新冠病毒IgM和IgG抗体胶体金法检测试剂盒制造技术

本申请公开了一种新冠病毒IgM和IgG抗体胶体金法检测试剂盒，其包括：盒体、样品稀释液和检测试纸；所述检测试纸安装于盒体内部、包括：塑料支撑板、上样垫、胶体金垫、硝酸纤维素NC膜、检测线T1、检测线T2、质控C线和吸样垫；所述胶体金垫上有胶体金标记的新冠抗原S蛋白RBD。本申请能够实现对新型冠状病毒COVID‑19更早期、更准确、更快捷、更有效的检测。

【技术实现步骤摘要】
新冠病毒IgM和IgG抗体胶体金法检测试剂盒
本申请属于涉及新冠病毒的抗体检测
，具体来说涉及一种新冠病毒IgM和IgG抗体胶体金法检测试剂盒。
技术介绍
2019年12月中旬，发现了病因不明的非典型肺炎(atypicalpneumonia)，科学研究表明，其是由一种新型冠状病毒COVID-19引发的。新型冠状病毒COVID-19感染的肺炎以发热、乏力、干咳等为主要表现，少数患者伴有鼻塞、流涕、腹泻等上呼吸道和消化道症状。重症病例多在1周后出现呼吸困难，严重者快速进展为急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克、难以纠正的代谢性酸中毒和出凝血功能障碍。迄今COVID-19还没有针对性的特效药。一些个案报道的治疗药物仍需更多的临床实践证明效果，相关疫苗的研发也在开展中，但距离临床应用尚需时间。当务之急是尽快研究有效的诊断试剂，早诊断、早隔离、切断传播途径，控制疫情蔓延。新型冠状病毒COVID-19核酸检测有较高的特异性和灵敏度，但是该检测方法对技术要求高，容易出现假阴性，标本需要特殊处理，要求具备PGR扩增仪及凝胶电泳等专业的仪器设备，对新型冠状病毒的检测用时长，需专业技术人员操作和判断检测结果，无法应用于社区、基层医院、机场、海关甚至家庭等基层的早期初步筛查。因此，如何更早期、更准确、更快捷、更有效的检测新型冠状病毒COVID-19，是本领域技术人员需要研究的方向。
技术实现思路
本申请的目的是提供一种新冠病毒IgM和IgG抗体胶体金法检测试剂盒。能够实现对新型冠状病毒COVID-19更早期、更准确、更快捷、更有效的检测。其采用的技术方案如下：一种新冠病毒IgM和IgG抗体胶体金法检测试剂盒，其包括：盒体和检测试纸；所述检测试纸安装于盒体内、包括：塑料支撑板、上样垫、胶体金垫、硝酸纤维素NC膜、检测线T1、检测线T2、质控C线和吸样垫；所述胶体金垫上有胶体金标记新冠抗原S蛋白RBD；所述塑料支撑板粘贴于所述上样垫一端；所述上样垫另一端紧密压接于胶体金垫一端，所述胶体金垫另一端紧密压接于硝酸纤维素NC膜一端；所述硝酸纤维素NC膜另一端连接吸样垫；所述检测线T1有包被于硝酸纤维素NC膜的抗人IgM抗体；所述检测线T2有包被于硝酸纤维素NC膜的抗人IgG抗体；所述质控C线有包被于硝酸纤维素NC膜的抗鸡抗体；所述盒体表面设有位置对应于上样垫的加样孔。具体来说：所述抗人IgM抗体和抗人IgG抗体的浓度为10～15ug/mL；所述样品稀释液为含磷酸钠、磷酸氢钠及氯化钠的混合水溶液。优选的是，上述新冠病毒IgM和IgG抗体胶体金法检测试剂盒中：所述上样垫采用玻璃纤维膜或无纺布构成，所述吸样垫采用吸水滤纸组成。优选的是，上述新冠病毒IgM和IgG抗体胶体金法检测试剂盒中：所述抗原新冠抗原S蛋白RBD，抗原利用基因工程重组表达纯化。基于上述检测试剂盒，本申请还公开了一种新冠病毒IgM和IgG抗体胶体金法检测试剂盒的使用方法，其包括如下步骤：S1：检测试纸装配方法；S2：对抗人IgM，IgG抗体进行包被；S3：制备含有胶体金标记的新冠抗原S蛋白RBD的胶体金垫；S4：新冠病毒IgM和IgG检测。优选的，所述步骤S2包括：S21：以0.01MpH7.2磷酸盐缓冲液(PBS)将抗人IgM抗体配制成1～2mg/mL的溶液；S22：以0.01MpH7.2磷酸盐缓冲液(PBS)将抗人IgG抗体配制成1～2mg/mL的溶液；S23：用喷膜仪在NC膜下部以1～1.5ul/cm的参数进行划线；S24：包被检测线T1和T2，同时在硝酸纤维素NC膜上部包被抗鸡抗体作为质控C线；S25：将划线后的NC膜放置于干燥间，保持温度20-25℃，湿度小于30％的环境干燥2-5小时。优选的，所述步骤S3包括：S31：以氯金酸一柠檬酸三钠还原法制备直径为30～50nm的胶体金溶液；S32：将S31制备所得胶体金液取100ml放在烧杯内，以0.2MK2C03调至pH8.5，按100mL胶体金溶液加入0.5～2mg新冠抗原S蛋白RBD，室温搅拌2小时；S33：加入1％牛血清白蛋白BSA，1％聚乙二醇PEG20000封闭20min，12000r/m离心30分钟，弃上清；S34：用胶体金工作液复溶至100mL，按1mL溶液铺20cm2的比例均匀地铺在上样垫上；S35：将上样垫置于干燥间，在温度20～25℃，湿度小于30％的环境下，干燥2～5小时制成胶体金垫。优选的，所述步骤S1包括：S11：在干燥室内，温度20～25℃，湿度小于40％，取塑料支撑板板，将已包被的硝酸纤维素NC膜放置在塑料支撑板的中部粘贴；S12：在硝酸纤维素NC膜检测T线一侧搭接胶体金垫(搭胶体金垫的1/3)粘贴，在胶体金垫另一侧搭接粘贴上样垫，搭胶体金垫的1/5；S13：在硝酸纤维素NC膜质检C线一侧搭接吸样垫，搭吸样垫的1/10；最后用裁剪机将贴好塑料板切成2～5mm宽的试纸条，切好的试纸条可以再装入盒体内，形成检测试剂盒。优选的，所述步骤S4包括：S41：将被检血清或血浆平衡至室温，将试纸条平放，在上样垫上加入5～20uL被检样品，再加入50～100uL的样品稀释液，使胶体金溶解并在硝酸纤维素NC膜上层析；S42：用肉眼直接观察在15分钟内C、T1、T2线的出现情况，并判定检测结果。与现有技术相比，本申请提供的利用免疫层析胶体金技术检测新冠病毒IgM和IgG抗体的新型试剂盒，采用胶体金标记S蛋白RBD，包被抗人IgM和IgG抗体实现对血液中抗新冠病毒抗体的检测，能够一次检测获得两种检测指标，从而节约了时间和成本，减轻患者的痛苦，具有操作简便、反应快速、敏感性高、特异性强、适合现场检测和经济实用的特性。附图说明下面结合附图与具体实施方式对本申请作进一步详细的说明：图1为实施例1中检测试剂盒的俯视结构示意图；图2为实施例1中检测试剂盒的内部结构示意图，本图中省略了盒体。各附图标记与部件名称对应关系如下：1、盒体；2、塑料支撑板；3、上样垫；4、胶体金垫；5、硝酸纤维素NC膜；6、检测线T1；7、检测线T2；8、质控C线；9、吸样垫；11、加样孔。具体实施方式为了更清楚地说明本申请的技术方案，下面将结合各个实施例作进一步描述。如图1-2所示为实施例1：一种新冠病毒IgM和IgG抗体胶体金法检测试剂盒，其包括：盒体1和检测试纸；所述检测试纸安装于盒体1内、包括：塑料支撑板2、上样垫3、胶体金垫4、硝酸纤维素NC膜5、检测线T16、检测线T27、质控C线8和吸样垫9；所述胶体金垫4上标记有新冠抗原S蛋白RBD；所述塑料支撑板2粘贴于所述上样垫3一端；所述上样垫3另一端紧密压接于胶体金垫4一端，所述胶体金垫4另一端紧密压接于硝酸纤维素NC膜一端；所述硝酸纤维素NC5膜另一端连接吸样垫；所述检测线T16本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种新冠病毒IgM和IgG抗体胶体金法检测试剂盒，其特征在于包括：盒体(1)和检测试纸；/n所述检测试纸安装于盒体(1)内、包括：塑料支撑板(2)、上样垫(3)、胶体金垫(4)、硝酸纤维素NC膜(5)、检测线T1(6)、检测线T2(7)、质控C线(8)和吸样垫(9)；/n所述胶体金垫(4)上有胶体金标记新冠抗原S蛋白RBD；所述塑料支撑板(2)粘贴于所述上样垫(3)一端；所述上样垫(3)另一端紧密压接于胶体金垫(4)一端，所述胶体金垫(4)另一端紧密压接于硝酸纤维素NC膜一端；所述硝酸纤维素NC膜(5)另一端连接吸样垫；所述检测线T1(6)划有包被于硝酸纤维素NC膜(5)的抗人IgM抗体；所述检测线T2(7)有包被于硝酸纤维素NC膜(5)的抗人IgG抗体；所述质控C线(8)有包被于硝酸纤维素NC膜(5)的抗鸡抗体；所述盒体(1)表面设有位置对应于上样垫(3)的加样孔(11)。/n

【技术特征摘要】
1.一种新冠病毒IgM和IgG抗体胶体金法检测试剂盒，其特征在于包括：盒体(1)和检测试纸；
所述检测试纸安装于盒体(1)内、包括：塑料支撑板(2)、上样垫(3)、胶体金垫(4)、硝酸纤维素NC膜(5)、检测线T1(6)、检测线T2(7)、质控C线(8)和吸样垫(9)；
所述胶体金垫(4)上有胶体金标记新冠抗原S蛋白RBD；所述塑料支撑板(2)粘贴于所述上样垫(3)一端；所述上样垫(3)另一端紧密压接于胶体金垫(4)一端，所述胶体金垫(4)另一端紧密压接于硝酸纤维素NC膜一端；所述硝酸纤维素NC膜(5)另一端连接吸样垫；所述检测线T1(6)划有包...

【专利技术属性】
技术研发人员：穆海东，汪宁梅，李敏，
申请(专利权)人：上海裕隆生物科技有限公司，
类型：新型
国别省市：上海;31