一种人胱抑素C化学发光定量检测方法技术

本发明专利技术提供了一种人胱抑素C的定量检测方法。该方法将磁微粒分离技术和酶促化学发光技术相结合，采用双抗体夹心一步反应法原理，可用于血清、血浆和尿液样本中人胱抑素C的含量测定，辅助各种肾功能损害疾病的诊断和治疗。该方法灵敏度≤0.01μg/L，定量检测范围：0.05-8μg/L,分析内精密度＜5%，检测用时10min，血清和尿液添加回收率在90-115%之间，与胶乳增强免疫比浊法试剂血清测值相关分析R2=0.9862。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，提供了一种准确、灵敏、快速、定量检测人血清、血浆和尿液样本中胱抑素C(CYS-C)的化学发光免疫检测方法。
技术介绍
胱抑素C是一种非糖化的蛋白质，是半胱氨酸蛋白酶抑制剂的一种，由122个氨基酸组成，相对分子量约为13kDa。它由大多数有核细胞以一种恒定的方式产生，由肾小球滤过，在近曲小管完全冲吸收并分解。其分子量小，生成率稳定，由于其在血清中的浓度与肾 小球滤过率(GFR)有密切的关系，并且对肾小球滤过率比肌酐更为敏感，因此胱抑素C对测定肾小球滤过率有极其重要的意义。胱抑素C完全由近曲小管重吸收，正常情况下不出现在尿液中。如果近曲小管重吸收功能有损害，尿液中胱抑素C浓度会出现明显升高。血清和血浆胱抑素C参考值范围，正常男性(O. 63-1. 25) μ g/ml，正常女性(0· 54-1. 15) μ g/ml，大于50岁正常人(O. 6-1.55) μ g/ml。正常人尿液参考值范围0. 25-0. 317 μ g/ml。目前检测胱抑素C的方法主要有胶乳增强免疫比浊法、酶联免疫法、化学发光法等。乳胶增强免疫比浊法的优点是检测特异性好、操作简单、精密度本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人胱抑素C的化学发光定量检测方法，其特征在于其是一种基于磁微粒分离技术和酶促化学发光技术的双抗体夹心一步反应法免疫检测方法，该检测方法包含了免疫反应、洗涤和加底物溶液检测发光强度的步骤，使用的试剂盒主要由试剂1、试剂2和磁分离试剂组成，其中试剂1为含荧光素（FITC）标记的抗人胱抑素C抗体的缓冲液，试剂2为含碱性磷酸酶（ALP）标记的抗人胱抑素C抗体的缓冲液，磁分离试剂为含包被有抗FITC抗体的磁微粒的缓冲液。

【技术特征摘要】
1.一种人胱抑素C的化学发光定量检测方法，其特征在于其是一种基于磁微粒分离技术和酶促化学发光技术的双抗体夹心一步反应法免疫检测方法，该检测方法包含了免疫反应、洗涤和加底物溶液检测发光强度的步骤，使用的试剂盒主要由试剂1、试剂2和磁分离试剂组成，其中试剂I为含荧光素(FITC)标记的抗人胱抑素C抗体的缓冲液，试剂2为含碱性磷酸酶(ALP)标记的抗人胱抑素C抗体的缓冲液，磁分离试剂为含包被有抗FITC抗体的磁微粒的缓冲液。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于其检测步骤包含1)免疫反应将待测样本原液与试剂1、试剂2和磁分离试剂混匀，温育；2)洗涤使磁微粒在磁场中沉降，去除上清，加入清洗液，去除磁场，震荡，磁分离，再去除上清，此步骤重复2-3次；3)加底物溶液检测发光强度在检测管中加入碱性磷酸酶催化的化学发光底物，震荡，检测单位时间内发光强度。3.根据权利要求书I或2所述的检测方法，其特征在于其检测步骤包含1)免疫反应在检测管中加入2-10μ I待测样本原液，然后加入100-200 μ I试剂1，100-200 μ I试剂2，20-100 μ I磁分离试剂，混匀，37± 1°C条件下温育2_15min ；2)洗涤使磁微粒在磁场中沉降，去除上清，加入300-1000μ I的清洗液，去除磁场，震荡使磁微粒充分混悬，然后磁分离，去除上清；此步骤重复2-3次；3)加底物溶液检测发光强度在检测管中加入100-300μ I碱性磷酸酶催化的化学发光底物，震荡使磁微粒充分混悬，检测单位时间内发光强度。4.根据权利要求1-3任一项所述的试剂盒，其特征在于主要由试剂1、试剂2...

【专利技术属性】
技术研发人员：不公告发明人，
申请(专利权)人：北京利德曼生化股份有限公司，
类型：发明
国别省市：