本发明专利技术提供一种尿微量白蛋白(mAlb)检测试剂盒，所述试剂盒基于胶乳增强免疫比浊法，为液体双试剂，包括试剂R1与R2，所述试剂R1为反应剂，试剂R2为含有白蛋白免疫胶乳颗粒的溶液，其特点在于应用化学方法交联，通过水溶性碳化二亚胺(EDC)与N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)使羊抗人白蛋白抗体(也称羊抗人mAlb抗体)与羧化聚苯乙烯胶乳共价交联，形成mAlb抗体胶乳试剂。本试剂灵敏度高，特异性强，试剂配制简单，值得进一步推广使用。
【技术实现步骤摘要】
： 本专利技术属于生物
，具体涉及一种尿微量白蛋白（mAlb)检测试剂盒及其 制备。
技术介绍
： 微量白蛋白尿是指在尿中出现微量白蛋白。白蛋白是一种血液中的正常蛋白质， 但在生理条件下尿液中仅出现极少量白蛋白。微量白蛋白尿反映肾脏异常渗漏蛋白质。尿 微量白蛋白的增高多见于糖尿病肾病、高血压、妊娠子痫前期，是肾损伤的早期敏感指标。 无论哪种疾病引起的尿微量白蛋白都是因起始原因不同造成的肾脏固有细胞的损伤，使肾 脏固有细胞的结构发生改变，功能随结构的变化而变化，在尿液中的体现。当发现尿微量白 蛋白在20mg/L~200mg/L范围内，尿常规尿蛋白的显示为阴性（-)或（+-)，就属于微量白 蛋白尿，说明肾脏已经损伤。而当尿中微量白蛋白超过200mg/L时，尿常规测试尿蛋白阳性 (+)~（+++)，此时证明机体已有大量白蛋白漏出，可能出现低蛋白血症，肾病发展离不可 逆期只有一步之遥，如果不及时进行医治，就会进入尿毒症期。临床检查内容一般包括免疫 功能障碍评估，炎症状态监测，心血管风险评估和类风湿性关节炎及链球菌感染等各个方 面。 微量白蛋白尿也是整个血管系统改变的征象，并可认为是动脉病变的"窗口"，因 为它是肾脏和心血管系统改变的早期指征。 尿微量白蛋白可通过免疫浊度法，免疫荧光法，放射免疫法，酶免疫法等多种方法 进行测定。放射免疫法敏感度高，特异性强，但具有放射性污染，试剂保存期短等缺点。国 内目前采用最多的尿微量白蛋白检测方法仍为ELISA法，但酶标法的操作步骤多，故重复 性较差。白蛋白致敏羧化聚苯乙烯胶乳，建立免疫胶乳凝集抑制试验以测定尿微量白蛋白， 具有快速、特异、简便、价廉的优点。
技术实现思路
： 本专利技术的目的在于，大量制备mAlb抗体胶乳试剂，使用所获得的mAlb抗体胶乳试 剂制备尿微量白蛋白检测试剂盒。 本专利技术的技术方案：应用化学方法交联，通过水溶性碳化二亚胺（EDC)与N-羟基 琥珀酰亚胺（NHS)使羊抗人mAlb抗体与羧化聚苯乙烯胶乳共价交联，制备mAlb抗体胶乳 试剂，利用获得的mAlb抗体胶乳试剂，制备尿微量白蛋白检测试剂盒。 本专利技术中，包括mAlb抗体胶乳试剂的制备及尿微量白蛋白检测试剂盒的制备。具 体操作如下： mAlb抗体胶乳试剂的制备： 1.相关缓冲液的准备 〇? 〇lmol/L，PH7. 2PBS缓冲液的准备：取800ml去离子水溶解8g氯化钠，0? 2g氯 化钾，1. 44g磷酸一氢钠和0. 24g磷酸二氢钾，0. 1 %盐酸调PH至7. 2,用去离子水定容至 1L，15psi湿热灭菌 20min。 〇? 〇lmol/L，PH7. 6PBS缓冲液的准备：取800ml去离子水溶解8g氯化钠，0? 2g氯 化钾，1. 44g磷酸一氢钠和0. 24g磷酸二氢钾，0. 1 %盐酸调PH至7. 6,用去离子水定容至 1L，15psi湿热灭菌 20min。 2.mAlb抗体胶乳试剂的配制 原料：在粒径为200nm，浓度为10%羧化聚苯乙烯胶乳10ml中，加入0? 01mol/L， PH7. 2磷酸盐缓冲液（PBS) 10ml，NHS20mg与EDC60mg，室温搅动30min后，37°C恒温水浴 反应1小时，2-8°C离心（llOOOrpm，30min)，倾去上清液，用0? 01mol/L，PH7. 2磷酸盐缓冲液 (PBS)恢复至原体积。加入500mg/L羊抗人mAlb抗体溶液2. 0ml，NHS30mg与EDC120mg， 室温搅动30min后，37°C恒温水浴反应2小时，加入0. 4mol/L、PH8. 2甘氨酸溶液2. 0ml反 应20min进行淬灭。2_8°C离心（11000rpm，30min)，倾去上清液，用0? 01mol/L，PH7. 6磷酸 盐缓冲液（PBS)洗涤2次后，用同样的缓冲液配成浓度为1%胶乳试剂，以0. 1% (重量体 积比）叠氮钠溶液防腐，即为mAlb抗体胶乳试剂。 尿微量白蛋白检测试剂盒的制备： 本检测试剂盒包括试剂R1与R2,具体成分如下：【主权项】1. 本专利技术提供一种尿微量白蛋白（mA化）检测试剂盒，所述试剂盒基于胶乳增强免疫 比浊法，为液体双试剂，包括试剂R1与R2,所述试剂R1为反应剂，试剂R2为含有白蛋白免 疫胶乳颗粒的溶液，其特点在于应用化学方法交联，通过水溶性碳化二亚胺巧DC)与N-哲 基班巧酷亚胺（N服）使羊抗人白蛋白抗体（也称羊抗人mA化抗体）与駿化聚苯己締胶乳 共价交联，制备mMb抗体胶乳试剂。2. 根据权利要求1所述化学交联方法制备mMb抗体胶乳试剂，其特征在于所用的駿化 聚苯己締胶乳粒径为200nm。3. 根据权利要求1所述化学交联方法制备mMb抗体胶乳试剂，其特征在于所用的缓冲 液分别为0.Olmol/L，PH7. 2磯酸盐缓冲液（PBS)，0.Olmol/L，PH7. 6磯酸盐缓冲液（PBS)。4. 根据权利要求1所述化学交联方法制备mMb抗体胶乳试剂，其特征在于駿化聚苯己 締胶乳与羊抗人mA化抗体共价交联过程中分别添加水溶性碳化二亚胺巧DC)与N-哲基班 巧酷亚胺（N服）。5. -种尿微量白蛋白检测试剂盒其特征在于所述的液体双试剂，包括试剂R1与R2,两 者的成分如下：【专利摘要】本专利技术提供一种尿微量白蛋白(mAlb)检测试剂盒，所述试剂盒基于胶乳增强免疫比浊法，为液体双试剂，包括试剂R1与R2，所述试剂R1为反应剂，试剂R2为含有白蛋白免疫胶乳颗粒的溶液，其特点在于应用化学方法交联，通过水溶性碳化二亚胺(EDC)与N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)使羊抗人白蛋白抗体(也称羊抗人mAlb抗体)与羧化聚苯乙烯胶乳共价交联，形成mAlb抗体胶乳试剂。本试剂灵敏度高，特异性强，试剂配制简单，值得进一步推广使用。【IPC分类】G01N33-68【公开号】CN104849473【申请号】CN201510227239【专利技术人】王贤俊, 郑蓓蕾, 郭二豪, 江新涛 【申请人】王贤俊【公开日】2015年8月19日【申请日】2015年5月2日本文档来自技高网...
【技术保护点】
本专利技术提供一种尿微量白蛋白(mAlb)检测试剂盒，所述试剂盒基于胶乳增强免疫比浊法，为液体双试剂，包括试剂R1与R2，所述试剂R1为反应剂，试剂R2为含有白蛋白免疫胶乳颗粒的溶液，其特点在于应用化学方法交联，通过水溶性碳化二亚胺(EDC)与N‑羟基琥珀酰亚胺(NHS)使羊抗人白蛋白抗体(也称羊抗人mAlb抗体)与羧化聚苯乙烯胶乳共价交联，制备mAlb抗体胶乳试剂。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王贤俊，郑蓓蕾，郭二豪，江新涛，
申请(专利权)人：王贤俊，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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