一种杂泛性酰基转移酶、突变体及在催化核苷物质区域选择性酰化中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种杂泛性酰基转移酶、突变体及在催化核苷物质区域选择性酰化中的应用，所述突变体是将SEQ ID No.2所示氨基酸序列第80、112、129、238、292位的氨基酸进行单突变或多突变获得的。本发明专利技术以重组杂泛性酰基转移酶或突变体的粗酶粉为催化剂，高效、选择性地催化核苷制备酰化核苷。产物的区域选择性可达到99％以上，并且无其他二酰或多酰化副产物的生成，满足工业应用的需求。与其他可单酰化核苷的生物催化剂相比，本发明专利技术提供的杂泛性酰基转移酶及其突变体具有蛋白表达量高、反应条件温和、催化活性高、催化底物范围广、区域选择性高的优点，展示出广阔的工业应用前景。

【技术实现步骤摘要】

(一)本专利技术生物工程，尤其是涉及一种杂泛性酰基转移酶、突变体及在区域选择性酰化核苷中的应用。

技术介绍

0、(二)
技术介绍

1、核苷化合物包括核糖部分和杂环碱基(腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶等)。核苷化合物及其类似物在抗病毒药物和肿瘤疾病化疗药物合成中有着广泛的应用(jordheim,l.等人，nat.rev.drug.discov.2013，12，447–464)。尽管核苷化合物通常是有效的化疗药物，但其临床应用往往受到欠佳的物理性质的限制，从而导致药代动力学不佳。核苷前药往往表现出增强的药效、生物利用度和稳定性。核苷官能团的烷基化、酰化或者其他亲脂性修饰通常会增强其跨细胞转运能力(béatrice roy等人，chemical reviews，2016，116，7854-7897)，酰化核苷是药物化学中的重要支架，也是合成其他核苷衍生物的重要中间体。

2、一种核苷前药设计策略是对核糖部分的羟基进行酰化反应，o-酰基化的核苷衍生物常常是制备核苷前药的有用的化学中间体。已有一些关于尿嘧啶核苷的核糖部分选择性o-酰基化的报道(s本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种杂泛性酰基转移酶，其特征在于，所述杂泛性酰基转移酶氨基酸序列如SEQIDNo.2所示。

2.一种权利要求1所述杂泛性酰基转移酶在催化核苷区域选择性酰化中的应用。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的应用为：以含杂泛性酰基转移酶编码基因的重组基因工程菌经诱导培养获得的湿菌体超声破碎，破碎液离心，上清液冷冻干燥获得的粗酶粉为催化剂，以核苷为底物，以pH 6～9的缓冲液为反应介质，在20～35℃、100～300rpm条件下搅拌反应，反应至转化率达到99％以上或转化率不再继续增长时停止反应，获得含酰化核苷的转化液；所述底物加入浓度以缓冲液体积计为5～20...

【技术特征摘要】

1.一种杂泛性酰基转移酶，其特征在于，所述杂泛性酰基转移酶氨基酸序列如seqidno.2所示。

2.一种权利要求1所述杂泛性酰基转移酶在催化核苷区域选择性酰化中的应用。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的应用为：以含杂泛性酰基转移酶编码基因的重组基因工程菌经诱导培养获得的湿菌体超声破碎，破碎液离心，上清液冷冻干燥获得的粗酶粉为催化剂，以核苷为底物，以ph 6～9的缓冲液为反应介质，在20～35℃、100～300rpm条件下搅拌反应，反应至转化率达到99％以上或转化率不再继续增长时停止反应，获得含酰化核苷的转化液；所述底物加入浓度以缓冲液体积计为5～200g/l；所述催化剂加入浓度以缓冲液体积计为5～100g/l。

4.一种杂泛性酰基转移酶突变体，其特征在于，所述突变体是将seq id no.2所示氨基酸序列第80、112、129、238、292位的氨基酸进行单突变或多突变获得的。

5.如权利要求4所述的杂泛性酰基转移酶突变体，其特征在于，所述杂泛性酰基转移酶突变体是将seq id no.2所示氨基酸序列突变为下列之一：(1)第80位的氨基酸met替换为his；(2)第112位的氨基酸gly替换为asp；(3)第129位的氨基酸val替换为leu；(4)第238位的氨基酸arg替换为lys；(5)第292位的氨基酸phe替换为pro；(6)第80位的氨基酸met替换为his，第238位的氨基酸arg替换为lys；(7)第80位的氨基酸met替换为his，第238位的氨基酸arg替换为lys，第292位的氨基酸phe替换为pro；(8)第80位的氨基酸met替换为his，第238位的氨基酸arg替换为lys，第292位的氨基酸phe替换为pro，第129位的氨基酸val替换为leu；(9)第80位的氨基酸met替换为his，第238位的...

【专利技术属性】
技术研发人员：王亚军，窦哲，邵紫晴，胡培如，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：