一种常温储存的便携式尿半乳糖检测试剂盒及其反应液和制备方法技术

本申请涉及生物检测技术领域，具体公开了一种常温储存的便携式尿半乳糖检测试剂盒及其反应液和制备方法。本申请提供的尿半乳糖检测试剂盒包括反应装置、尿液纯化装置和标准液试剂瓶；反应装置内设有反应孔和校准孔，所述反应孔与校准孔负载有反应试剂，反应试剂包括以下重量比的组分：丝胶蛋白：琼脂糖：半乳糖氧化酶：过氧化物酶：半乳糖苷酶=（1.5

【技术实现步骤摘要】
一种常温储存的便携式尿半乳糖检测试剂盒及其反应液和制备方法


[0001]本申请涉及生物检测
，具体涉及一种常温储存的便携式尿半乳糖检测试剂盒及其反应液和制备方法。

技术介绍

[0002]乳糖不耐受是指因机体小肠黏膜表面缺乏乳糖酶而造成的乳糖消化、吸收障碍。乳糖不耐受分为先天性乳糖不耐受和后天性乳糖不耐受。其中，先天性乳糖不耐受是由机体先天性乳糖酶活性低下或缺乏所导致；而后天性乳糖不耐受是由于机体饮食不规律、营养不良等原因导致。当机体发生乳糖不耐受时，会产生腹胀、腹泻、腹痛等一系列症状，严重时可能会引起脱水、酸中毒、生长迟缓等。因此，对机体是否乳糖耐受的检测至关重要。
[0003]目前，乳糖耐受的检测方法有多种，包括乳糖耐受实验、尿半乳糖法、小肠灌注法、乳糖钡餐X线检查、粪便糖检测、氢气呼气试验、甲烷呼气法、13CO2呼气法等。其中，尿半乳糖法因其采样、操作简单方便，特异性和灵敏度较高，无需大型检测设备等优点得到了越来越多的认可，该方法是通过测定尿液中的半乳糖浓度来间接地反映乳糖的消化吸收状况，从而判断受试者是否乳糖耐受。目前，根据尿半乳糖法检测机理制备的试剂盒是通过对比试剂盒中反应孔与标准孔的显色深浅(显色深度与样本的半乳糖浓度为正比关系)，来迅速判读样本是否乳糖低于标准；反应孔的颜色较标准孔浅，即可表明样本的半乳糖含量低于标准液，从而间接地评估乳糖的消化吸收及乳糖耐受情况。因此该方法具有方便、快捷等优点，适用于家庭自测。
[0004]然而，目前使用的尿半乳糖检测试剂盒还存在一些问题。例如：尿半乳糖测试酶在常温下容易失活，导致酶联显色反应无法发生，进而造成检测结果偏低，形成误判。另外，现有的试剂盒中均使用了试剂垫、滤棉或试纸等吸附支撑材质，故在反应显色后会出现渗透阻碍，导致反应部位颜色不均匀，形成色斑，进而易造成误判、错判，影响检测准确率。

技术实现思路

[0005]为了解决相关技术中尿半乳糖测试酶在常温下容易失活及反应显色易形成色斑的问题，获得一种能够常温储存，并且检测准确率高的尿半乳糖检测试剂盒。本申请提供一种常温储存的便携式尿半乳糖检测试剂盒及其反应液和制备方法。
[0006]第一方面，本申请提供一种常温储存的便携式尿半乳糖检测试剂盒，采用如下的技术方案：一种常温储存的便携式尿半乳糖检测试剂盒，所述尿半乳糖检测试剂盒包括反应装置、尿液纯化装置和标准液试剂瓶；所述反应装置内设有反应孔和校准孔，所述反应孔与校准孔负载有反应试剂，所述反应试剂包括以下重量比的组分：丝胶蛋白：琼脂糖：半乳糖氧化酶：过氧化物酶：半乳糖苷酶＝(1.5
‑
5)：(2
‑
6)：
(0.010
‑
0.015)：(0.10
‑
0.17)：(0.08
‑
0.12)；所述标准液试剂瓶的内容物为标准液，所述标准液包含0.15
‑
0.2g/L的D
‑
半乳糖。
[0007]本申请提供了一种尿半乳糖检测试剂盒，该尿半乳糖检测试剂盒能够在常温下储存至少12个月，并且检测结果的准确性在90％以上。因此该试剂盒能够用于家庭储备，方便快速地实现尿半乳糖自测，实现身体健康状况的监测与防护。另外，本申请提供的尿半乳糖检测试剂盒与相关技术中的尿半乳糖检测试剂盒相比，不含有吸附支撑材质，因此在反应显色过程中，该试剂盒避免了相关技术中反应显色造成的渗透阻碍现象，有效减少色斑的生成，提高检测的准确率。
[0008]优选地，所述反应孔与校准孔上均覆盖有铝箔。
[0009]优选地，所述标准液还包含氯化钠0.8
‑
1.0g/L。
[0010]在一个具体的实施方案中，所述标准液包含0.18g/L的D
‑
半乳糖；即标准液的浓度为1mmol/L。
[0011]第二方面，本申请提供一种用于制备尿半乳糖检测试剂盒的反应液。
[0012]一种用于制备尿半乳糖检测试剂盒的反应液，所述反应液包括以下含量的组分：丝胶蛋白1.5
‑
5g/L、琼脂糖2
‑
6g/L、半乳糖氧化酶0.010
‑
0.015g/L、过氧化物酶0.10
‑
0.17g/L和半乳糖苷酶0.08
‑
0.12g/L。
[0013]本申请提供了一种包含丝胶蛋白和琼脂糖的反应液，由于该反应液中含有丝胶蛋白，丝胶蛋白一方面能够提升反应液中半乳糖氧化酶的稳定性，使得半乳糖氧化酶在长时间的常温储存下依然具备较高的活性；另一方面丝胶蛋白还能取代相关技术中的试剂垫、滤棉或试纸等吸附支撑材质，大大节省制备材料，且能够避免因吸附支撑材质带来的检测缺陷。
[0014]本申请中，丝胶蛋白在成膜后具有很好的力学性能及网状结构，能够使半乳糖氧化酶等物质负载于其网状结构中，有效代替相关技术中的吸附支撑材质。并且丝胶蛋白与反应液各物质之间的生物相容性好，利于反应液的长时间稳定保存。琼脂糖是一种线性多聚物，其溶解后会形成良好的半固体状凝胶，因此具有很好的稳固性。本申请的缓冲支持剂中加入琼脂糖，琼脂糖能否辅助丝胶蛋白进行成膜固定反应液。并且琼脂糖还能对酶起到一定的辅助保护作用，使酶能够在长时间的常温保存在依然保持较高的活性。
[0015]本申请中，琼脂糖可以为Seakem HE琼脂糖、Seakem HEEO琼脂糖、Seakem ME琼脂糖、Seakem HGT琼脂糖、Seakem HGT(P)琼脂糖或IsoGel琼脂糖。
[0016]本申请中，琼脂糖还可以为普通琼脂糖、低熔点琼脂糖、低电渗琼脂糖或高强度琼脂糖。
[0017]优选地，所述琼脂糖为Seakem HEEO琼脂糖。
[0018]本申请中，过氧化物酶选自超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)、羟基过氧化物酶(GAT)和乳过氧化物酶(LP)优选地，所述过氧化物酶为超氧化物歧化酶(SOD)或羟基过氧化物酶(GAT)。
[0019]本申请中，半乳糖苷酶选自邻硝基苯
‑
β
‑
D
‑
半乳糖苷(ONPG)、5
‑
溴
‑4‑
氯
‑3‑
吲哚
‑
β
‑
D
‑
吡喃糖苷(x
‑
Gal)、氯酚红
‑
β
‑
D
‑
吡喃半乳糖苷(CPRG)、4
‑
硝基苯
‑
α
‑
D
‑
吡喃半乳糖苷(PNPG)、异丙基
‑
β
‑
D
‑
硫代半乳糖苷(IPTG)。
[0020]优选地，所述半乳糖苷酶为邻硝基苯
‑
β
‑
D
‑
半乳糖苷(ONPG)或氯酚红
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种常温储存的便携式尿半乳糖检测试剂盒，其特征在于，所述尿半乳糖检测试剂盒包括反应装置、尿液纯化装置和标准液试剂瓶；所述反应装置内设有反应孔和校准孔，所述反应孔与校准孔负载有反应试剂，所述反应试剂包括以下重量比的组分：丝胶蛋白：琼脂糖：半乳糖氧化酶：过氧化物酶：半乳糖苷酶=（1.5
‑
5）：（2
‑
6）：（0.010
‑
0.015）：（0.10
‑
0.17）：（0.08
‑
0.12）；所述标准液试剂瓶的内容物为标准液，所述标准液包含0.15
‑
0.2g/L的D
‑
半乳糖。2.根据权利要求1所述的尿半乳糖检测试剂盒，其特征在于，所述反应孔与校准孔上均覆盖有铝箔。3.根据权利要求1或2所述的尿半乳糖检测试剂盒，其特征在于，所述标准液还包含氯化钠0.8
‑
1.0g/L。4.一种用于制备权利要求1
‑
3任一项所述尿半乳糖检测试剂盒的反应液，其特征在于，所述反应液包括以下含量的组分：丝胶蛋白1.5
‑
5g/L、琼脂糖2
‑
6g/L、半乳糖氧化酶0.010
‑
0.015g/L、过氧化物酶0.10
‑
0.17g/L和半乳糖苷酶0.08
‑
0.12g/L。5.根据权利要求4所述的反应液，其特征在于，所述反应液包括以下含量的组分：丝胶蛋白2
‑<...

【专利技术属性】
技术研发人员：李增宁，吴艳，李寅龙，李静，董婷婷，凌燕，王加义，杨路，
申请(专利权)人：北京中生金域诊断技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：