一种乳糖不耐受症检测试剂盒及其使用方法技术

本发明专利技术公开了一种乳糖不耐受症检测试剂盒及使用方法，所述试剂盒包括检测待测样品的测试盒和检测对照品的对照盒，所述测试盒由带有进样孔的上层卡壳、带有反应槽的下层卡壳、反应垫构成；所述反应垫吸附有5

【技术实现步骤摘要】
一种乳糖不耐受症检测试剂盒及其使用方法
(一)

[0001]本专利技术涉及一种乳糖不耐受症检测试剂盒及其应用，该试剂盒检测人体粪便中β
‑
半乳糖苷酶，应用于筛查或辅助诊断乳糖不耐受症。
(二)
技术介绍

[0002]中国人群普遍存在乳糖酶缺乏症，继而容易表现出乳糖不耐受的症状。乳糖不耐受症除了引起腹部不适、腹胀、腹痛、腹泻等消化道症状外，还可能造成人体营养吸收不良。
[0003]目前临床上诊断乳糖不耐受症常用方法有三种，一是通过小肠活检来检测乳糖酶的活性，但是会有创伤(对小肠有损害性)问题；二是临床诊断法，依据患者在饮用牛奶后出现腹泻腹痛等现象判断其为乳糖不耐受症患者，结果容易受个人主观影响，存在结果不可靠、灵敏度差问题；三是呼氢实验，需要专门的仪器检测，操作繁琐。
[0004]现有方法中，小肠活检来检测乳糖酶的活性方法为：将从小肠中取出的粘膜组织加适量的生理盐水，在冰浴中用玻璃匀浆器匀浆化，匀浆液经稀释后加入底物溶液。由测定乳糖酶分解乳糖产生的葡萄糖的量来推算酶活性，一个酶活性单位(U)为水解1μmol乳糖/分
·
37℃，表示为U/g蛋白。葡萄糖的测定用葡萄糖氧化酶——过氧化酶法。蛋白测定为Lowry氏法，采用人血清白蛋白作蛋白标准液。通过直接测出粘膜乳糖酶活性来判断，当粘膜的乳搪酶活性低于13U/g蛋白，则被判断为乳糖不耐受症。
[0005]因此，寻找更加快速有效的检测方法并应用于临床检测乳糖不耐受症患者具有重要意义。
(三)
技术实现思路

[0006]本专利技术目的是提供一种乳糖不耐受症检测试剂盒及其使用方法，通过试剂盒检测粪便样品与对照样品的颜色，通过与对照品的显色程度不同，结合临床诊断来判断乳糖不耐受症；该检测试剂盒无需专门仪器，操作简单，可以快速的辅助检测出乳糖不耐受症患者；解决现有方法中结果不准确、实验创伤性大(造成小肠损伤)、操作繁琐等问题。
[0007]本专利技术采用的技术方案是：
[0008]本专利技术提供一种乳糖不耐受症检测试剂盒，所述试剂盒包括检测待测样品的测试盒(6)和检测对照品的对照盒，所述测试盒(6)由带有进样孔(1)的上层卡壳(4)、带有反应槽(3)的下层卡壳(5)、反应垫(2)构成，所述反应垫(2)的尺寸与反应槽(3)匹配，所述反应垫(2)覆盖反应槽(3)底部；所述上层卡壳(4)与下层卡壳(5)匹配围成一个中空盒体，所述进样孔(1)与反应槽(3)的中心对应；所述对照盒的结构与测试盒相同；所述反应垫吸附有5
‑
溴
‑4‑
氯
‑3‑
吲哚
‑
β
‑
D
‑
半乳糖苷(X
‑
gal)。
[0009]优选的，所述反应垫(2)按如下方法制备：滤纸做载体，放入0.065
‑
20mg/mL的5
‑
溴
‑4‑
氯
‑3‑
吲哚
‑
β
‑
D
‑
半乳糖苷(X
‑
gal)的N,N
‑
二甲基甲酰胺(DMF)溶液中，4℃浸泡2小时，60℃干燥1小时，获得所需的反应垫(2)。
[0010]更优选，所述滤纸为7cm定性滤纸，用打孔器切成的圆片。
[0011]优选的，所述X
‑
gal的DMF溶液的浓度为1mg/mL。
[0012]优选的，所述对照品为0.6～100U/μL的β
‑
半乳糖苷酶酶液，溶剂为含0.5M NaCl、0.5M咪唑的pH7.0的20mM磷酸钠缓冲液；所述β
‑
半乳糖苷酶液的制备已在中国专利申请CN202211511049.4中公开；更优选所述对照品的酶浓度为1.2U/μL。
[0013]优选的，所述待测样品为粪便样品，按如下方法处理：粪便样品15
‑
20mg/管，加入1mL生理盐水溶解粪便，反复震荡3
‑
5min，使粪便从固体转化为悬浊液，6000rpm离心2min，收集上清液；将上述上清液加入吸附剂活性炭0.05g，静置10min，离心(6000rpm/2min)，取经活性炭处理后的上清液作为待测样品。
[0014]本专利技术还提供一种所述乳糖不耐受症检测试剂盒的使用方法，所述方法为：将待测样品从进样孔(1)加入测试盒的反应槽(3)中，在常温中反应30min；同时，将对照品从进样孔(1)加入对照盒的反应槽(3)中，在常温中反应30min，观察颜色的变化，若测试盒的颜色比对照盒更浅，则表示待测样品中β
‑
半乳糖苷酶浓度低于对照品，进一步判断相对应的测试者为乳糖不耐受症患者；所述对照品优选为1.2U/μL的β
‑
半乳糖苷酶液。
[0015]与现有技术相比，本专利技术的有益效果主要体现在：
[0016]现有检测乳糖不耐受症的试剂盒是通过检测尿液中半乳糖的含量从而判断乳糖不耐受症患者(CN201710917819.8、CN202111496295.2、CN200610056826.5)，不同于小肠或尿液，粪便中含食物残渣、蛋白质、色素等其他物质，用现有方法检测粪便中的β
‑
半乳糖苷酶，粪便中含有的色素会干扰实验，最终使实验结果不准；此外，如果参试者是乳糖不耐受症患者，粪便中可能会含有未消耗完的乳糖，也会存在干扰。本专利技术试剂盒突破现有认知，采用特定的阳性对照，通过试剂盒检测待测样品与阳性对照颜色的变化来判断粪便中β
‑
半乳糖苷酶的浓度高低，从而快速、准确、特异性地辅助判断乳糖不耐受症。有效解决了临床一般通过直接观察法或者检测小肠中β
‑
半乳糖苷酶的浓度存在灵敏度差、实验创伤性大等问题。
[0017]本专利技术试剂盒的灵敏度高，特异性强，不与粪便中其他可溶性蛋白反应，能针对性检测出粪便中β
‑
半乳糖苷酶，且与临床检测小肠中β
‑
半乳糖苷酶的浓度方法相比，不需要提前预约手术时间和长时间等待检测结果，检测时间明显缩短。
[0018]本专利技术的具体操作与临床上呼氢实验的操作相比更简单，无需使用专门的仪器，上手更快，推广更方便，能在短时间内快速检测出乳糖不耐受症患者。
(四)附图说明
[0019]图1为试剂盒中反应装置的结构示意图。1：进样孔；2：反应垫；3：反应槽；4：上层卡壳；5：下层卡壳；6：反应装置。
[0020]图2为试剂盒检测样品的结果情况图。1：对照品，即阳性对照；2
‑
6：为粪便样品，其中6为阴性对照。
(五)具体实施方式
[0021]下面结合具体实施例对本专利技术进行进一步描述，但本专利技术的保护范围并不仅限于此：
[0022]实施例1：用于乳糖不耐受症检测的试剂盒的制备及组装
[0023]参照图1，所述用于乳糖不耐受检测的试剂盒设有检测待测样本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种乳糖不耐受症检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括检测待测样品的测试盒和检测对照品的对照盒，所述测试盒由带有进样孔的上层卡壳、带有反应槽的下层卡壳、反应垫构成；所述反应垫的尺寸与反应槽匹配，所述反应垫覆盖反应槽底部；所述上层卡壳与下层卡壳匹配围成一个中空盒体，所述进样孔与反应槽的中心对应；所述对照盒的结构与测试盒相同；所述反应垫吸附有5
‑
溴
‑4‑
氯
‑3‑
吲哚
‑
β
‑
D
‑
半乳糖苷。2.如权利要求1所述乳糖不耐受症检测试剂盒，其特征在于，所述反应垫按如下方法制备：滤纸做载体，放入0.065
‑
20mg/mL的5
‑
溴
‑4‑
氯
‑3‑
吲哚
‑
β
‑
D
‑
半乳糖苷的N,N
‑
二甲基甲酰胺溶液中，4℃浸泡2小时，60℃干燥1小时，获得所需的反应垫。3.如权利要求2所述乳糖不耐受症检测试剂盒，其特征在于，所述滤纸为7cm定性滤纸，用打孔器切成φ6.0mm的圆片。4.如权利要求2所述乳糖不耐受症检测试剂盒，其特征在于，5
‑
溴
‑4‑
氯
‑3‑
吲哚

【专利技术属性】
技术研发人员：黄金，姜静，王广雪，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：