一种猫冠状病毒检测引物探针组合物、试剂盒及方法技术

本发明专利技术涉及生物医学技术领域，具体涉及一种猫冠状病毒检测引物探针组合物、试剂盒及方法，包括：第一组引物和探针，为基于如SEQ ID NO.7所示的核苷酸序列设计的；第二组引物和探针，为基于如SEQ ID NO.8所示的核苷酸序列设计的；如SEQ ID NO.7所示的核苷酸序列为对应猫冠状病毒7b基因的靶标序列，如SEQ ID NO.8所示的核苷酸序列为对应猫源性样本管家基因Rpp的基因的靶标序列，由于猫源性样本管家基因Rpp的基因普遍存在于样本中，特异性高且高度保守，通过设置Rpp基因作为内源性内标可以对待测样本的采集、运输和提取过程中进行监控，提高灵敏度、特异性，降低假阳性、假阴性率。假阴性率。假阴性率。

【技术实现步骤摘要】
一种猫冠状病毒检测引物探针组合物、试剂盒及方法


[0001]本专利技术涉及生物医学
，具体涉及一种猫冠状病毒检测引物探针组合物、试剂盒及方法。

技术介绍

[0002]猫冠状病毒(Feline coronavirus，FCoV)是一种有囊膜不分节段的单股正链RNA病毒，FCoV属于尼多病毒目，冠状病毒科，冠状病毒属。据统计，家庭饲养的猫有25％～40％为冠状病毒阳性，而在大型猫舍或是繁殖猫舍中，阳性率达到80％～100％。虽然感染后可能完全没有临床症状，但是可能会发生死亡率非常高的猫传染性腹膜炎，本病常发于四岁以下的年轻成猫，尤其常发于群聚饲养的猫群。目前，对猫传染性腹膜炎无有效的疫苗预防，也无有效的药物治疗。因此，对于FCoV的管理与控制，快速、准确的检测是至关重要的。
[0003]目前核酸检测的方法很多，如聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)、恒温扩增反应等。荧光定量PCR法以具有较优的灵敏度、特异性，假阳性、假阴性率相对较低的优势成为比较理想的病毒检测方法。然而在检测过程中，采集的样本难本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种猫冠状病毒检测引物探针组合物，其特征在于，包括：第一组引物和探针，为基于如SEQ ID NO.7所示的核苷酸序列设计的；第二组引物和探针，为基于如SEQ ID NO.8所示的核苷酸序列设计的。2.根据权利要求1所述的猫冠状病毒检测引物探针组合物，其特征在于，第一组引物和探针，包括：正向引物FCoV
‑
F，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；反向引物FCoV
‑
R，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；和/或探针FCoV
‑
P，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；第二组引物和探针，包括：正向引物RPP
‑
F，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；反向引物RPP
‑
R，其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；和/或探针RPP
‑
P，其核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。3.根据权利要求2所述的猫冠状病毒检测引物探针组合物，其特征在于，所述探针FCoV
‑
P、探针RPP
‑
P的5
’
端标记有荧光基团，3
’
端标记有荧光淬灭基团；所述探针FCoV
‑
P和探针RPP
‑
P的荧光基团不同；可选的，所述荧光基团选自FAM、VIC、CY5、ROX、HEX、JOE、NED、Texas Red和CY3中的至少1种；可选的，所述荧光淬灭基团选自BHQ
‑
1、BHQ
‑
2、BHQ
‑
3和MGB中的至少1种。4.一种猫冠状病毒检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1
‑
3任一项所述的猫冠状病毒检测引物探针组合物。5.根据权利要求4所述的猫冠状病毒检测试剂盒，其特征在于，还包括DNA聚合酶、dNTP、Mg
2+
、ROX染料、PCR增强剂、PCR稳定剂、PCR缓冲液、样本采集液、阴性质控品或阳性质控品。6.根据权利要求5所述的猫冠状病毒检测试剂盒，其特征在于，PCR增强剂为BSA；和/或，PCR缓冲液含Tris为10mM
‑
500mM、氯化盐为10mM
‑
500mM、(NH4)2SO4为10mM
‑
500mM、甘油为1v/v％
‑
50v/v％、BSA为0.001mg/mL
‑
1mg/mL、Tween 20为0.1v/v％
‑
10v/v％、二硫苏糖醇为1mM
‑
100mM、甜菜碱为0.1M
‑
3M、DMSO为0.1v/v％
‑
10v/v％，pH值为7.5
‑
9.5；和/或，样本采集液包括碳酸氢钠浓度范围为6<...

【专利技术属性】
技术研发人员：王蕾，谭业平，郭存杰，徐司雨，欧卫军，
申请(专利权)人：南通伊仕生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：