一种纤维连接蛋白测定试剂盒及其使用方法技术

本发明专利技术涉及一种医疗器材的技术领域，具体地说，涉及一种用于测定血清中纤维连接蛋白含量的纤维连接蛋白测定试剂盒及其使用方法。包括试剂R和参考校准品，所述试剂R包括下述原料：5~300mmol/l磷酸盐缓冲液、0.5~16mmol/l乙二胺四乙酸二钠、0.1~5g/l结合有抗人纤维连接蛋白抗体多克隆抗体的聚苯乙烯胶乳颗粒、浓度为1%的牛血清白蛋白、浓度为0.1%的脱脂奶粉、浓度为0.9%的叠氮化钠和纯化水；所述参考校准品包括下述原料：5~200mmol/l三羟甲基氨基甲烷缓冲液、160~180mmol/l乙二胺四乙酸二钠、2~5mmol/l广谱杀菌剂、重组人纤维连接蛋白纯品和纯化水。试剂为单一试剂，内含的抗体效价高，亲和力好，特异性强，稳定性好，批间差小，有效期长，试剂在2~8℃密闭避光可稳定贮存18个月，且灵敏度高，检测精度高。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及一种医疗器材的
，具体地说，涉及一种用于测定血清中纤维连接蛋白含量的纤维连接蛋白测定试剂盒及其使用方法。包括试剂R和参考校准品，所述试剂R包括下述原料：5~300mmol/l磷酸盐缓冲液、0.5~16mmol/l乙二胺四乙酸二钠、0.1~5g/l结合有抗人纤维连接蛋白抗体多克隆抗体的聚苯乙烯胶乳颗粒、浓度为1%的牛血清白蛋白、浓度为0.1%的脱脂奶粉、浓度为0.9%的叠氮化钠和纯化水；所述参考校准品包括下述原料：5~200mmol/l三羟甲基氨基甲烷缓冲液、160~180mmol/l乙二胺四乙酸二钠、2~5mmol/l广谱杀菌剂、重组人纤维连接蛋白纯品和纯化水。试剂为单一试剂，内含的抗体效价高，亲和力好，特异性强，稳定性好，批间差小，有效期长，试剂在2~8℃密闭避光可稳定贮存18个月，且灵敏度高，检测精度高。【专利说明】
: 本专利技术涉及一种医疗器材的
，具体地说，涉及一种用于测定血清中纤维连接蛋白含量的纤维连接蛋白测定试剂盒及其使用方法。
技术介绍
: Fn是由二个亚基组成的一种α2糖蛋白，产生于肝细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞。在体内以可溶性与不溶性两种形式存在，前者分布于血浆与体液中，血液中Fn主要来自血管内皮细胞，此种Fn以PFn表示，后者分布在细胞表面及多种组织，特别是伴有上皮细胞及血管内皮的基底膜，是结缔组织的一种主要成分，用CFn表示。PFn是单核~巨噬细胞系统主要调理素，主要功能之一是作为巨噬细胞及网状内皮细胞吞噬作用的一种递质，促进网状内皮细胞对纤维蛋白、纤维蛋白原~纤维蛋白复合物、胶原碎片、受损细胞碎征、细菌及非细菌性毒性物质的调理与清除。CFn为结缔组织的基质蛋白质，在肝脏中和胶原纤维分布一起，肝纤维化时水平升高。PFn含量同时也是很多疾病的标志性判断依据，例如，多数急性乙型肝炎患者及少数慢性乙型肝炎患者住院期间血清PFn含量有上升过程及下降过程，意味着往往伴有血清e抗原转换或病情得到控制，血清中PFn含量检测为急性乙型肝炎与慢性乙型肝炎急性发作时的一钟鉴别方法之一，对预后的判断也有重要意义；肝硬化患者术后一天内血清中PFn含量一天内都明显低于手术前，术后7天又均有不同程度的回升，说明手术对血清中PFn含量变化有直接影响，血清中PFn含量回升是患者临床症状好转的指标；针对妊娠高血压综合症患者，多在孕20周以后出现临床症状，母婴已受到不同程度的损伤，如能加强产期监测，早于临床症状出现之前预测疾病的发生，对减少并发症，降低母婴死亡率具有重要意义，纤维 连接蛋白在内皮细胞粘附、形态维护和迁移中起重要作用，已被确认是血管内皮细胞损伤的敏感指示之一；冠心病患者血清中PFn含量升高，这种高血清中PFn含量一方面促进坏死心肌的创伤修复，另一方面由于动脉血管的不良状态导致促进血小板粘附、聚集成血栓，进一步加重心肌的损害，血清中PFn含量的测定对判断血液中高凝状态和疾病预后的一定意义。
技术实现思路
: 本专利技术要解决的技术问题是，提供一种灵敏度高，检测精度高，应用范围广的纤维连接蛋白测定试剂盒及其使用方法。为解决上述技术问题，本专利技术采用这样一种纤维连接蛋白测定试剂盒:包括试剂R和参考校准品，所述试剂R包括下述原料:5~300mmol/l磷酸盐缓冲液、0.5~16mmol/l乙二胺四乙酸二钠、0.1~5g/1结合有抗人纤维连接蛋白抗体多克隆抗体的聚苯乙烯胶乳颗粒、浓度为1%的牛血清白蛋白、浓度为0.1%的脱脂奶粉、浓度为0.9%的叠氮化钠和纯化水； 所述参考校准品包括下述原料:5~200_ο1/1三羟甲基氨基甲烷缓冲液、160~l80mmol/l乙二胺四乙酸二钠、2~5mmol/l广谱杀菌剂、重组人纤维连接蛋白纯品和纯化水。本专利技术与现有技术中的纤维连接蛋白测定试剂盒相比，具有以下优点:试剂为单一试剂，节约试剂位，内含的抗体效价高，亲和力好，特异性强，稳定性好，批间差小，有效期长，试剂在2?8°C密闭避光可稳定贮存18个月，且灵敏度高，检测精度高。作为优选，所述试剂R包括下述原料:3(Tl50mmol/l磷酸盐缓冲液、l(Tl5mmol/I乙二胺四乙酸二钠、2?4g/l结合有抗人纤维连接蛋白抗体多克隆抗体的聚苯乙烯胶乳颗粒、浓度为1%的牛血清白蛋白、浓度为0.1%的脱脂奶粉、浓度为0.9%的叠氮化钠和纯化水；所述参考校准品包括下述原料:2(Tl50mmOl/l三羟甲基氨基甲烷缓冲液、165?170mmol/l乙二胺四乙酸二钠、2?4mmol/l广谱杀菌剂、重组人纤维连接蛋白纯品和纯化水，配比精确，广品灵敏度闻。作为又一优选，所述结合有抗人纤维连接蛋白抗体多克隆抗体的纳米微球直径为5(Tl50nm，成本较低，较为常见。为解决上述技术问题，本专利技术采用这样一种纤维连接蛋白测定试剂盒的使用方法:它包括以下步骤:1)、试剂R的制备，在5?300mmol/l磷酸盐缓冲液中依次加入质量比为10:2?10:4的聚苯乙烯胶乳颗粒和抗人纤维连接蛋白抗体多克隆抗体，混合均匀，并在室温下振荡I小时，形成第一胶乳，此间配制好封闭液，在第一乳胶中加入封闭液封闭I小时，然后离心去上清，形成半成品试剂R，配制好第二胶乳，用第二胶乳稀释半成品试剂R至浓度为0.25%，形成成品试剂R ;2)、参考校准品的制备，根据需要的浓度将5?200mmol/l三羟甲基氨基甲烷缓冲液、16(Tl80mmOl/l乙二胺四乙酸二钠、2飞mmol/1广谱杀菌剂、重组人纤维连接蛋白纯品和纯化水混合均匀即可形成成品参考校准品。本专利技术与现有技术中的纤维连接蛋白测定试剂盒的使用方法相比，具有以下优点:抗原纤维蛋白和特异性抗体抗人纤维连接蛋白抗体多克隆抗体胶乳颗粒相结合，形成了不溶性免疫复合物，使反应产生浑浊，其浊度高低即透光度减少、吸光度增加反映血清样品中纤维蛋白的浓度，参照标准曲线即可计算出样本中纤维连接蛋白的含量。操作简单，适用于手工和自动化生化仪。采用多浓度校准品，定值可靠，使用方便，测定结果更可靠。精度度好，批内CV ( 10.0%，批间CV ( 10.0%。作为设置，所述封闭液包括下述原料:5?300mmol/l磷酸盐缓冲液和1%的牛血清白蛋白。作为进一步地设置，所述第二乳胶包括下述原料:5?300_Ο1/1磷酸盐缓冲液、0.5"l6mmol/l乙二胺四乙酸二钠浓度为0.1%的脱脂奶粉、浓度为0.9%的叠氮化钠和纯化水。作为优选，所述抗人纤维连接蛋白抗体多克隆抗体包括羊抗抗人纤维连接蛋白抗体多克隆抗体或兔抗抗人纤维连接蛋白抗体多克隆抗体或鼠抗抗人纤维连接蛋白抗体多克隆抗体，成本较低，较为常见。【专利附图】【附图说明】: 图1是本专利技术的一种纤维连接蛋白测定试剂盒的实施例一的样本曲线图； 图2是本专利技术的一种纤维连接蛋白测定试剂盒的实施例二的样本曲线图； 图3是本专利技术的一种纤维连接蛋白测定试剂盒的实施例三的样本曲线图；【具体实施方式】: 下面结合具体实施例对本专利技术作进一步说明。本专利技术的一种纤维连接蛋白测定试剂盒，包括试剂R和参考校准品，所述试剂R包括下述原料:5?300mmol/l磷酸盐缓冲液、0.5?16mmol/l乙二胺四乙酸二钠、0.l?5g/l结合有抗人纤维连接蛋白抗体多克隆本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种纤维连接蛋白测定试剂盒，包括试剂R和参考校准品，其特征在于，所述试剂R包括下述原料：5~300mmol/l磷酸盐缓冲液、0.5~16mmol/l乙二胺四乙酸二钠、0.1~5g/l结合有抗人纤维连接蛋白抗体多克隆抗体的聚苯乙烯胶乳颗粒、浓度为1%的牛血清白蛋白、浓度为0.1%的脱脂奶粉、浓度为0.9%的叠氮化钠和纯化水；所述参考校准品包括下述原料：5?200mmol/l三羟甲基氨基甲烷缓冲液、160?180mmol/l乙二胺四乙酸二钠、2~5mmol/l广谱杀菌剂、重组人纤维连接蛋白纯品和纯化水。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：黄益峰，
申请(专利权)人：浙江爱康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：