一种利用高粱花叶病毒P3N‑PIPO构建的亚细胞定位试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及一种利用高粱花叶病毒P3N‑PIPO构建的植物亚细胞定位试剂盒，包括4个分别标记绿色、红色、黄色和青色荧光蛋白的胞间连丝定位载体：SrMV‑P3N‑PIPO‑GFP、pSrMV‑P3N‑PIPO‑RFP、pSrMV‑P3N‑PIPO‑YFP和pSrMV‑P3N‑PIPO‑CFP；4个无特异亚细胞定位的对照载体：pSAT6‑EGFP‑C1、pSAT6‑ERFP‑C1、pSAT6‑EYFP‑C1和pSAT6‑ECFP‑C1；限制性内切酶Xho I、Hind III、无RNase水和侵染液。使用本试剂盒可以快速明确目的基因表达产物是否具有胞间连丝定位的特性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种试剂盒，具体涉及一种利用高粱花叶病毒P3N-PIPO构建的亚细胞定位试剂盒。本专利技术利用分别带有绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein,GFP)标记、红色荧光蛋白(redfluorescentprotein,RFP)、黄色荧光蛋白(yellowfluorescentprotein,YFP)和青色荧光蛋白(cyanfluorescentprotein,CFP)的具有特异胞间连丝(Plasmodesma,PD)定位功能的蛋白SrMV-P3N-PIPO，指示待验证基因表达蛋白是否具有胞间连丝定位的特性，属于生物

技术介绍
随着生物技术的发展，尤其是基因组学的发展和测序技术的进步，越来越多的新基因被发现，已经形成了海量数据。明确未知基因的功能，探讨其潜在的应用价值，是基因组学研究的终极目标。蛋白质是基因的表达产物，蛋白质的亚细胞定位与蛋白质的结构和功能关系密切，蛋白质必须处于合适的位置才能发挥其功能。对于一个新基因，明确其表达产物即蛋白质的亚细胞定位，可以为研本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用高粱花叶病毒P3N‑PIPO构建的亚细胞定位试剂盒，其特征在于该试剂盒由下列试剂组成：(1)绿色荧光蛋白标记的PD定位载体pSrMV‑P3N‑PIPO‑GFP，作为阳性对照，1管，100ng/μL，50μL/管，‑20℃冷冻保存备用；(2)红色荧光蛋白标记的PD定位载体pSrMV‑P3N‑PIPO‑RFP，作为阳性对照，1管，100ng/μL，50μL/管，‑20℃冷冻保存备用；(3)黄色荧光蛋白标记的PD定位载体pSrMV‑P3N‑PIPO‑YFP，作为阳性对照，1管，100ng/μL，50μL/管，‑20℃冷冻保存备用；(4)青色荧光蛋白标记的PD定位载体pSrMV‑P3N‑PIP...

【技术特征摘要】
1.一种利用高粱花叶病毒P3N-PIPO构建的亚细胞定位试剂盒，其特征在于该试剂盒由
下列试剂组成：
(1)绿色荧光蛋白标记的PD定位载体pSrMV-P3N-PIPO-GFP，作为阳性对照，1管，
100ng/μL，50μL/管，-20℃冷冻保存备用；
(2)红色荧光蛋白标记的PD定位载体pSrMV-P3N-PIPO-RFP，作为阳性对照，1管，
100ng/μL，50μL/管，-20℃冷冻保存备用；
(3)黄色荧光蛋白标记的PD定位载体pSrMV-P3N-PIPO-YFP，作为阳性对照，1管，
100ng/μL，50μL/管，-20℃冷冻保存备用；
(4)青色荧光蛋白标记的PD定位载体pSrMV-P3N-PIPO-CFP，作为阳性对照，1管，
100ng/μL，50μL/管，-20℃冷冻保存备用；
(5)载体pSAT6-EGFP-C1，1管，500ng/μL，50μL/管，-20℃冷冻保存备用；
(6)载体pSAT6-ERFP-C1，1管，500ng/μL，50μL/管，-20℃冷冻保存备用；
(7)载体pSAT6-EYFP-C1，1管，500ng/μL，50μL/管，-20℃冷冻保存备用；
(8)载体pSAT6-ECFP-C1，1管，500ng/μL，50μL/管，-20℃冷冻保存备用；
(9)限制性内切酶XhoI：1管，500units，100μL/管；
(10)限制性内切酶HindIII：1管，500units，100μL/管；
(11)无RNase水：2瓶，100mL/瓶；
(12)侵染液：1管，50mL/管，-20℃冷冻保存备用。
2.根据权利要求1所述的一种利用高粱花叶病毒P3N-PIPO构建的亚细胞定位试剂盒，
其特征在于所述绿色荧光蛋白标记的PD定位载体pSrMV-P3N-PIPO-GFP的构建方法：使用
XhoI和HindIII对载体pSAT6-EGFP-C1进行双酶切，将酶切产物通过琼脂糖凝胶电泳进行分
离并回收；然后用T4DNA连接酶将酶切产物与插入片段S连接，并将连接产物转化至感受
态大肠杆菌(Escherichiacoli)DH5α中，挑取阳性克隆验证，得到绿色...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨永庆，程光远，彭磊，徐倩，董萌，徐景升，翟玉山，邓宇晴，郑艳茹，高世武，郭晋隆，
申请(专利权)人：福建农林大学，
类型：发明
国别省市：福建;35