一种检测恶性疟疾的荧光胶乳免疫层析检测试剂及其制备方法技术

本发明专利技术提供了一种检测恶性疟疾的荧光胶乳免疫层析检测试剂及其制备方法，该荧光胶乳免疫层析检测试剂包括样品垫、结合垫、反应膜和吸水垫，其中结合垫上涂覆有荧光胶乳标记的抗HRP‑2单克隆抗体和抗兔IgG，反应膜上设有检测线和质控线，所述的检测线上包被有抗HRP‑2单克隆抗体，所述的质控线上包被有兔IgG，本发明专利技术的检测恶性疟疾的荧光胶乳免疫层析检测试剂可以快速检测出恶性疟原虫，其操作便捷，成本低廉，适于临床和现场使用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及疾病检测领域，具体涉及一种检测恶性疟疾的荧光胶乳免疫层析检测试剂及其制备方法。
技术介绍
疟疾是由疟原虫感染引起的严重危害人群健康的急性寄生虫病，它通过按蚊叮咬而传播，在人体内先后经过肝内无性繁殖和红细胞内有性繁殖，成批破坏红细胞而致病。寄生于人体的疟原虫有四种：间日疟原虫（P．lasmodium）、恶性疟原虫(P．falciparum)、三日疟原虫(P．malarial)和卵形疟原虫(P．ovale)。我国以间日疟原虫、恶性疟原虫为常见，卵形疟仅发现几例。疟疾诊断是疟疾防治工作中的重要环节，目前传统的镜检法仍然是疟疾诊断方法的“金标准“，用厚血膜法检查100个视野，理论上可检出4个疟原虫/μl，但其缺点是费时、费力，同时检查者需要有专业知识和经验。近年发展起来的血液棕黄层定量法(QBC技术)，缺点是所使用的毛细管价格较高，且不能重复使用，操作上也较为繁琐，且难以有效地进行虫种鉴别及原虫计数，不适用单个疟疾病人的诊断。而近年发展的DNA探针技术和聚合酶链式反应(PCR)等方法在现场使用时均有一定的局限性，需要较高的操作技术和复杂的设备仪器，同时也和传统方法一样不适合大规模的现场应用。随着细胞生物学技术，特别是以免疫淋巴细胞与骨髓瘤细胞杂交融合后制备单克隆抗体技术的发展，，用单克隆抗体检测疟原虫的特异性抗原，是目前疟疾免疫诊断研究的主要方向。疟疾的血清学标志物主要有各种疟原虫抗原和机体产生的各种对应抗体。目前已报道的被检抗原主要是富组氨酸蛋白HRP-2和疟原虫乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenase，pLDH)，此外还有P.f耐热抗原Pf93。HRP-2是恶性疟原虫合成的含有大量组氨酸的水溶性抗原，由感染疟原虫的红细胞大量分泌，其含量在整个红细胞内期随裂殖子的分裂逐渐升高，这一抗原只存在与无性体中和早期配子体中，相应的单克隆抗体可用于检测恶性疟原虫。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种检测恶性疟疾的荧光胶乳免疫层析检测试剂，其包括：底板和依次搭接并粘贴在底板上的样品垫、结合垫、反应膜和吸水垫，所述反应膜上远离结合垫的一端设置有质控线，在质控线和结合垫之间还设置有检测线，所述的结合垫上涂覆有荧光胶乳标记的抗HRP-2单克隆抗体和抗兔IgG，所述的检测线上包被有抗HRP-2单克隆抗体，所述的质控线上包被有兔IgG，所述检测线上包被的抗HRP-2单克隆抗体的浓度为0.5mg/ml~2.0mg/ml。所述质控线上包被的兔IgG浓度为0.8mg/ml~1.2mg/ml。所述荧光胶乳标记的抗HRP-2单克隆抗体由以下方法制备得到：使用浓度为1%的荧光胶乳溶液，调节其pH值为7.5~9.5，加入抗HRP-2单克隆抗体，使抗HRP-2单克隆抗体在所述荧光胶乳溶液中的浓度为0.4~1.0mg/ml，混合均匀，室温下反应2~4小时得到。所述荧光胶乳标记的抗兔IgG多克隆抗体由以下方法制备得到：使用浓度为1%的荧光胶乳溶液，调节其pH值为7.5~9.5，加入抗兔IgG多克隆抗体，使抗兔IgG多克隆抗体在所述荧光胶乳溶液中的浓度为0.2~0.4mg/ml，混合均匀，室温下反应2~4小时得到。本专利技术的另一目的是提供上述的检测恶性疟疾的荧光胶乳免疫层析检测试剂的制备方法，其包括以下步骤：（1）制备荧光胶乳标记的抗HRP-2单克隆抗体和抗兔IgG，并涂覆在结合垫上；（2）在反应膜的检测线上包被HRP-2单克隆抗体，在反应膜的质控线上包被兔IgG；（3）把样品垫、反应膜、吸水纸依次搭接粘贴在底板上，用切条机切成单条。所述的底板是PVC底板，厚0.2~0.4mm，长7.0cm，宽4mm。所述样品垫是玻璃纤维膜。所述结合垫是玻璃纤维膜。所述的反应膜是硝酸纤维素膜。所述的抗HRP-2单克隆抗体从Meridianlifescience,lnc.采购，纯度≥95%。使用时，将待测样品滴加到所述荧光胶乳免疫层析检测试剂的样品垫，并滴加裂解液，样品经裂解液裂解后释放的HRP-2抗原先与结合垫中荧光胶乳标记的抗HRP-2单克隆抗体反应形成复合物，由于层析作用，反应复合物沿着硝酸纤维素膜向前移动，被硝酸纤维素膜上检测线包被的抗HRP-2单克隆抗体捕获而聚积，聚积的量越多，免疫荧光检测仪扫描的信号值越高，则样品阳性程度越强，此时检测结果为阳性；而当样品中没有恶性疟原虫或其含量低于25个/μl时，则在检测线没有或是有极少量复合物聚积，此时免疫荧光检测仪扫描为无信号值或信号值低于最低检出限的信号值，此时检测结果为阴性。同时，质控线包被兔IgG与荧光胶乳标记的抗兔IgG反应形成具有一定荧光信号值，则表明检测结果正常，如果该质控线上检测不到荧光信号，说明待测样品在反应膜上没有正常层析，则抛弃检测结果。所述的裂解液由以下步骤制备得到：称取8.00gNH4Cl(0.15M)、1.00gKHCO3(10mM)、0.37gNa2EDTA(1mM)，溶于980ml的三蒸水中，用1NHCl或1NNaOH调节pH值到6.0~6.4之间，加三蒸水定容到1000ml，备用。本专利技术提供的一种检测恶性疟疾的荧光胶乳免疫层析检测试剂，利用荧光免疫层析技术，采用双抗夹心法，可以在加样后15分钟内有效检测出人全血中是否含带恶性疟原虫代谢产物抗组氨酸富集蛋白HRP-2，从而确定人体是否感染了恶性疟原虫，其操作简便，成本低廉，非常适合现场的及时检测。附图说明图1为本专利技术的检测恶性疟疾的荧光胶乳免疫层析检测试剂的结构示意图。附图标记说明：1、样品垫；2、结合垫；3、检测线；4、反应膜；5、质控线；6、吸水垫；7、底板。具体实施方式实施例1一种检测恶性疟疾的荧光胶乳免疫层析检测试剂，由玻璃纤维样品垫1，玻璃纤维结合垫2，硝酸纤维素反应膜4和吸水纸6依次搭接并粘贴固定在PVC底板7上组成，所述PVC底板7裁切平整，厚0.2mm，长7.0cm，宽4mm，在所述硝酸纤维素反应膜4上临接结合垫2的一端的距离1.75cm处设置有检测线3，并在距离检测线3的0.65cm处设置有质控线5，所述结合垫2上涂覆有荧光胶乳标记的抗HRP-2单克隆抗体，浓度均为0.4mg/ml，所述结合垫还涂覆有荧光胶乳标记的抗兔IgG，浓度为0.2mg/ml，所述检测线3包被有抗HRP-2单克隆抗体，浓度均为0.5mg/ml，所述质控线5包被有抗兔IgG多克隆抗体，浓度0.8/ml。实施例2一种检测恶性疟疾的荧光胶乳免疫层析检测试剂，由玻璃纤维样品垫1，玻璃纤维结合...

【技术保护点】
一种检测恶性疟疾的荧光胶乳免疫层析检测试剂，包括底板和依次搭接并粘贴在底板上的样品垫、结合垫、反应膜和吸水垫，所述反应膜上远离结合垫的一端设置有质控线，在质控线和结合垫之间还设置有检测线，所述的结合垫上涂覆有荧光胶乳标记的抗HRP‑2单克隆抗体和抗兔IgG，所述的检测线上包被有抗HRP‑2单克隆抗体，所述的质控线上包被有兔IgG。

【技术特征摘要】
1.一种检测恶性疟疾的荧光胶乳免疫层析检测试剂，包括底板和依次搭接并粘贴在底
板上的样品垫、结合垫、反应膜和吸水垫，所述反应膜上远离结合垫的一端设置有质控线，
在质控线和结合垫之间还设置有检测线，所述的结合垫上涂覆有荧光胶乳标记的抗HRP-2
单克隆抗体和抗兔IgG，所述的检测线上包被有抗HRP-2单克隆抗体，所述的质控线上包被
有兔IgG。
2.如权利要求1所述的一种检测恶性疟疾的荧光胶乳免疫层析检测试剂，其特征在于，
所述检测线上包被的抗HRP-2单克隆抗体的浓度为0.5~2.0mg/ml。
3.如权利要求1所述的一种检测恶性疟疾的荧光胶乳免疫层析检测试剂，其特征在于，
所述质控线上包被的兔IgG浓度为0.8~1.2mg/ml。
4.如权利要求1所述的一种检测恶性疟疾的荧光胶乳免疫层析检测试剂，其特征在于，
所述荧光胶乳标记的抗HRP-2单克隆抗体由以下方法制备得到：使用浓度为1%的荧光胶乳
溶液，调节其p...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈飞，康可人，王继华，
申请(专利权)人：广州万孚生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44