本发明专利技术公开了一种醛固酮ALD化学发光免疫定量检测试剂盒，本发明专利技术试剂盒包含ALD抗体包被板、ALD酶结合物、ALD校准品、ALD质控品、发光液A液和B液、20倍浓缩洗液。制备本发明专利技术试剂盒包含以下步骤：1）ALD抗体包被板的制备；2）ALD酶结合物的制备；3）配制不同浓度的ALD校准品；4）ALD质控品的制备；5）配制发光液A液和B液；6)配制20倍浓缩洗液；7）组装：将上述试剂组装成盒，储存于2～8℃；8）对采用该方法制得的试剂盒进行物理检查，并对准确度、剂量-反应曲线的线性、精密度、特异性、灵敏度、质控品的测定值和稳定性进行测定。本发明专利技术试剂盒与现有试剂盒相比操作简单，灵敏度高，特异性好。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及免疫分析医学领域，具体的涉及醛固酮(ALD)化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
高血压(Hypertension)是ー种世界性的常见疾病，世界各地的患病率高达109Γ20%，并可导致脑血管、心脏、肾脏的病变，是危害人类健康的主要疾病。据卫生部最新数据，我国现有高血压患者2亿多人，随着经济发展，人民生活水平的提高，高血压已日益成为ー个重要的公共卫生问题。醛固酮(aldosterone，ALD)是肾上腺皮质激素的ー种，具有代表性的强电解质代 谢作用的盐皮质类固醇。其作用是保钠排钾(増加Na+和Cl—的回放，排出K+和H+)、维持电解质平衡与体液容量恒定。ALD是由肾上腺皮质球状带生成，并受肾脏分泌的血管紧张肽原酶，即血管紧张素的调节。醛固酮是人体内调节血容量的激素，通过调节肾脏对钠的重吸收，維持水平衡。醛固酮是调节细胞外液容量和电解质的激素，醛固酮的分泌，是通过肾素-血管紧张素系统实现的。当细胞外液容量下降时，刺激肾小球旁细胞分泌肾素，激活肾素-血管紧张素-醛固酮系统，醛固酮分泌増加，使肾脏重吸收钠增加，进而引起水重吸收增加，细胞外液容量增多；相反，细胞外液容量增多时，通过上述相反的机制，使醛固酮分泌減少，肾重吸收钠水減少，细胞外液容量下降。血钠降低，血钾升高同样刺激肾上腺皮质，使醛固酮分泌増加。血浆中ALD水平的检测，对于原发性醛固酮增多症的诊断和疗效观察、Addisons病(阿狄森氏病又称原发性慢性肾上腺皮质机能減退症)的诊断及肾上腺皮质增生、继发性醛固酮增多症等的鉴别诊断有临床价值。目前临床上常用的測定醛固酮(ALD)的方法是放射免疫分析技术(RIA)和酶联免疫分析法(ELISA)，但是这两种方法存在诸多不足，例如RIA存在放射性污染、标记物半衰期短、对操作者具有放射性损伤，且操作繁琐，时间长等缺点；而ELISA灵敏度低，检测范围窄；随着标记免疫技术的迅速发展，各种新的检测方法层出不穷，例如时间分辨免疫分析法、免疫荧光法、化学发光法等。其中，化学发光免疫分析(CLIA)是将化学发光和酶免疫分析结合在此技术上发展起来的，起步于80年代初，在90年代得到了快速发展和应用，是当今最为敏感的微量免疫測定法，具有灵敏度高(检测极限10_17 10_19)、可測定物质浓度范围宽、试剂有效期长、操作简单快速、稳定性好、安全无环境污染等优点，目前已广泛应用到基础和临床医学的各个领域，成为取代RIA和ELISA的首选技术。但目前使用的化学发光免疫分析(CLIA)測定醛固酮(ALD)的灵敏度普遍低，而且测定范围较窄。
技术实现思路
本专利技术要解决的问题是提供ー种醛固酮(ALD)化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法，解决了灵敏度低，检测范围窄的缺陷。为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是醛固酮化学发光免疫定量检测试剂盒,包含ALD抗体包被板；ALD酶结合物；ALD 校准品；ALD 质控品；发光液A和发光液B;20倍浓缩洗液。其中，所述的ALD抗体包被板的固相载体为96孔或48孔的白色微孔板；所述的 ALD酶结合物使用的酶是辣根过氧化物酶。所述的ALD质控品包括低值质控品(QcL)和高值质控品(QcH)，其中低值质控品的浓度范围是124. 93 187. 39pg/mL，高值质控品的浓度范围是1640. 33 2460. 50pg/mL。所述的发光液A包含O. 7g/L鲁米诺和O. 165g/L对碘酚；发光液B包含O. 675g/L过氧化脲；所述的20倍浓缩洗液包含75. 5g/L Tris, 120g/LNaCl,5mL/L Tween-20,lg/L Proclin300。本专利技术还提供了上述试剂盒的制备方法，包含以下步骤I) ALD抗体包被板制备；包被板制备包括以下步骤a将ALD抗体用O. 02M pH7. 4磷酸盐缓冲液稀释至I 10ug/mL，加入到固相载体中，2 8°C包被20 24小时；b弃去孔内液体，用pH7. 4PBS-T缓冲液洗板，然后加入含有O. 5%BSA的磷酸盐缓冲液封闭微孔板，2 8°C封闭20 24小时；c弃去孔内液体，甩干后于30 37°C烘干16 30小时；d装入铝箔袋，加入干燥剂，封ロ，贴标签，储存于2 8°C。2)用辣根过氧化物酶标记ALD，得ALD酶结合物；ALD酶结合物的制备包括以下步骤a将O-(羧甲基)羟胺和ALD溶解在こ醇中，使其浓度分别为5m mo I/L和2mmol/L，在沸水浴中反应90min ；b浓缩后，加入40mL 7jC,用こ醚抽提，抽提物用Na2S04干燥，将其溶于O. 01mol/L的氢氧化钠溶液中，得II液；c将EDC溶解在pH8. O的PBS缓冲液中，得I液；d将HRP溶于PH7. 4的PBS缓冲液中，得III液；e将II液与III液混合，然后逐滴加入I液，在4°C搅拌16小时，用O. OlMPBS使之充分透析。3)配制不同浓度的ALD校准品将ALD用校准品稀释液稀释成不同浓度的校准品，浓度分别为 0,40,120, 360,1000, 3000pg/mL ；4)质控品的配制在正常人血清中加入适量的ALD纯品，配制低值质控品(QcL)和高值质控品(QcH)，其浓度的平均值分别为156. 16pg/mL和2050. 41pg/mL。5)配制发光液A，发光液B ；6)配制20倍浓缩洗液；7)组装将上述试剂组装成盒，储存于2 8°C ；8)对采用该方法制得的试剂盒进行物理检查，并对准确度、剂量-反应曲线的线性、精密度、特异性、灵敏度、质控品的測定值和稳定性进行測定。辣根过氧化物酶(HRP)纯度要求RZ彡3. O,活性彡250U/mL。根据本专利技术的方法，ALD抗体包被板是包被含有ALD抗体的96孔或48孔的白色微孔板；所述的ALD酶结合物使用的酶是辣根过氧化物酶；所述的发光液A包含鲁米诺和对碘酚，发光液B包含过氧化服。本专利技术方法制备的试剂盒采用如下具体形式，其包含ALD抗体包被的96孔或48孔的白色微孔板、辣根过氧化物酶标记的ALD、不同浓度的ALD校准品、发光液A液为鲁米诺和对碘酚、发光液B液为过氧化脲、20倍浓缩洗液为配方为75. 5g/L Tris, 120g/L NaCl, 5mL/L Tween-20,lg/LProclin300oProClin300以其广谱活性、优越的兼容性和稳定性及其在使用浓度下的低毒性，ProClin300成为用于诊断试剂的理想高效防腐剂。Proclin300防腐剂可在更长的时间内根除细菌、真菌及酵母，从而延长产品的储存时间。其水溶性确保其可轻易溶入所需试剂中。特别是，ProClin300防腐对大多数的酶或抗体交联反应的功能无影响，所以不会干扰检验指示剂。本专利技术的醛固酮(ALD)定量检测试剂盒，采用目前最为敏感的免疫測定方法——化学发光免疫分析技木，醛固酮(ALD)定量检测试剂盒(化学发光法)采用竞争法检测人血清、血浆中的醛固酮含量。样本加到固相含有ALD抗体的白色不透明的板条微孔中，再加入ALD-辣根过氧化物酶(HRP)结合物，此酶结合物与样本中的ALD竞争结合固相ALD抗体。洗掉游离成分。加入底物工作液，在氧化剂作用下，HRP催化鲁米诺生成处于激发态的氨基邻苯ニ甲酸离子，其恢复到基态时，释本文档来自技高网...
【技术保护点】
醛固酮化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含：ALD抗体包被板；ALD酶结合物；ALD校准品；ALD质控品；发光液A液和B液；20倍浓缩洗液。
【技术特征摘要】
1.醛固酮化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含 ALD抗体包被板； ALD酶结合物； ALD校准品； ALD质控品； 发光液A液和B液； 20倍浓缩洗液。2.根据权利要求I所述的醛固酮化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述的ALD抗体包被板是包被含有ALD抗体的96孔或48孔的白色微孔板。3.根据权利要求I所述的醛固酮化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述的ALD抗原酶结合物使用的酶是辣根过氧化物酶，要求纯度RZ ^ 3. 0，活性> 250U/mL。4.根据权利要求I所述的醛固酮化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于ALD质控品包括低值质控品和高值质控品，其中低值质控品的浓度范围是124. 93 187. 39pg/mL,高值质控品的浓度范围是1640. 33 2460. 50pg/mL。5.根据权利要求I所述的醛固酮化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述的发光液A包含O. 7g/L鲁米诺和O. 165g/L对碘酚；发光液B包含O. 675g/L过氧化脲。6.根据权利要求I所述的醛固酮化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述的20 倍浓缩洗液包含 75. 5g/LTris, 120g/LNaCl, 5mL/LTween-20, lg/LProclin300。7.一种制备所述权利要求I的试剂盒的方法，其特征在于包含以下步骤 1)ALD抗体包被板制备； 2)ALD酶结合物的制备； 3)配制不同浓度的ALD校准品； 4)ALD质控品的配制； 5)配制发光液A液和B液； 6)配制20倍浓缩洗...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘萍，张影，宋启超，范利花，
申请(专利权)人：博奥赛斯天津生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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