【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体是涉及一种鼠抗人错配修复蛋白mlh1单克隆抗体、细胞株及其应用。
技术介绍
1、dna错配修复(dna mismatch repair，mmr)系统是dna的多种自我修复机制之一，其存在的目的是为了保护在dna复制过程中基因组的完整性和保真性。mmr蛋白主要通过识别并修复因理化损伤、基因重组和dna复制错误造成的碱基错配来维持遗传物质的稳定性。但当mmr基因发生种系突变或体细胞系甲基化等缺陷时，其相关蛋白将无法正常表达，从而导致相关系统的功能缺失，最终导致恶性肿瘤的易感性提高。
2、在人体内，mmr相关蛋白被称为hmutl同源体和hmuts同源体，hmlh1就是其中重要的一员。mlh1基因定位于3p21.3，是dna错配修复的高密度分布区。研究显示，mlh1在多种肿瘤组织中均有表达，其功能缺陷被认为是肿瘤发病的重要机制，已成为近年来研究的热点。mlh1基因启动子甲基化会引起mlh1基因表达的沉默，使其表达水平降低，从而致使错配修复功能的失活，导致在dna复制过程中发生错误，最终诱发肿瘤。mlh1作为mmr相关蛋白之一，在结直肠癌上表达定位于肿瘤细胞核，同时在正常大肠黏膜隐窝下1/3上皮细胞、浸润淋巴细胞及间质细胞呈阳性，可作为内对照。有研究表明，在男性结直肠癌中，mlh1表达缺失时，ki-67蛋白为高表达，进而导致患者的肿瘤复发率及转移率高，预后较差。(徐燕,雷俊平,尚松,蔺兵虎.结直肠癌中错配修复蛋白mlh1、pms2、msh2、msh6和ki-67表达的意义及与预后的关系[j].广东医学,
3、除人源癌症组织外，mlh1在多种人源癌细胞中也有不同的表现。有研究表明，mlh1在人结肠癌细胞系lovo细胞系和人宫颈癌细胞系hela细胞系中均呈阳性表达(张芸,钱瑛,余应年,汪爱今,罗建红.hela-mlh1-细胞的生物学特性检测[j].癌变畸变突变,1998；10(4):203-206./马琳.nsaids对lovo结肠癌细胞株hmlh1、hmsh2及msi作用的初步研究[d].河北:河北医科大学,2011:13-48.)。另有研究表明，结肠癌细胞系hct116是mlh1缺失型细胞系，故mlh1呈阴性表达(王亚婷.错配修复基因hmlh1在雌激素诱导结肠癌细胞株hct116凋亡中的作用[d].山西:山西医科大学,2012:2-11.)。鉴于mlh1在不同癌细胞系中的不同表达情况，mlh1可作为相关生物学研究的工具。
4、目前临床上主要通过免疫组织化学(简称免疫组化，immunohistochemistry，ihc)法检测肿瘤组织中错配修复蛋白mlh1的表达状况，其性能的优劣直接决定着整个检测的灵敏度和特异性。另外，在相关生物学研究中也需要特异性好和亲和力高的mlh1抗体。因此，研制出一种结合特异性较高的针对错配修复蛋白mlh1的单克隆抗体具有重要的意义。
技术实现思路
1、基于此，本专利技术的目的在于提供一种杂交瘤细胞株、一种特异性好、亲和力高的鼠抗人错配修复蛋白mlh1单克隆抗体及其应用。
2、实现上述目的的技术方案包括如下。
3、本专利技术第一目的在于提供一种杂交瘤细胞株，命名为鼠抗人错配修复蛋白mlh1单克隆杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株保藏于广东省微生物菌种保藏中心(简称为gdmcc)，保藏日期为2023年11月09日，保藏编号为gdmccno.64004。
4、本专利技术第二目的在于提供一种鼠抗人错配修复蛋白mlh1的单克隆抗体，由上述保藏编号为gdmcc no.64004的鼠抗人错配修复蛋白mlh1单克隆杂交瘤细胞株分泌产生。
5、或一种鼠抗人错配修复蛋白mlh1的单克隆抗体，其重链可变区的3个互补决定区cdr-vh1、cdr-vh2、cdr-vh3的氨基酸序列分别为如seq idno.1-3所示，其轻链可变区的3个互补决定区cdr-vl1、cdr-vl2、cdr-vl3氨基酸序列分别为如seq id no.4-6所示。
6、进一步地，所述单克隆抗体为小鼠igg2a亚型单克隆抗体。
7、本专利技术第三目的在于提供一种编码上述任一项所述鼠抗人错配修复蛋白mlh1的单克隆抗体或单克隆抗体抗原结合部分(互补决定区)的核酸分子。
8、进一步地，编码所述单克隆抗体重链可变区的3个互补决定区的核苷酸序列分别为如seq id no.7-9所示，或为编码表达如seq id no.1-3所示氨基酸序列的核苷酸序列，编码所述单克隆抗体轻链可变区3个互补决定区的核苷酸序列分别如seq id no.10-12所示，或为编码表达如seq id no.4-6所示氨基酸序列的核苷酸序列。
9、应当理解，考虑到密码子的简并性，在不改变编码的相应氨基酸序列的前提下，本领域的技术人员可以对上述编码基因的核苷酸序列进行修改，也属于本专利技术的范围之内。
10、应当理解，本领域的技术人员，根据本专利技术公开的错配修复蛋白mlh1的单克隆抗体的重链和轻链的互补决定区，可以通过重组表达的方式获得本专利技术的单克隆抗体，用于重组表达的表达载体包括但不限于：质粒、表达盒、重组载体或重组质粒、重组细胞或重组菌本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种单克隆杂交瘤细胞株，其特征是，所述单克隆杂交瘤细胞株保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCCNo.64004。
2.一种鼠抗人错配修复蛋白MLH1的单克隆抗体，其特征是，其由权利要求1所述的单克隆杂交瘤细胞株分泌产生。
3.一种鼠抗人错配修复蛋白MLH1的单克隆抗体，其特征是，所述单克隆抗体重链可变区的3个互补决定区CDR-VH1、CDR-VH2、CDR-VH3的氨基酸序列分别为如SEQ ID No.1-3所示，其轻链可变区的3个互补决定区CDR-VL1、CDR-VL2、CDR-VL3氨基酸序列分别为如SEQ IDNo.4-6所示的氨基酸序列。
4.根据权利要求2或3所述的单克隆抗体，其特征是，所述单克隆抗体为小鼠IgG2a亚型单克隆抗体。
5.一种编码权利要求2-4任一项所述鼠抗人错配修复蛋白MLH1的单克隆抗体或所述单克隆抗体的互补决定区的核酸分子。
6.根据权利要求5所述的核酸分子，其特征是，编码所述单克隆抗体重链的3个互补决定区的核苷酸序列分别为如SEQ ID No.7-9所示，或为编码表达如
7.权利要求2-4任一所述的鼠抗人错配修复蛋白MLH1的单克隆抗体在制备错配修复蛋白免疫检测试剂盒中的应用。
8.一种人错配修复蛋白MLH1免疫检测试剂盒，其特征是，所述试剂盒含有权利要求2-4任一所述的鼠抗人错配修复蛋白MLH1的单克隆抗体。
9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征是，所述试剂盒的检测方法为免疫学检测法。
10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征是，所述免疫学检测包括免疫组织化学法、免疫细胞化学法。
...【技术特征摘要】
1.一种单克隆杂交瘤细胞株，其特征是，所述单克隆杂交瘤细胞株保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为gdmccno.64004。
2.一种鼠抗人错配修复蛋白mlh1的单克隆抗体，其特征是，其由权利要求1所述的单克隆杂交瘤细胞株分泌产生。
3.一种鼠抗人错配修复蛋白mlh1的单克隆抗体，其特征是，所述单克隆抗体重链可变区的3个互补决定区cdr-vh1、cdr-vh2、cdr-vh3的氨基酸序列分别为如seq id no.1-3所示，其轻链可变区的3个互补决定区cdr-vl1、cdr-vl2、cdr-vl3氨基酸序列分别为如seq idno.4-6所示的氨基酸序列。
4.根据权利要求2或3所述的单克隆抗体，其特征是，所述单克隆抗体为小鼠igg2a亚型单克隆抗体。
5.一种编码权利要求2-4任一项所述鼠抗人错配修复蛋白mlh1的单克隆抗体或所述单克隆抗体的互补决定区的核酸分子。
【专利技术属性】
技术研发人员：张乾坤，夏雨霏，段方婷，游鑫，李相梅，王培瑶，王继华，郭文娟，
申请(专利权)人：广州万孚生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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