一种高性能的人尿液微量白蛋白检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种高性能的人尿液微量白蛋白检测试剂盒。本发明专利技术的试剂盒，包括试剂2，所述试剂2为标记有兔抗人白蛋白多克隆抗体的胶乳颗粒溶液；其中，所述胶乳颗粒粒径范围为150nm～350nm，每升试剂2中抗体的用量为12ml～22ml。本发明专利技术可替代进口试剂，节约病患开支；同时能够提高检测效率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及的是生物
，具体涉及的是一种高性能的人尿液微量白蛋白检测试剂盒。
技术介绍
人体代谢正常情况下，尿中的白蛋白极少，具体到每升尿白蛋白不超过20mg(<20mg/L)，所以叫微量白蛋白。如果在体检后发现尿中的微量白蛋白在20mg/L-200mg/L范围内，就属于微量白蛋白尿，如果患者能够经过规范的修复肾单位，逆转纤维化治疗，尚可彻底修复肾小球，消除蛋白尿，尿常规尿蛋白的显示为阴性(-)或(+-)。而当尿中微量白蛋白超过200mg/L时，就应该引起注意了，此时证明肾病患者已有大量白蛋白漏出，可能出现低蛋白血症，肾病发展离不可逆期只有一步之遥，尿常规测试尿蛋白阳性(+)-(+++)，如果不及时进行医治，就会进入尿毒症期。检查尿微量白蛋白的临床意义何在？临床中，通常应用尿微量蛋白指标来监测肾病的发生。尿微量蛋白的检测是早期发现肾病最敏感、最可靠的诊断指标。通过尿微量白蛋白的数值，结合发病情况、症状以及病史陈述就可以较为准确的诊断病情，判断病情进入了纤维化那个阶段。微量白蛋白尿也是整个血管系统改变的征象，并可认为是动脉病变的“窗口”，因为它是肾脏和心血管系统改变的早期指征，故而急需开发一种能够检测人尿液微量白蛋白的试剂盒，但目前市面上检测微量白蛋白的试剂盒普通存在着线性范围较低，抗原过剩不够的现象。
技术实现思路
为了改善上述存在问题，本专利技术提供了一种高性能的人尿液微量白蛋白检测试剂盒。为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：一种高性能的人尿液微量白蛋白检测试剂盒，包括试剂2，所述试剂2为标记有兔抗人白蛋白多克隆抗体的胶乳颗粒溶液。其中，试剂1选用常规的磷酸盐缓冲液、Good’s缓冲液或甘氨酸缓冲液即可。值得说明的是，本专利技术是针对试剂盒中的试剂2进行改进，然而试剂1选用市面上的常用试剂均可。由于试剂2生产中过低的抗体使用量，在满足样本抗体比例不变的情况下，需要样本稀释比例提高，导致过低的样本量，试剂灵敏度无法满足临床使用。抗体量过大，在标记过程中容易导致胶乳凝聚，试剂批间差异难以控制，并且试剂成本过高，无法接受。胶乳粒径过小，试剂灵敏度无法保证，胶乳粒径过大，胶乳微球颗粒悬浮受到影响，容易沉降，故而，本专利技术的胶乳颗粒粒径范围为150nm～350nm，每升试剂2中抗体的用量为12ml～22ml。具体地，本专利技术是采用化学偶联方法将兔抗人白蛋白多克隆抗体标记在胶乳颗粒上。作为一种优选，所述试剂盒对样本进行检测时，样本与抗体的体积比为1:12～1：22。通过上述限定，能够避免样本与抗体比例过高或过低，因为样本与抗体比例过高，将导致反应体系中抗原过多，降低试剂的抗原过剩范围甚至线性范围；过低时，将导致反应体系中抗原量太少，试剂灵敏度无法满足临床使用。所述试剂盒是基于胶乳免疫比浊法检测人尿液微量白蛋白，其线性范围为6.0㎎/L～1000.0㎎/L，抗原过剩范围达到50000㎎/L。具体地，所述兔抗人白蛋白多克隆抗体为Dako公司生产的兔抗人白蛋白多克隆抗体，或为GeneTex公司生产的兔抗人白蛋白多克隆抗体。另外，所述试剂盒适用于具有自动样本稀释功能的全自动分析仪器，如迪瑞、迈瑞、Roche、Hitachi、Olympus等多种全自动生化分析仪。本专利技术具有以下优点及有益效果：1、使用本专利技术的试剂盒对人尿液中的微量白蛋白进行测定，因线性范围较进口试剂提高3倍，使用时大幅度减少了需要人工稀释复测的样本数量，大幅度节约了人力和试剂，极大地提高了检测效率，并节约了成本。2、本专利技术的试剂盒抗原过剩范围广，有效避免了临床结果被低估甚至假阴性结果的出现，测定结果可靠性相比进口试剂更高。3、本专利技术采用成熟的化学偶联胶乳标记方法，能够规模化生产，且能够配套市面上绝大多数自动化分析仪器使用，便于推广使用。4、采用本专利技术的试剂盒进行检测，可替代进口试剂，节约病患开支。附图说明图1为本专利技术-实施例1的线性稀释图。图2为本专利技术-实施例2的线性稀释图。图3为本专利技术-实施例3的线性稀释图。图4为本专利技术-实施例4的线性稀释图。图5为本专利技术-实施例5的线性稀释图。图6为本专利技术-实施例6的线性稀释图。图7为本专利技术-实施例7的线性稀释图。图8为本专利技术-实施例8的线性稀释图。图9为本专利技术-实施例9的线性稀释图。图10为本专利技术-实施例10的线性稀释图。图11为本专利技术-实施例11的线性稀释图。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步说明，但本专利技术的实施方式不限于下列实施例。由于正常人尿液中白蛋白含量较低，通常＜20㎎/L，而免疫比浊法的检测极限通常为5㎎/L，用于检测血液中白蛋白的免疫比浊法试剂用于检测尿液的话，显然灵敏度不够，即由于检测极限与阴阳性分界点很接近，正常人低于检测极限会出现大量的零值及负值，早期病患也会因为阴阳性分界点灵敏度底测试重复性不好容易漏诊。所以该项目必须采用灵敏度更高的检测方法，同样在高通量的全自动分析仪器上，目前在国内外用于该项目研究的积水医疗科技的尿微量白蛋白试剂即为胶乳免疫比浊法试剂，胶乳免疫比浊法检测的灵敏度高、结果稳定。但是，单纯的胶乳免疫比浊法试剂提高灵敏度的同时，降低了试剂检测线性范围。大量肾病样本超过试剂检测线性范围需要手工稀释后重复测定，浪费人力及试剂。多数全自动生化分析仪和特定蛋白分析仪都具有样本自动稀释功能，能够在初次测定时就先自动稀释样本再参与后续反应，即避免了人工误差，又提高了效率，专利技术人通过研究发现使用恰当比例，由仪器自动预稀释样本，能够在保证检测灵敏度满足检测需求的同时大幅度扩宽试剂盒的检测线性范围。另外，免疫检测(包括胶乳免疫比浊)需要遵循海登博格原理，可见百度百科抗原抗体反应原理，抗原抗体的比例在检测过程中尤为重要，反应体系中抗体浓度一定时，随着抗原浓度的增加，抗原抗体复合物沉淀量增加，逐渐达到平衡，当抗原浓度过高时，将出现沉淀解聚甚至不沉淀的情况，即HOOK效应或抗原过剩现象(Antigenexcess)，在免疫检测系统中，该现象将导致被测物浓度被低估甚至假阴性结果出现。所有的免疫检测，包括胶乳免疫比浊，都必须避免高浓度样本出现HOOK效应。比如检测微量白蛋白就需要避免严重的糖尿病肾病患者或高血压肾病患者出现测定值被低估甚至假阴性结果。在样本与试剂2比例一定的情况下，试剂2中抗体的使用量以及效价对于试剂抵抗HOOK效应的能力(即抗原过剩范围)至本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高性能的人尿液微量白蛋白检测试剂盒，包括试剂2，其特征在于：所述试剂2为标记有兔抗人白蛋白多克隆抗体的胶乳颗粒溶液；其中，所述胶乳颗粒粒径范围为150nm～350nm，每升试剂2中抗体的用量为12ml～22ml。

【技术特征摘要】
1.一种高性能的人尿液微量白蛋白检测试剂盒，包括试剂2，其特征在于：所述试剂2为
标记有兔抗人白蛋白多克隆抗体的胶乳颗粒溶液；
其中，所述胶乳颗粒粒径范围为150nm～350nm，每升试剂2中抗体的用量为12ml～
22ml。
2.根据权利要求1所述的一种高性能的人尿液微量白蛋白检测试剂盒，其特征在于，所
述试剂盒对样本进行检测时，样本与抗体的体积比为1:12～1：22。
3.根据权利要求1或2所述的一种高性能的人尿液微量白蛋白检测试剂盒，其特征在
于，采用化学偶联方法将兔抗人白蛋白多克隆抗体标记在胶乳颗粒上。
4.根据权利要求1或2所述的一种高性能的人尿液微量白蛋白检测试剂盒，其特征在
于，所述试剂盒是基于胶乳免...

【专利技术属性】
技术研发人员：骆春梅，王钊，
申请(专利权)人：柏荣诊断产品上海有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31