检测人HSP90α‑2蛋白的荧光免疫层析试纸及其制备方法技术

本发明专利技术涉及检测人HSP90α‑2蛋白的荧光免疫层析试纸及其制备方法。所述试纸通过双抗体夹心法检测人HSP90α‑2蛋白，所述双抗体夹心法采用标记有荧光微球的第一HSP90α‑2单克隆抗体作为捕获抗体，所述第一HSP90α‑2单克隆抗体来源于序列表SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所述的序列中的一者；并且所述双抗体夹心法采用第二HSP90α‑2单克隆抗体作为检测抗体，所述第二HSP90α‑2单克隆抗体来源于序列表SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所述的序列中的另一者。本发明专利技术的荧光免疫层析试纸操作简便、快速、检测范围宽、特异性高、灵敏度好。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于多肽化学和免疫学领域，具体涉及人热休克蛋白90α-2(HSP90α-2)抗原表位肽、用该抗原表位肽制备的HSP90α-2特异性抗原和相应的单克隆抗体或多克隆抗体、所述抗体在制备人HSP90α-2体外诊断试剂盒上的应用，人HSP90α-2体外诊断试剂盒，以及一种用于定量检测待测物中人HSP90α-2蛋白的荧光免疫层析试纸及其制备方法。
技术介绍
近年来，对肿瘤标志物的研究已经引起许多研究者的注意，寻找一种可靠的、非侵入式的、能反映肿瘤的发生、增殖分化的肿瘤标志物是众多研究者的共同心愿。通过对血液、组织液的研究，目前发现一些肿瘤标志物可以对肿瘤的发生、增殖分化进行预测。其中，人热休克蛋白90α-2(HSP90α-2)就是这样的一种肿瘤标志物。热休克蛋白90α-2是热休克蛋白家族中的重要的蛋白之一，其作为分子伴侣来参与调控、维持细胞内多种蛋白的构象和功能，在调节细胞生长、分化和凋亡等方面发挥重要的作用。近年发现，热休克蛋白90α-2作为伴侣蛋白对肿瘤的恶性转变、生长、增殖及侵袭有着重要的作用。有许多报道证实，人体肿瘤组织中，热休克蛋白的表达发生了改变。在不同部位的肿瘤组织中，热休克蛋白表达的改变并不一致。目前发现肿瘤病人血清中的HSP90α-2含量与肿瘤的恶性程度，尤其是转移正相关。因此，HSP90α-2有希望作为肿瘤诊断和预后的标志物。检测血清中的HSP90α-2水平的最理想的方法为免疫检测。因此，寻找合适的具有免疫原性的HSP90α-2抗原表位肽、制备特异性的HSP90α-2抗原及抗体即成了重点。荧光免疫层析方法测血液中的待测物操作简便、快速，只需10分钟就能完成样品检测，并且检测范围宽，灵敏度好，能够迅速及时地帮助诊断病情，监测预后。中国专利申请No.200910117820.8公开了一种荧光微球免疫层析试纸条的制备方法及定量检测方法；中国专利申请No.200910047352.1公开了一种荧光免疫层析试纸及其制备方法和应用。然而，目前还没有针对人HSP90α-2蛋白的荧光免疫层析试纸。
技术实现思路
为解决上述现有技术中所存在的问题，本专利技术提供了一种用于定量检测待测物中人HSP90α-2蛋白的荧光免疫层析试纸及其制备方法。具体而言，本专利技术提供了：一种用于定量检测待测物中人HSP90α-2蛋白的荧光免疫层析试纸，该试纸通过双抗体夹心法检测所述人HSP90α-2蛋白，其中：所述双抗体夹心法采用标记有荧光微球的第一HSP90α-2单克隆抗体作为捕获抗体，所述第一HSP90α-2单克隆抗体来源于人HSP90α-2抗原表位肽(1)和(2)中的一者；并且所述双抗体夹心法采用第二HSP90α-2单克隆抗体作为检测抗体，所述第二HSP90α-2单克隆抗体来源于人HSP90α-2抗原表位肽(1)和(2)中的另一者；所述人HSP90α-2抗原表位肽(1)和(2)分别为：(1)Tyr-Glu-Lys-Glu-Ser-Glu-Asp-Lys-Pro-Glu-Ile-Glu-Asp-Val-Gly-Ser-Asp-Glu；(2)Tyr-Arg-Gly-Ile-Asp-Glu-Asp-Asp-Pro-Thr-Ala-Asp-Asp-Thr-Ser-Ala-Ala-Val-Thr-Glu。优选地，所述第一HSP90α-2单克隆抗体是由第一HSP90α-2抗原制备而成的，该第一HSP90α-2抗原是通过使所述人HSP90α-2抗原表位肽(1)和(2)中的一者与载体蛋白偶联制备而成的；并且所述第二HSP90α-2单克隆抗体是由第二HSP90α-2抗原制备而成的，该第二HSP90α-2抗原是通过使所述人HSP90α-2抗原表位肽(1)和(2)中的另一者与载体蛋白偶联制备而成的。优选地，所述荧光微球的粒径为320nm至400nm。优选地，所述荧光微球上的荧光物质为异硫氰酸荧光素、四乙基罗丹明、四甲基异硫氰酸罗丹明或X-罗丹明等，其中优选为X-罗丹明；所述荧光微球的微球材料为聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯或甲基丙烯酸甲酯的共聚物。优选地，所述荧光微球的激发波长为350～600nm，优选为390nm；发射波长为500～700nm，优选为615nm。优选地，所述荧光免疫层析试纸具有底板，并且在该底板上沿使用时的层析方向依次以接触方式设置有：样品垫、结合垫、反应膜、吸水滤纸，所述结合垫设置有所述的标记有荧光微球的第一HSP90α-2单克隆抗体，所述反应膜包括检测区和质控区，所述检测区包被有所述第二HSP90α-2单克隆抗体，所述质控区包被有能与所述的标记有荧光微球的第一HSP90α-2单克隆抗体特异性结合的抗抗体。优选地，所述反应膜为在大于550nm的波长下基本上不发荧光的硝酸纤维素膜。优选地，所述底板基本上不具有荧光性质。优选地，所述抗抗体为羊抗鼠IgG单克隆抗体或兔抗鼠IgG单克隆抗体，其中优选为羊抗鼠IgG单克隆抗体。本专利技术还提供了一种制备所述的用于定量检测待测物中人HSP90α-2蛋白的荧光免疫层析试纸的方法，其包括以下步骤：1)提供标记有荧光微球的第一HSP90α-2单克隆抗体；2)提供结合垫，其中在所述结合垫上包被所述的标记有荧光微球的第一HSP90α-2单克隆抗体；3)提供反应膜，其中在所述反应膜上沿使用时的层析方向间隔固定第二HSP90α-2单克隆抗体和抗抗体，以分别形成检测区和质控区；4)在底板上沿使用时的层析方向依次以接触方式设置样品垫、所述结合垫、所述反应膜、吸水滤纸，从而制成所述荧光免疫层析试纸。优选地，所述步骤1)包括：a)用碳二亚胺活化荧光微球，优选地，将荧光微球的水分散液或MES缓冲液分散液经超声波处理并与碳二亚胺混合，从而活化所述荧光微球；b)洗涤步骤a)所获得的活化的荧光微球，优选地，将步骤a)所获得的活化的荧光微球用N-羟基硫代琥珀酰亚胺-柠檬酸缓冲液洗涤、分散，并经超声波处理；c)用步骤b)所获得的荧光微球标记第一HSP90α-2单克隆抗体，优选地，将步骤b)所获得的荧光微球与第一HSP90α-2单克隆抗体混合，用BSA-乙醇胺缓冲液封闭，离心，用BSA-吐温水溶液分散，经超声波处理，从而得到标记有荧光微球的第一HSP90α-2单克隆抗体。优选地，在所述步骤2)中，所述的标记有荧光微球的第一HSP本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于定量检测待测物中人HSP90α‑2蛋白的荧光免疫层析试纸，该试纸通过双抗体夹心法检测所述人HSP90α‑2蛋白，其中：所述双抗体夹心法采用标记有荧光微球的第一HSP90α‑2单克隆抗体作为捕获抗体，所述第一HSP90α‑2单克隆抗体来源于人HSP90α‑2抗原表位肽(1)和(2)中的一者；并且所述双抗体夹心法采用第二HSP90α‑2单克隆抗体作为检测抗体，所述第二HSP90α‑2单克隆抗体来源于人HSP90α‑2抗原表位肽(1)和(2)中的另一者；所述人HSP90α‑2抗原表位肽(1)和(2)分别为：(1)Tyr‑Glu‑Lys‑Glu‑Ser‑Glu‑Asp‑Lys‑Pro‑Glu‑Ile‑Glu‑Asp‑Val‑G ly‑Ser‑Asp‑Glu；(2)Tyr‑Arg‑Gly‑Ile‑Asp‑Glu‑Asp‑Asp‑Pro‑Thr‑Ala‑Asp‑Asp‑Thr‑Se r‑Ala‑Ala‑Val‑Thr‑Glu。

【技术特征摘要】
1.一种用于定量检测待测物中人HSP90α-2蛋白的荧光免疫层
析试纸，该试纸通过双抗体夹心法检测所述人HSP90α-2蛋白，其中：
所述双抗体夹心法采用标记有荧光微球的第一HSP90α-2单克
隆抗体作为捕获抗体，所述第一HSP90α-2单克隆抗体来源于人
HSP90α-2抗原表位肽(1)和(2)中的一者；并且
所述双抗体夹心法采用第二HSP90α-2单克隆抗体作为检测抗
体，所述第二HSP90α-2单克隆抗体来源于人HSP90α-2抗原表位肽
(1)和(2)中的另一者；
所述人HSP90α-2抗原表位肽(1)和(2)分别为：
(1)Tyr-Glu-Lys-Glu-Ser-Glu-Asp-Lys-Pro-Glu-Ile-Glu-Asp-Val-G
ly-Ser-Asp-Glu；
(2)Tyr-Arg-Gly-Ile-Asp-Glu-Asp-Asp-Pro-Thr-Ala-Asp-Asp-Thr-Se
r-Ala-Ala-Val-Thr-Glu。
2.根据权利要求1所述的荧光免疫层析试纸，其中所述第一
HSP90α-2单克隆抗体是由第一HSP90α-2抗原制备而成的，该第一
HSP90α-2抗原是通过使所述人HSP90α-2抗原表位肽(1)和(2)中的一
者与载体蛋白偶联制备而成的；并且
所述第二HSP90α-2单克隆抗体是由第二HSP90α-2抗原制备而
成的，该第二HSP90α-2抗原是通过使所述人HSP90α-2抗原表位肽
(1)和(2)中的另一者与载体蛋白偶联制备而成的。
3.根据权利要求1所述的荧光免疫层析试纸，其中所述荧光微
球的粒径为320nm至400nm。
4.根据权利要求1所述的荧光免疫层析试纸，其中所述荧光微
球上的荧光物质为异硫氰酸荧光素、四乙基罗丹明、四甲基异硫氰酸
罗丹明或X-罗丹明等，其中优选为X-罗丹明；所述荧光微球的微球

\t材料为聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯或甲基丙烯酸甲酯的共聚物。
5.根据权利要求1所述的荧光免疫层析试纸，其中所述荧光微
球的激发波长为350～600nm，优选为390nm；发射波长为500～700nm，
优选为615nm。
6.根据权利要求1所述的荧光免疫层析试纸，其中所述试纸具
有底板，并且在该底板上沿使用时的层析方向依次以接触方式设置
有：样品垫、结合垫、反应膜、吸水滤纸，所述结合垫设置有所述的
标记有荧光微球的第一HSP90α-2单克隆抗体，所述反应膜包括检测
区和质控区，所述检...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱建安，
申请(专利权)人：深圳市安群生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44