值调至7-8.5，根据上述配比将鼠抗...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈晨语，
申请(专利权)人：徐立，
类型：发明
国别省市：重庆,50