一种PCR反应液及试剂盒和PCR方法技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体涉及一种PCR反应液及试剂盒和PCR方法。所述PCR反应液，包括如下原料制备而成：二甲亚砜，牛血清蛋白，DNTP，10×PCR buffer，溴酚蓝溶液，溶质体积百分数为30％的甘油溶液和rTaq酶。本发明专利技术优化了PCR实验的PCR反应液，特别是加入一定比例的甘油溶液，并加入BSA与DMSO的组合，保证了Tag酶的稳定性及活性，并减少引物二聚体的形成，减少PCR反应液配置时间，在琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物时，只需加入核酸染料即可检测，可以大量节省PCR产品检测时间，提高PCR的扩增效率。

【技术实现步骤摘要】
-种PCR反应液及试剂盒和PCR方法
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种PCR反应液及试剂盒和PCR方法。
技术介绍
聚合酶链式反应（Polymerasechainreaction，PCR)是一种体外快速扩增特定 DNA片段的技术，它是现代分子生物学最重要的手段之一。其基本原理是根据获诺贝尔 1953年生理学奖的DNA双螺旋模型所建立的体细胞复制的机制以及双链DNA在体外可随温 度变化发生变性与复性的特点设计。1985年Randll.K.Skaii等利用KlenowDNA聚合酶建 立了聚合酶链式反应技术，并将其应用于镰刀形贫血病的基因诊断。它是80年代分子生物 学领域的一项革命性突破，被誉为分子生物学资源发展史上的又一里程碑。此项技术一经 问世就因其操作简单、快速、灵敏度高和特异性强等优点迅速在与分子生物学相关的学科 得到广泛应用，如分子生物学研究、医学检验、动植物检验、法医鉴定及考古等各个领域。 在PCR过程中，DNA聚合酶起着关键性作用。目前已有100多个DNA聚合酶的相 关基因被克隆和测序，Thermusaquaticus是一种水生嗜热菌，从该菌中分离出的DNA聚合 酶（TaqDNA聚合酶）具有催化以DNA为模板合成DNA的功能。 TaqNDA聚合酶是Mg2+依赖性酶，该酶的催化活性对Mg2+浓度非常敏感。研究表 明，Mg2+浓度低于ImM，dNTP过多，鳌合Mg2+作用强时，Mg2+对TaqDNA聚合酶的催化作用几 乎丧失，不产生扩增产物。随着Mg2+浓度的增加，其催化作用增强，扩增产物增多，但产物浓 度增大的同时，背景也明显增强。 常规的PCR扩增体系配置，往往是将DNTP、Buffer、rTaq酶等试剂单独保存，待要 进行PCR扩增时，将样品分别加到同一PCR管中，在操作过程中除了经常忘记加入个别试剂 的缺点外，多次的取用会对试剂造成污染，影响后续使用。因此，急需研发一种PCR扩增体 系对于减少PCR扩增体系配置时间以及提高PCR体系配置的准确性和减少PCR扩增过程中 的污染。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是：提供一种减少PCR反应液配置时间的含有溴酚蓝 指示剂的PCR反应液的配置方法。 为了解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案为：提供一种PCR反应液，包括如 下的原料制备而成：二甲亚砜，牛血清蛋白，DNTP，10XPCRbuffer，溴酚蓝溶液，溶质体积 百分数为30%的甘油溶液和rTaq酶。 本专利技术的另一技术方案为提供一种PCR试剂盒，其包含上述的PCR反应液。 本专利技术的又一技术方案为提供一种PCR方法，包含使用上述的PCR反应液的步骤。 本专利技术的有益效果在于：本专利技术优化了PCR实验的PCR反应液，特别是加入一定比 例的甘油溶液，以保证rTaq酶的活性，加入BSA与DMS0的组合保证了Tag酶的稳定性及活 性，并减少引物二聚体的形成，减少PCR反应液配置时间，在琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物 时，只需加入核酸染料即可检测，与常规的PCR检测相比，使用本专利技术PCR反应液无需再加 入溴酚蓝指示剂，可以大量节省PCR产品检测时间，提高PCR的扩增效率，适用于大批量PCR 产品的检测。 【附图说明】 图1为本专利技术【具体实施方式】中的转基因水稻GUS基因结果检测图； 其中泳道1，2是常规PCR方法配置的PCR检测结果，泳道3、4是含有溴酚蓝指示 剂的PCR反应液的PCR检测结果，泳道5是DNAmarker。 【具体实施方式】 为详细说明本专利技术的
技术实现思路
、所实现目的及效果，以下结合实施方式并配合附 图予以说明。 本专利技术最关键的构思在于：本专利技术在PCR反应液中加入甘油、BSA与DMS0有保证 Tag酶的稳定性及活性，制备出可以直接使用的PCR混合液提高PCR的扩增效率。 实施例1 -种PCR反应液，包括如下原料制备而成：6_8li 1二甲亚砜，6_8li 1质量体积百分 数为0.1%的牛血清蛋白溶液，9-lliil lOmMDNTP溶液，18-22iil 10XPCRbuffer，2-4iil 溴酚蓝溶液，45-55 ill溶质体积百分数为30%甘油溶液和4-6 ill rTaq酶。 传统配制PCR反应液时，将DNTP、Buffer、rTaq酶等试剂进行混合，制备出可以直 接使用的PCR混合液，将PCR混合液放于-20°C保存，rTaq酶的活性会下降。因此，本专利技术 在混合液中加入一定比例的甘油溶液和BSA与DMS0的组合保证了Tag酶的稳定性及活性， 并减少引物二聚体的形成。 一种PCR反应液，所述反应液由如下组分混合而成：6ii1二甲亚砜，1质量体积 百分数为0.1%的牛血清蛋白溶液,9iillOmMDNTP溶液，18iil10XPCRbuffer，2iil溴 酚蓝溶液，45ill溶质体积百分数为30%甘油溶液和4illrTaq酶。 一种PCR反应液，所述反应液由如下组分混合而成：8ii1二甲亚砜，1质量体积 百分数为0.1%的牛血清蛋白溶液，111111011110见13溶液，2211110\?〇?131^€61'，4111溴 酚蓝溶液，55ill溶质体积百分数为30%甘油溶液和6illrTaq酶。 实施例2 -种PCR反应液，所述反应液包括7. 5 ii 1二甲亚砜，7. 5 ii 1质量体积百分数为 0.1%牛血清蛋白溶液lOiil lOmMDNTP溶液，20iil 10XPCRbuffer，5iil溴酚蓝溶液， 47 ill溶质体积百分数为30%甘油溶液和5 ill rTaq酶。将配置好的溶液混匀后离心，存 放于-20°C冰箱中。 进一步的，上述的PCR反应液中，所述10XPCR buffer包含50-150mM的PH为8.3 的Tris-Hcl，250-750mM Kcl和5-20mM Mgcl2。 进一步的，上述的PCR反应液中，所述溴酚蓝溶液包含体积百分数为30 %的甘油 和质量体积百分数为〇. 05%溴酚蓝粉末。 -种PCR试剂盒，其特征在于，其包含上述任一项的PCR反应液。 上述PCR反应液的使用：从冰箱中取出2XPCR反应液，配置PCR体系，20iU的 ?〇?体系配置如下：2父？〇?反应液10111，引物1?1111，引物？1111，转基因水稻基因组模 板1Ul，灭菌水7ill。进行PCR后，PCR程序如下； 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种PCR反应液，其特征在于，包括如下的原料制备而成：二甲亚砜，牛血清蛋白，DNTP，10×PCR buffer，溴酚蓝溶液，溶质体积百分数为30％的甘油溶液和rTaq酶。

【技术特征摘要】
1. 一种PCR反应液，其特征在于，包括如下的原料制备而成：二甲亚砜，牛血清蛋白， DNTP，10XPCRbuffer，溴酚蓝溶液，溶质体积百分数为30%的甘油溶液和rTaq酶。2. 根据权利要求1所述的PCR反应液，其特征在于，包括如下的原料制备而成：6-8 yl 二甲亚砜，6-8iil质量体积百分数为0. 1%的牛血清蛋白溶液，9-lliillOmM DNTP溶液， 18-22 ill 10 XPCR buffer，2-4 ill溴酚蓝溶液，45-55 ill溶质体积百分数为30 %甘油溶 液和 4-6 u 1 rTaq 酶。3. 根据权利要求1所述的PCR反应液，其特征在于，包括如下的原料制备而成：7. 5 yl 二甲亚砜，7. 5iil质量体积百分数为0. 1%牛血清蛋白溶液...

【专利技术属性】
技术研发人员：王清水，余彦，
申请(专利权)人：福建师范大学，
类型：发明
国别省市：福建;35