The invention provides an immune chromatography method for quantitative detection of prealbumin, a preparation and application of a test paper strip. The strip is composed of a bottom plate, a sample pad, combination pad, nitrocellulose membrane and absorbent paper, sample pad, combination pad, nitrocellulose membrane and the absorbent paper are pasted on the bottom plate and are respectively overlapped overlap to a detection line and a quality control line on the nitrocellulose membrane, combined with spraying pad marked by fluorescent microspheres anti albumin antibody I detection line coated with anti albumin antibody II, the control line is coated with donkey anti mouse antibody. The method comprises the following steps: (1) the reaction solution adding known concentration in the sample pad strip containing prealbumin standard, standard curve; (2) adding analyte solution, control standard curve content. The test paper strip and the detection method of the invention have high sensitivity and can reach pg/mL, and the detection range is wide, the operation is convenient and the time consuming is short, and the result can be obtained only by 10 to 20min.
【技术实现步骤摘要】
定量检测前白蛋白的免疫层析方法、试纸条的制备和应用
本专利技术属于医学免疫体外诊断
,具体涉及一种定量检测前白蛋白的免疫层析方法、试纸条的制备和应用。
技术介绍
前白蛋白是由肝细胞合成的一种血清蛋白,电泳时迁移在白蛋白之前,故名前白蛋白。前白蛋白是由4个相同的亚基组成的四聚体,分子量约为54980,消光系数(E280nm)13.6,其半衰期很短,约1.9天,前白蛋白参与血清中甲状腺素和视黄醇的运输,并具有胸腺激素活性,可通过促进淋巴细胞的成熟来增加机体免疫力。血液中前白蛋白是一种负急性时相反应蛋白,出现炎症和恶性疾病时其浓度水平下降。前白蛋白的半衰期很短,对于了解蛋白质营养不良和肝功能障碍有重要作用,其在血液中的浓度减低的幅度与肝实质损害的程度密切相关,临床上常见于肝功能损伤、肝硬化、外伤及感染患者。前白蛋白作为一个敏感指标,可以作为观测肝功能受损及营养缺乏的早期诊断指标。前白蛋白的检测方法有很多,过去常用的检测方法是免疫透射比浊发、免疫扩散法、免疫电泳法、放射免疫分析法、散射比浊法、ELISA法等。这些方法大多较费时,且样品需要预处理,需要特殊的设备,而且还存在精密度和准确度差等缺点,均不适用于临床的现场快速检测。因此,为了提高前白蛋白的临床诊断效率及提高诊断的精密度和准确度,亟需研究开发新的诊断方法和产品。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了缩短检测时间,提高前白蛋白的临床诊断效率及提高诊断的精密度和准确度,而提供一种定量检测前白蛋白的免疫层析方法、试纸条的制备和应用。为实现上述目的,本专利技术提供下述技术方案。本专利技术提供的技术方案之一是:一种 ...
【技术保护点】
一种定量检测前白蛋白的试纸条,其特征在于,其由底板、样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸构成,所述样品垫、所述结合垫、所述硝酸纤维素膜和所述吸水纸依次搭接地粘贴在所述底板上且分别部分重合,在所述硝酸纤维素膜上分布有检测线和质控线,所述检测线靠近结合垫端,所述质控线靠近吸水纸端,所述结合垫上包被有2.0~5.0μL/cm的荧光微球标记的抗前白蛋白抗体I,所述检测线上包被有0.5~1.25μL/cm抗前白蛋白抗体II,所述质控线上包被有0.5~1.25μL/cm驴抗鼠抗体,其中,所述抗前白蛋白抗体I与所述抗前白蛋白抗体II具有不同的抗原结合位点。
【技术特征摘要】
1.一种定量检测前白蛋白的试纸条,其特征在于,其由底板、样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸构成,所述样品垫、所述结合垫、所述硝酸纤维素膜和所述吸水纸依次搭接地粘贴在所述底板上且分别部分重合,在所述硝酸纤维素膜上分布有检测线和质控线,所述检测线靠近结合垫端,所述质控线靠近吸水纸端,所述结合垫上包被有2.0~5.0μL/cm的荧光微球标记的抗前白蛋白抗体I,所述检测线上包被有0.5~1.25μL/cm抗前白蛋白抗体II,所述质控线上包被有0.5~1.25μL/cm驴抗鼠抗体,其中,所述抗前白蛋白抗体I与所述抗前白蛋白抗体II具有不同的抗原结合位点。2.根据权利要求1所述的试纸条,其特征在于,所述的荧光微球是直径为0.1~10μm的用聚合材料或二氧化硅包裹荧光物质制得的微球,其表面连接有活性基团或与链霉亲和素偶联;所述荧光物质为有机或无机的荧光物质或多种荧光物质的掺杂物以及量子点;和/或,所述底板的材料为PVC塑料胶板;和/或,所述样品垫的材料为玻璃纤维膜或聚酯纤维膜;和/或,所述结合垫的材料为玻璃纤维膜或聚酯纤维膜。3.权利要求1或2所述定量检测前白蛋白的试纸条的制备方法,其包括如下步骤:(1)硝酸纤维素膜的制备:将抗前白蛋白抗体II和驴抗鼠抗体包被到硝酸纤维素膜上,分别作为检测线和质控线,包被的量均为0.5~1.25μL/cm,干燥后备用;(2)结合垫的制备:以EDC为偶联剂,将荧光微球标记在抗前白蛋白抗体I上,将标记有荧光微球的抗前白蛋白抗体I以2.0~5.0μL/cm的喷量喷涂至结合垫上,干燥后备用;(3)试纸条的组装:将样品垫、结合垫、包被有抗前白蛋白抗体II作为检测线与驴抗鼠抗体作为质控线的硝酸纤维素膜和吸水纸依次搭接地粘贴在粘性底板上且分别部分重合,即得。4.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,步骤(1)中,所述的抗前白蛋白抗体II和驴抗鼠抗体在包被前用抗体保护剂调节浓度;所述调节浓度优选将所述的抗前白蛋白抗体II的浓度调节至0.3~1.2mg/mL,将驴抗鼠抗体的浓度调节至0.5~1.5mg/mL;所述的抗体保护剂的pH值优选为7.2~7.4;和/或,所述检测线和所述质控线间的距离为5~8mm;和/或,所述包被的量均为1.0μL/cm;和/或,所述干燥的环境湿度低于40%。5.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,步骤(2)为将荧光微球加入MES缓冲溶液,再加入EDC溶液混匀,然后加入用MES缓冲溶液稀释的抗前白蛋白抗体I,混匀后室温搅拌反应1~3h,加入BSA封闭1~2h,离心弃上清,沉淀用MES缓冲溶液复溶至起始体积,将制备好的荧光微球标记的抗前白蛋白抗体I喷涂至结合垫上,干燥后备用。6.根据权利要求5所述的制备方法,其特征在于,所述结合垫经过缓冲液、表面活性剂、稳定剂、非离子表面活性剂和防腐剂中的一种或多种处理后再使用;所述缓冲液优选磷酸盐缓冲液;所述表面活性剂优选聚乙烯吡咯烷酮或TWEEN-20;所述稳定剂优选蔗糖或牛血清白蛋白;所述非离子表面活性剂优选聚乙二醇对异辛基苯基醚;所述防腐剂优选叠氮...
【专利技术属性】
技术研发人员:杨亚杰,李超辉,王加义,凌燕,王维,赖卫华,熊勇华,
申请(专利权)人:北京中生金域诊断技术股份有限公司,
类型:发明
国别省市:北京,11
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