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一种用亲和素化的荧光量子标记的免疫印迹定量检测蛋白的方法技术

技术编号:2620278 阅读:485 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
一种用亲和素化的荧光量子标记的免疫印迹定量检测蛋白的方法,属于免疫检测技术领域。本发明专利技术首先将待测蛋白跑电泳,跑完电泳的凝胶进行半干式western blotting蛋白转移,将凝胶中的待测蛋白转移至聚偏二氟乙烯膜PVDF上,然后对转移完的PVDF膜进行封闭,加抗待测蛋白的一抗反应,加生物素标记的二抗反应,再加入亲和素标记的荧光量子团进行反应,最后进行结果鉴定;本发明专利技术在传统免疫印迹分析的基础上引入亲和素化的荧光量子点,简化了操作步骤,灵敏度很高,利于进行微量目标蛋白的检测分析。本法将微量蛋白量的信号转化为光信号,再将光信号转化为数字信号,通过建立标准曲线,达到定量分析微量蛋白的目的。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及用亲和素化荧光量子团做标记的免疫印迹分析检测微量蛋白的 方法,特别强调了用亲和素化荧光量子团做标记时的高灵敏度及实验结果的可 保存性,属于免疫检测

技术介绍
免疫印迹法(Western blotting)是一种将高分辨率凝胶电泳和免疫化学分析 技术相结合的杂交技术。免疫印迹法具有分析容量大、敏感度高、特异性强等 优点,是检测蛋白质特性、表达与分布的一种最常用的方法,如组织抗原的定 性定量检测、多肽分子的质量测定及病毒的抗体或抗原检测等。但传统的免疫 印迹方法只能做定性或半定量分析,在做更深入的分析时受到一定限制,本发 明在传统免疫印迹方法的基础上引入CdTe (635nm)荧光量子点,把待测目标 蛋白量的信号转化为光信号,最后转化为数字信号,通过建立标准曲线,以达 到定量分析的目的。
技术实现思路
(一) 要解决的技术问题本专利技术旨在建立一个以CdTe荧光为信号的免疫印迹(western blotting)蛋 白分析方法。本专利技术利用量子点的荧光信号,提高免疫印迹分析方法的灵敏度、 准确度,建立标准曲线达到蛋白定量分析的目的。(二) 技术解决方案 ,首先将本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用亲和素化的荧光量子标记的免疫印迹定量检测蛋白的方法,其特征是首先将待测蛋白跑电泳,跑完电泳的凝胶进行半干式western blotting蛋白转移,将凝胶中的待测蛋白转移至聚偏二氟乙烯膜PVDF上,然后对转移完的PVDF膜进行封闭, 加抗待测蛋白的一抗反应,加生物素标记的二抗反应,再加入亲和素标记的荧光量子团进行反应,最后进行结果鉴定; (一)亲和素化荧光量子团的制备 (1)BSA变性: 将16.5mg BSA溶于10mL双蒸水中,搅拌下加入0.42 mg NaBH↓[4],室温下反应1h,60-80℃下加热20min分解过量的NaBH↓[4],B...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:胥传来许定花金征宇彭池方刘丽强陈伟袁媛
申请(专利权)人:江南大学
类型:发明
国别省市:32[中国|江苏]

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