本发明专利技术公开了一种用于糖链抗原125检测的化学发光定量检测试剂盒，该试剂盒包括CA125检测反应板，反应板包被有抗CA125抗体。CA125检测试剂盒，还包括：酶结合物，发光底物，校准品，质控品，浓缩洗涤液。本发明专利技术可以专一的定量检测出病人血清CA125的含量，诊断卵巢癌并能根据CA125的水平判断肿瘤大小和肿瘤分型。与传统的ELISA技术相比，本发明专利技术不仅保留了ELISA技术的高度特异性，检测结果的稳定性、可靠性和操作的简便性，同时采用的化学发光法能提高检测的灵敏度。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于体外临床检验和化学发光免疫法
，尤其涉及一种用于卵巢癌 检测的反应板及试剂盒。
技术介绍
近半个世纪以来，肿瘤的发病率和死亡率逐年升高，成为医学界热点中的热点。20 世纪70年代，美国提出的向“肿瘤进军”反映了社会对肿瘤死亡率居高不下的焦虑，同时， 在过去的几十年中，肿瘤标志在技术上和定义上有了突破，这一切都促使了肿瘤标志研究 的快速发展。糖链抗原125 (Carbohydrate Antigen 125，CA125)是 1981 年发现的，是一种高相 对分子量的糖蛋白(> 200kD)，含24%的碳水化合物，表达于卵巢上皮肿瘤和缪勒管来源 的病理性和正常组织，但其生理学功能尚不清楚。Bast及其同事以一个乳头状囊性卵巢腺癌细胞株(0VCA433)制备了单克隆抗体 0C125，可识别CA125的抗原决定簇。0C125克隆与0VCA433细胞株发生反应，但不与同一个 患者的B淋巴细胞株发生反应。0C125的抗原决定簇和胚胎发育期卵巢腔上皮的大相对分 子质量的糖蛋白相关，能检测出常见的非黏液性卵巢上皮细胞癌，但不易检测出内膜细胞 癌和透明细胞癌。CA125是卵巢癌的标志。健康人群血清CA125含量很低，其上限为35kU/L。卵巢 癌患者中，50% I期，90%的II期和超过90%的III期和IV期患者CA125水平升高，其水 平和肿瘤大小、肿瘤分期相关。CA125在鉴别卵巢包块的良恶性上特别有价值。Einhorn及 同事研究了 100名腹腔镜诊断为附件明显肿块的患者，其中23人属于恶性肿瘤。以35kU/ L为临界值，恶性肿瘤的预测值为敏感性为78%，特异性为95%，阳性预测值为82%，阴性 预测值为91%，能协助制订正确的手术方案，而且肿瘤分化不影响CA125的水平。术前CA125水平低于65kU/L的卵巢癌患者5年生存率为42%，明显高于> 65kU/ L患者。术后CA125水平及下降的比例对生存率也有预测作用。正常情况下，CA125的半衰 期为4. 8天。CA125的半衰期为22天的患者比9天的患者对化疗的敏感性差。利用CA125还可以判断残存肿瘤情况，CA125估计再手术的敏感性为50%，特异 性为96%。第一个化疗期后，CA125水平可提示疾病的预后，如能降至原来水平的1/10，表 明病情转归良好；三个化疗周期后，CA125水平持续升高预后较差。CA125预测肿瘤复发、 转移的精确度为75%。从CA125升高到出现临床症状有3 4个月。80% 90%病例中， CA125与疾病的预后和转轨有关。除了卵巢癌外，子宫内膜癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、结直肠癌和其他胃肠道癌症均 可升高，尤其是在判断子宫内膜癌的预后中有临床价值。在某些良性疾病如肝癌、肝硬化、 子宫内膜异位症、包心炎、早期妊娠、妇女黄体期也可升高，还可以用来评价晚期子宫内膜 炎的病情。上世纪70年代中期Arakawe首次报道用发光信号进行酶免疫分析，利用发光的化学反应分析超微量物质，特别是用于临床免疫分析中检验超微量活性物质。目前， 这一技术已从实验室的稀有技术过渡到临床医学的常规检测手段。化学发光免疫分析 (Chemiluminescencelmmunoassay, CLIA)是将化学发光或生物发光体系与免疫反应相结 合，用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记免疫测定技术。其检测原理与放射免疫(RIA) 和酶免疫(EIA)相似，不同这处是以发光物质作为底物，并藉助其自身的发光强度直接进 行测定。在化学发光免疫分析中包含两个部分，即免疫反应系统和化学发光系统。免疫反 应系统，其基本原理同酶联免疫技术(ELISA)。化学发光系统的原理在于免疫反应中的酶作 用于发光底物。 发光底物在酶的作用下，底物发生化学反应并释放出大量的能量，产生激发 态的中间体。这种激发态中间体，当其回到稳定的基态时，可同时发射出光子。利用发光信 号测量仪器即可测量光量子产额，该光量子产额与样品中的待测物质的量成正比。由此可 以建立标准曲线并计算样品中待测物质的含量。化学发光免疫分析既具有放射免疫的高灵敏度，又具有酶联免疫的操作简便、快 速的特点，易于标准化操作。且测试中不使用有害的试剂，试剂保持期长，应用于生物学、医 学研究和临床实验诊断工作，成为非放射性免疫分析法中最有前途的方法之一。
技术实现思路
本专利技术将化学发光技术与免疫分析技术相结合，提供了一种简便，快速，稳定的检 测CA125的试剂盒。本专利技术的技术方案如下一种糖链抗原125化学发光定量检测试剂盒，包括反应板，酶结合物，发光底物， 校准品，质控品，浓缩洗涤液，所述的反应板包被有抗糖链抗原125抗体。所述的校准品以糖链抗原125纯品配制，浓度为0、10、20、40、80、200、500U/ml。所述的质控品以糖链抗原125纯品配制，由质控品I和质控品II两部分组成，质 控品I的浓度为10 40U/ml，质控品II的浓度为100 150U/ml。所述的质控品I的浓度优选为31. 2U/ml，质控品II的浓度优选为120. 6U/ml。所述的酶结合物为HRP标记的抗糖链抗原125抗体；所述的反应板材质是不透明 的聚苯乙烯或聚乙烯，所述的发光底物为鲁米诺、异鲁米诺或其衍生物，所述的浓缩洗涤液 是ρΗ7· 0 ρΗ8· 0的中性缓冲液。本专利技术可以专一的定量检测出病人血清CA125的含量，诊断卵巢癌，并可根据其 含量，判断肿瘤大小及肿瘤分期。同时还能判断子宫内膜癌的预后。与传统的ELISA技术相 比，本专利技术不仅保留了 ELISA技术的高度特异性，检测结果的稳定性、可靠性和操作的简便 性，同时采用的化学发光法能提高检测的灵敏度。本试剂盒设计完善，包含各种应有试剂， 使检测结果更为精确、可信。附图说明图1本专利技术的CA125定量检测试剂盒的血清检测结果与罗氏试剂盒检测结果的相 关性。具体实施例方式下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本 专利技术而不用于限制本专利技术的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照 常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆实验室手册(New York Co Id Spring Harbor LaboratoryPress, 1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例1 CA19-9定量检测试剂盒的制备其步骤主要是⑴抗CA125的抗体包被板制备(CA125检测反应板的制备)；(2) 酶标抗体的制备；(3)CA125校准品的制备；(4)CA125质控品的制备；(5)化学发光底物液 的制备；(6)洗涤液制备；(7)半成品及成品组成(1)抗CA125的抗体包被板制备a.包被取 lmol/L Na2HPO4 77. 4ml 和 lmol/L NaH2PO4 22. 6ml 混勻，加入去离子 水定容至IOOOml即成10倍包被液，临用前稀释十倍，加入适量抗CA125单抗(购自瑞典康 乃格)混勻，然后加入到微孔板板孔中，ΙΟΟμΙ/孔，4°C 16小时；b.封闭弃去包被液，在吸水纸纸上拍干，加入含有3% BSA和0.05%防腐剂 (Procl in 300)的磷酸盐缓冲液(pH 7. 4), 200 μ 1/ 孔，37°C 本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种糖链抗原１２５化学发光定量检测试剂盒，其特征在于，包括反应板，酶结合物，发光底物，校准品，质控品，浓缩洗涤液，所述的反应板包被有抗糖链抗原１２５抗体。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：穆海东，汪宁梅，穆宇豪，李胡丹，
申请(专利权)人：上海裕隆生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：31
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