本发明专利技术属于医学检测领域，具体涉及一种胃泌素释放肽前体荧光免疫层析检测试剂盒。其由试纸卡和荧光免疫层析分析仪组成。在本发明专利技术的一个实施方案中，所述试纸卡是在PVC板上顺次相互搭接经过处理的样品垫、吸附有稀土荧光微球标记抗体的结合垫、包被有检测线和质控线的硝酸纤维素膜和吸水垫，组装后形成试纸，然后切割成4mm宽的试纸条，将试纸条装入塑料卡内形成试纸卡。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医学检测领域，具体涉及一种胃泌素释放肽前体荧光免疫层析检测试剂盒。
技术介绍
肺癌是世界上发病率和病死率最高的恶性肿瘤之一。肺癌分为非小细胞肺癌(NSCLC)和小细胞肺癌(SCLC)，后者占肺癌患者总数的15%-20%。SCLC是一种快速生长的恶性肿瘤，患者在就诊时多数已经发现局部淋巴结或者远处转移，早期诊断能够提高生存率。肿瘤标志物检测是肺癌的一项重要辅助检测方法，理想的肿瘤标志物应具有较高的灵敏度和特异性，不但有助于肿瘤的早期诊断、病理类型的判断和癌症分期，而且能够评估治疗效果和预后并指导个体化治疗。目前常用的肺癌相关肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白19的可溶性片段(CYFRA21-1)、鳞状细胞癌抗原(SCCA)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)对早期肺癌诊断敏感性和特异性都不高，不适合作为早期肺癌筛查。大量研究显示，肿瘤标志物胃泌素释放肽前体(proGRP)有较高的临床应用价值。人胃泌素释放肽前体(proGRP)是近年来新发现的一种针对SCLC的肿瘤标志物，它不仅可用于SCLC的早期诊断，还有助于判断疗效及早期发现肿瘤复发。胃泌素释放肽前体在人血清中的临界值为50pg/ml，对SCLC早期诊断的特异性为100%，检测灵敏度为75%左右，其诊断SCLC的特异性可达95%以上，因此胃泌素释放肽前体是小细胞肺癌辅助诊断的良好指标。胃泌素释放肽前体检测方法主要有双抗夹心法(ELISA)、免疫发光法、放射免疫分析法。其中，ELISA法定量准确性差、操作时间长、自动化程度低，多用于定性检测；放射免疫分析法灵敏度可达到4pg/ml，能检测正常人血清胃泌素释放肽前体，比双抗夹心法灵敏，缺点是所需时间较长，检测结果不稳定，重复性比ELISA差，且存在放射性污染危险；免疫发光法方法特异性强，敏感性高，但需要昂贵的仪器设备和经验丰富的操作人员，一般多在特定医疗机构使用。因此开发灵敏度更高、快捷方便的胃泌素释放肽前体产品，仍是临床诊断产品研究领域亟需解决的重要问题。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种胃泌素释放肽前体定量荧光免疫层析检测试剂盒；其由试纸卡和荧光免疫层析分析仪组成。在本专利技术的一个实施方案中，所述试纸卡是在PVC板上顺次相互搭接经过处理的样品垫、吸附有稀土荧光微球标记抗体的结合垫、包被有检测线和质控线的硝酸纤维素膜和吸水垫，组装后形成试纸，然后切割成4mm宽的试纸条，将试纸条装入塑料卡内形成试纸卡。在本专利技术进一步实施方案中，所述稀土荧光微球掺杂有镧系元素，包括铕(Eu)、钐(Sm)、铒(Er)和/或钕(Nd)等镧系元素的任意一种或几种。所述稀土荧光微球的直径为60-200nm，进一步优选地，所选用的稀土荧光微球的直径是100-120nm。在本专利技术中，所述稀土荧光微球含有稀土络合物，在基态下稳定，在350-400nm的激发光源作用下，能够发射出波长范围在550-600nm的荧光。所述荧光免疫层析分析仪是一种光学检测系统，用于对检测结果的定量判定，对胃泌素释放肽前体的检测范围为0-5ng/mL。在本专利技术另一个实施方案中，所述吸附荧光微球标记的抗体的结合垫通过以下方法制备：A、稀土荧光微球的醛基化：取5mg稀土荧光微球，用50mM，pH9.5的碳酸盐缓冲液，采用离心法洗涤3遍，离心速度为12000rpm，时间为10分钟，最后重悬于200μl的上述碳酸盐缓冲液中。加入400μl醛基化的葡聚糖，混匀，室温下暗反应4小时。采用同样的离心法洗涤和重悬到200μl的上述碳酸盐缓冲液中，置于4℃备用。B、稀土荧光微球标记的胃泌素释放肽前体单克隆抗体的制备：将2mg胃泌素释放肽前体单克隆抗体用上述碳酸盐缓冲液于4℃透析过夜，然后与上述醛基化的稀土荧光微球混合，4℃反应过夜。然后，加入硼氢化钠至终浓度10mM，4℃反应4小时；再加入等体积的封闭液（100mM三羟甲基氨基甲烷缓冲液，pH8.0，含0.5%BSA，0.1%蔗糖和0.1%PVP），4℃封闭过夜；然后用100mM三羟甲基氨基甲烷缓冲液，pH8.0的缓冲液采用离心法洗涤3遍，重悬于200μl的100mM三羟甲基氨基甲烷缓冲液中（含1.0%NaCl，0.3%BSA，0.2%乙二醇），4℃避光保存备用。C、吸附荧光微球标记的抗体的结合垫的制备：将玻璃纤维膜浸泡于250mM三羟甲基氨基甲烷缓冲液中（含1.2%TritonX-100，2.5%BSA，pH8.0），4℃浸泡4小时，然后取出37℃烘箱烘干4小时，备用。将玻璃纤维膜在Bio-DotXYZ3050三维喷点平台上，用Bio-JetQuanti300非接触式微定量喷头将稀土荧光微球标记的胃泌素释放肽前体单克隆抗体喷到玻璃纤维膜，37℃烘干4小时，备用。在本专利技术又一个实施方案中，所述包被有检测线和质控线的硝酸纤维素膜的制备方法如下：用包被稀释液将胃泌素释放肽前体单克隆抗体和羊抗小鼠IgG抗体调整浓度到5mg/ml，膜液量为2μl/cm，将它们分别作为检测线和质控线平行喷洒于硝酸纤维素膜上进行包被，检测线和质控线间隔为5mm，然后置于烘箱中，37℃烘干4小时。所述包被稀释液为100mM三羟甲基氨基甲烷缓冲液，pH8.0。在本专利技术又一个实施方案中，所述样品垫的制备方法如下：将玻璃纤维膜浸泡于0.25MTris缓冲液（pH7.5），1.2%TritonX-100，2.5%BSA的处理液中，于4℃浸泡4个小时，然后置于烘箱中，37℃烘干4小时。在本专利技术中，所述试纸卡的组装过程如下：在PVC板上依次粘贴经过处理的样品垫、吸附有稀土荧光微球标记的抗体的结合垫、包被有检测线和质控线的硝酸纤维素膜和吸水垫，组装后得到试纸大板，按照要求切割成4mm宽，将试纸装入塑料卡内形成试纸卡。所述试剂盒，检测方法为：1)将检测试剂及样本平衡至室温，取出试纸卡，平放；2)精确吸取100μl血清样本，样本为全血时吸取150μl样本，加入到样本孔中，15-30分钟内用荧光免疫层析分析仪定量判定结果；3）设置好仪器相关参数后将试纸卡放入仓内进行检测，仪器将显示出样品浓度的定量测定结果。具体实施方式下面将详细说明本专利技术。需要指出的是，以下说明仅仅是对本专利技术要求保护的技术方案的举例说明，并非对这些技术方案的任何限制。本专利技术的保护范围以所附权利要求书记载的内容为准。实施例1胃泌素释放肽前体定量荧光免疫层析检测试剂盒的制备1）吸附荧光微球标记的抗体的结合垫的制备：A、稀土荧光微球的醛基化：取5mg稀土荧光微球（直径100nm），用50mM，pH9.5的碳酸盐缓冲液，采用离心法洗涤3遍，离心速度为12000rpm，时间为10分钟，最后重悬于200μl的上述碳酸盐缓冲液中。加入400μl醛基化的葡聚糖，混匀，室温下暗反应4小时。采用同样的离心法洗涤和重悬到200μl的上述碳酸盐缓冲液中，置于4℃备用。B、稀土荧光微球标记的胃泌素释放肽前体单克隆抗体的制备：将2mg胃泌素释放肽前体单克隆抗体本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种胃泌素释放肽前体定量荧光免疫层析检测试剂盒；其由试纸卡和荧光免疫层析分析仪组成；所述试纸卡是在PVC板上顺次相互搭接经过处理的样品垫、吸附有稀土荧光微球标记抗体的结合垫、包被有检测线和质控线的硝酸纤维素膜和吸水垫，组装后形成试纸，然后切割成4mm宽的试纸条，将试纸条装入塑料卡内形成试纸卡。
【技术特征摘要】
1.一种胃泌素释放肽前体定量荧光免疫层析检测试剂盒；其由试纸卡和荧光免疫层析分析仪组成；所述试纸卡是在PVC板上顺次相互搭接经过处理的样品垫、吸附有稀土荧光微球标记抗体的结合垫、包被有检测线和质控线的硝酸纤维素膜和吸水垫，组装后形成试纸，然后切割成4mm宽的试纸条，将试纸条装入塑料卡内形成试纸卡。
2.根据权利要求1所述的免疫层析检测试剂盒，其特征在于，所述稀土荧光微球掺杂有镧系元素，包括铕(Eu)、钐(Sm)、铒(Er)和/或钕(Nd)等镧系元素的任意一种或几种；所述稀土荧光微球的直径为60-200nm。
3.根据权利要求2所述的免疫层析检测试剂盒，其特征在于，所选用的稀土荧光微球的直径是100-120nm。
4.根据权利要求1所述的免疫层析检测试剂盒，其特征在于，所述吸附荧光微球标记的抗体的结合垫通过以下方法制备：
A、稀土荧光微球的醛基化：
取5mg稀土荧光微球，用50mM，pH9.5的碳酸盐缓冲液，采用离心法洗涤3遍，离心速度为12000rpm，时间为10分钟，最后重悬于200μl的上述碳酸盐缓冲液中；加入400μl醛基化的葡聚糖，混匀，室温下暗反应4小时；采用同样的离心法洗涤和重悬到200μl的上述碳酸盐缓冲液中，置于4℃备用；
B、稀土荧光微球标记的胃泌素释放肽前体单克隆抗体的制备：
将2mg胃泌素释放肽前体单克隆抗体用上述碳酸盐缓冲液于4℃透析过夜，然后与上述醛基化的稀土荧光微球混合，4℃反应过夜；然后，加入硼氢化钠至终浓度10mM，4℃反应4小时；再加入等体积的封闭液（100mM三羟甲基氨基甲烷缓冲液，pH8.0，...
【专利技术属性】
技术研发人员：石春林，商忆文，
申请(专利权)人：杭州惟新生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。